Optimization of isolation of cell-fetal DNA from plasma of pregnant women
Dotaz
Zobrazit nápovědu
Cílem této práce byla optimalizace neinvazivní detekce pohlaví plodu z maternální plazmy. Typ studie: Molekulární kvantitativní analýza pomocí gonozomálních sekvencí plodu z plazmy gravidních žen. Název a sídlo pracoviště: Ústav lékařské genetiky a fetální medicíny, Fakultní nemocnice Olomouc. Metodika: Do projektu bylo zahrnuto 475 vzorků DNA izolovaných z maternální plazmy periferní krve u žen v různých týdnech gravidity v rozmezí 4. t.g .– 37. t.g. Y chromozomální sekvence v lokusech AMELX/Y a TSPY byly testovány pomocí upravené kvantitativní fluorescenční PCR s využitím laserem indukované fluorescence a kapilární elektroforézy. Výsledky: Na základě hodnocení artificiálních genotypických směsí je metodika schopna rozlišt i 1% příměs Y chromozomálních sekvencí. Při vyšetřování vlastních vzorků bylo dosaženo ve 4,05 % falešné pozitivity a v 7,15 % falešné negativity zachycení Y sekvencí v maternální plazmě. Závěr: Vypracovaná metoda umožňuje s velkou citlivostí stanovit fetální pohlaví a je jí také možno dále využít k relativním kvantifikacím.
Objective of our study was optimization of noninvasive fetal sex detection from maternal plasma in pregnant women. STUDY DESIGN: Molecular DNA quantitative analyses in gonosomal loci. SETTING: The study was performed at Department of Medical Genetics and Fetal Medicine, University Hospital Olomouc. METHODS: Together 475 DNA samples isolated from maternal plasma in different weeks of pregnancy ranging from 4th w.g. to 37th w.g. Y chromosomal sequences in AMELY and TSPY were tested by refined quantitative fluorescent PCR using capillary electrophoresis. RESULTS: The method is able to distinguish 1% of Y chromosomal sequences of artificial mixtures. Investigation and assessment in cell free fetal DNA samples achieved 4.05% of false positivity and 7.15% of false negativity in Y sequence detection. CONCLUSION: Established method allows detecting fetal sex with high sensitivity and specificity. The method is possible to use also for quantitative purposes.
