Cílem retrospektivní části studie bylo a) nalezení optimálního klonu imunohistochemické (IHC) protilátky proti ALK proteinu, který bude mít dostatečnou senzitivitu a specificitu, aby jej bylo možné použít jako screeningové metody při vybírání případů nemalobuněčného karcinomu plic (NSCLC) pro následné testování přestavby genu ALK metodou fluorescenční in situ hybridizace (FISH) a b) zjištění diagnostické výtěžnosti „malých“ biopsií, tj. endobronchiálních, transbronchiálních a transtorakálních biopsií a cytobloků pro vyšetření přestavby genu ALK. Takto zjištěná optimální IHC metodika detekce exprese ALK proteinu (klon D5F3, Cell Signaling Technology, Danvers, MA, USA) byla následně ověřena v prospektivním rutinním vyšetřování pacientů s NSCLC. ALK status byl korelován s morfologickým vzhledem tumorů a s vybranými klinickými údaji. V retrospektivní části studie bylo metodami IHC a FISH vyšetřeno 170 případů EGFR-nemutovaných NSCLC. V prospektivní části studie bylo IHC vyšetřeno 557 případů a FISH 76 případů NSCLC. Celkem bylo v retrospektivním souboru nalezeno 8/154 (5,2 %) případů s přestavbou genu ALK, při prospektivním vyšetřování pak 24/557 (4,3 %). Senzitivita a specificita zvolené IHC screeningové metody byly v retrospektivní části 100 % a 99 %, v prospektivní části pak 100 % a 80 %. Diagnostická výtěžnost „malých“ biopsií se v retrospektivní části pohybovala v závislosti na zvolené IHC variantě v rozmezí 74 – 80 %, v prospektivní části pak činila 88 %. U žádného prospektivně vyšetřovaného případu s pozitivní přestavbou genu ALK nebyla detekována mutace EGFR. Vysoká diagnostická výtěžnost vypovídá o možnosti testování ALK stavu i u “malých“ biopsií. Prevalence 5,2 % v retrospektivní části (EGFR nemutovaných případů) a 4,3 % v prospektivní části (bez znalosti EGFR mutace), morfologický vzhled tumorů (solidní a acinární typ, mucinózní či alespoň parciální hlenotvorba (extra- a/nebo intracelulární)), stejně tak jako i nižší průměrný věk a zastoupení pohlaví u pacientů s ALK pozitivními nádory v našem prospektivním souboru (57,5 let vs. 65,2 let, 8 mužů a 16 žen vs. 336 mužů a 197 žen) jsou v souladu s celosvětovými údaji.
The aim of the retrospective part of the study was a) to select an optimal clone of immunohistochemical (IHC) antibody against the ALK protein with specificity and sensitivity high enough to use this antibody as a screening method for selecting non-small cell lung cancer (NSCLC) cases for fluorescence in situ hybridization (FISH) testing of ALK gene rearrangement and b) to determine the diagnostic yield of “small” biopsies i.e. endobronchial, transbronchial and transthoracic biopsies and cytoblocks for ALK gene rearrangement testing. The best IHC method of ALK protein detection (clone D5F3, dilution 1:100, Cell Signaling Technology, Danvers, MA, USA) was then verified in prospective routine testing of patients with NSCLC. ALK status was correlated with tumor morphology and clinical data. In the retrospective part of the study, 170 EGFR-nonmutated cases of NSCLC were IHC and FISH tested. In the prospective part, 557 cases of NSCLC were tested by IHC and 76 by FISH. There were 8/154 (5.2%) cases with ALK gene rearrangement detected in the retrospective part and 24/557(4.3 %) in the prospective part. Sensitivity and specificity of the best IHC method were 100 % and 99 % in the retrospective part and 100 % and 80 % in the prospective part. The diagnostic yield of “small” biopsies was between 74 – 80 % retrospectively, depending on IHC variant, and 88 % prospectively. No case with ALK gene rearrangement detected prospectively had EGFR mutation. A high diagnostic yield confirms that ALK status testing can be used in this type of specimen. A prevalence of 5.2 % in the retrospective part (EGFR-nonmutated cases) and 4.3 % in the prospective part (without known EGFR mutation status), tumor morphology (solid and acinar type, mucinous type or at least partial mucin production (extra- and/or intracellular) as well as lower average age and male/female ratio of patients with ALK positive tumors in the prospective part (57.5 y vs. 65.2 y, 8 men and 16 women vs. 336 men and 197 women) are consistent with global data.
- Klíčová slova
- gen ALK, crizotinib,
- MeSH
- adenokarcinom diagnóza MeSH
- biopsie MeSH
- hybridizace in situ fluorescenční metody MeSH
- imunohistochemie MeSH
- inhibitory proteinkinas terapeutické užití MeSH
- interpretace statistických dat MeSH
- lidé MeSH
- nemalobuněčný karcinom plic * diagnóza MeSH
- prospektivní studie MeSH
- pyrazoly terapeutické užití MeSH
- retrospektivní studie MeSH
- translokace genetická MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- Publikační typ
- práce podpořená grantem MeSH
INTRODUCTION: The aim of our study was to search for new, readily available and statistically reliable cytological markers for differentiating benign and malignant follicular thyroid neoplasms pre-operatively. METHODS: Cohesiveness of tumour cells in cytology slides from a series of 58 follicular tumours diagnosed between 1998 and 2004 inclusive was studied, including 48 follicular adenomas, and eight minimally invasive and two widely invasive follicular carcinomas. Photomicrographs of the cytology slides were taken and the digital images were analysed using computer image analysis software. We evaluated the relative proportions of cells arranged in groups of various sizes. The cohesiveness of the cells in cytological smears was then correlated with the immunohistochemical expression of E-cadherin in corresponding histological slides. RESULTS: Cases from 15 men (26%) and 43 women (74%) with a mean age of 50 years (range, 19-79) were analysed. In follicular adenomas and carcinomas, respectively, isolated cells were seen in 16.8% and 24.7% (P = 0.028), groups of two to five cells in 9.7% and 11.5% (P = 0.145) and groups of more than five cells in 73.5% and 63.8% (P = 0.041). The mean cell count in groups with more than five cells was 46.5 and 27.0 in adenomas and carcinomas, respectively (P < 0.001). Cell cohesiveness, either as percentage of cells in groups of more than five (R(2) = 0.026) or as mean cell count per group of more than five (R(2) = 0.005), was not found to be dependent on the expression of E-cadherin. Using a threshold of 13% isolated tumour cells in cytological smears, follicular adenomas and carcinomas could be distinguished with 90% sensitivity and 41% specificity. CONCLUSIONS: Although we demonstrated a statistically significant difference in cell cohesion between follicular adenomas and carcinomas, these could not be distinguished in the clinical setting by evaluation of the percentage of isolated cells in cytological smears because the specificity was too low. The absence of correlation of cellular cohesiveness with E-cadherin expression indicates that other factors are probably responsible for the loss of cohesiveness observed in follicular thyroid malignancy.
- MeSH
- adenom chemie patologie MeSH
- buněčná adheze MeSH
- diferenciální diagnóza MeSH
- dospělí MeSH
- folikulární adenokarcinom chemie patologie MeSH
- imunohistochemie MeSH
- kadheriny analýza MeSH
- lidé středního věku MeSH
- lidé MeSH
- nádorové biomarkery analýza MeSH
- počítačové zpracování obrazu MeSH
- senioři MeSH
- tenkojehlová biopsie MeSH
- uzly štítné žlázy chemie patologie MeSH
- Check Tag
- dospělí MeSH
- lidé středního věku MeSH
- lidé MeSH
- mužské pohlaví MeSH
- senioři MeSH
- ženské pohlaví MeSH
- Publikační typ
- časopisecké články MeSH
- práce podpořená grantem MeSH
