BACKGROUND: Isoelectric focusing (IEF) is a method with an exquisite resolution, and coupled with affinity immunoblotting (AIB), it can provide superior sensitivity to detect monoclonal free light chains (FLC). METHODS: We tested the hypothesis that IEF/AIB is more sensitive and specific for monoclonal FLC detection in serum and urine samples than conventional methods, that is, electrophoresis (ELP), immunofixation (IF) and serum FLC ratio assessment. Investigation included 107 samples of 68 patients, among which 21 multiple myeloma patients were recently tested for minimal residual disease and 18 patients with AL amyloidosis. RESULTS: Monoclonal FLC were detected by IEF/AIB in 37% of serum samples negative for monoclonal FLC on ELP/IF. As for urine samples, significant advantage of the IEF/AIB over ELP/IF was not demonstrated. Considering both serum and urine results, IEF/AIB definitely revealed monoclonal FLC in 20/83 (24%) of ELP/IF-negative samples. FLC ratio was abnormally high (>1.65) in all 11 patients definitely positive for monoclonal FLC kappa by IEF/AIB but also in 16/47 (34%) IEF/AIB-negative samples. Abnormally low values (<0.26) were found only in 10/28 samples (36%) positive for monoclonal FLC lambda. Appropriate use of renal FLC ratio reference range reduced the number of presumably false positives (6/47, i.e. 13%) but not false negatives (17/28, i.e. 61%). CONCLUSIONS: The IEF/AIB method is more sensitive than IF and might be used in patients with negative IF results before deciding whether to proceed to minimal residual disease testing.

• MeSH
• imunoblotting metody   MeSH
• imunoelektroforéza metody   MeSH
• isoelektrická fokusace * metody   MeSH
• lehké řetězce imunoglobulinů * krev   moč   MeSH
• lidé středního věku MeSH
• lidé MeSH
• mnohočetný myelom moč   krev   MeSH
• paraproteinemie * moč   diagnóza   krev   MeSH
• senioři MeSH
• senzitivita a specificita MeSH
• Check Tag
• lidé středního věku MeSH
• lidé MeSH
• mužské pohlaví MeSH
• senioři MeSH
• ženské pohlaví MeSH
• Publikační typ
• časopisecké články MeSH
• srovnávací studie MeSH

• Klíčová slova
• NINLARO (ixazomib),
• MeSH
• inhibitory proteasomu terapeutické užití   MeSH
• lidé středního věku MeSH
• lidé MeSH
• lokální recidiva nádoru diagnostické zobrazování   farmakoterapie   MeSH
• mnohočetný myelom * farmakoterapie   krev   patologie   MeSH
• paraproteinemie farmakoterapie   krev   MeSH
• výsledek terapie MeSH
• Check Tag
• lidé středního věku MeSH
• lidé MeSH
• mužské pohlaví MeSH
• Publikační typ
• kazuistiky MeSH

• MeSH
• běžná variabilní imunodeficience diagnóza   etiologie   komplikace   mortalita   patologie   MeSH
• diferenciální diagnóza MeSH
• lidé středního věku MeSH
• lidé MeSH
• mnohočetný myelom * diagnostické zobrazování   farmakoterapie   krev   mortalita   patologie   MeSH
• paraproteinemie krev   MeSH
• sepse diagnóza   farmakoterapie   komplikace   MeSH
• Check Tag
• lidé středního věku MeSH
• lidé MeSH
• mužské pohlaví MeSH
• Publikační typ
• kazuistiky MeSH

• Klíčová slova
• NINLARO (ixazomib),
• MeSH
• inhibitory proteasomu terapeutické užití   MeSH
• lidé středního věku MeSH
• lidé MeSH
• lokální recidiva nádoru diagnostické zobrazování   farmakoterapie   MeSH
• mnohočetný myelom * farmakoterapie   krev   patologie   MeSH
• paraproteinemie farmakoterapie   krev   MeSH
• výsledek terapie MeSH
• Check Tag
• lidé středního věku MeSH
• lidé MeSH
• ženské pohlaví MeSH
• Publikační typ
• kazuistiky MeSH

• MeSH
• klinický obraz nemoci MeSH
• lidé MeSH
• mnohočetný myelom * diagnóza   MeSH
• paraproteinemie krev   MeSH
• příznaky a symptomy MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH

• MeSH
• elektroforéza sérových bílkovin * metody   přístrojové vybavení   MeSH
• klinická studie jako téma MeSH
• lidé MeSH
• paraproteinemie * diagnóza   krev   MeSH
• prediktivní hodnota testů MeSH
• senzitivita a specificita MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH

Východiska: Monoklonální gamapatie jsou charakteristické přítomností klonálních plazmocytů v kostní dřeni, nicméně cirkulující plazmatické buňky lze u významné části pacientů nalézt i v periferní krvi. Počet cirkulujících plazmatických buněk je nezávislým prognostickým faktorem asociovaným s kratším přežíváním, ale také může napomoci předvídat časný relaps. Příčina a mechanizmus vycestování klonálních plazmocytů z kostní dřeně stále není objasněna, nicméně může zahrnovat např. změny v expresi adhezivních molekul. Multiparametrická průtoková cytometrie umožňuje jednoduché a přesné stanovení zastoupení cirkulujících plazmocytů v jakékoli buněčné suspenzi, a to i při velmi nízkých počtech, vč. stanovení jejich fenotypu a potvrzení příslušnosti ke klonálním plazmocytům kostní dřeně. V současnosti však v klinických laboratořích není používán jednotný postup k analýze cirkulujících plazmocytů. Cíl: Souhrnná práce popisuje využití průtokové cytometrie v analýze cirkulujících plazmocytů v periferní krvi. Zaměřuje se na možnosti detekce pomocí různých přístupů a také na klinický význam stanovení těchto buněk s cílem standardizace analýz. Závěr: Multiparametrická průtoková cytometrie je vhodnou a dostatečně citlivou metodou pro detekci cirkulujících myelomových klonálních plazmocytů. Využití standardizovaného přístupu může vést ke stanovení a zavedení nového „průtokově cytometrického” diagnostického kritéria u suspektních případů plazmocelulární leukemie, a může být využito také v rámci prognostikace pacientů s monoklonální gamapatií. Mimoto, stanovení fenotypového profilu klonálních plazmocytů by mohlo napomoci objasnit jejich budoucí chování.

Background: Monoclonal gammopathies are characterized by presence of clonal plasma cells in the bone marrow, although peripheral blood circulating plasma cells can be found in a significant proportion of patients. The number of circulating plasma cells is an independent prognostic marker associated with shorter survival, but it can also help to predict early relapse. The reason and mechanism of plasma cell expansion from the bone marrow to enter peripheral blood is still not entirely clear, but possible changes in the expression of adhesion molecules are probably involved. Multiparametric flow cytometry allows simple and exact enumeration of circulating plasma cells in different types of cell suspensions, even in their low quantity. The phenotype profile and confirmation of clonality regarding to their bone marrow clonal counterparts should be verified as well. There is no uniform method used in clinical laboratories for circulating plasma cells analyses at this moment. Aim: Review is focused on use of multiparametric flow cytometry for circulating plasma cells analysis in peripheral blood. It is comparing possibilities of their detection by different methods and on clinical relevance of that assessment. The standardization of analyses is the main goal. Conclusion: Multiparametric flow cytometry is a very sensitive method for detection of circulating plasma cells, so using a standardized approach can lead to determination and implementation of the flow cytometry diagnostic threshold in plasma cell leukemia suspicious cases as well as in prognostication of monoclonal gammopathies patients. Moreover, analysis of plasma cells phenotypic profile could probably clarify their future behaviour.

• MeSH
• lidé MeSH
• paraproteinemie * diagnóza   krev   MeSH
• plazmatické buňky * fyziologie   patologie   MeSH
• plazmocelulární leukemie diagnóza   klasifikace   patologie   MeSH
• průtoková cytometrie MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• Publikační typ
• práce podpořená grantem MeSH
• přehledy MeSH

AIMS: Some types of monoclonal gammopathies are typified by a very limited availability of aberrant cells. Modern research use high throughput technologies and an integrated approach for detailed characterisation of abnormal cells. This strategy requires relatively high amounts of starting material which cannot be obtained from every diagnosis without causing inconvenience to the patient. The aim of this methodological paper is to reflect our long experience with laboratory work and describe the best protocols for sample collection, sorting and further preprocessing in terms of the available number of cells and intended downstream application in monoclonal gammopathies research. Potential pitfalls are also discussed. METHODS: Comparison and optimisation of freezing and sorting protocols for plasma cells in monoclonal gammopathies, followed by testing of various nucleic acid isolation and amplification techniques to establish a guideline for sample processing in haemato-oncology research. RESULTS: We show the average numbers of aberrant cells that can be obtained from various monoclonal gammopathies (monoclonal gammopathy of undetermined significance/light chain amyloidosis/multiple myeloma (MM)/MM circulating plasma cells/ minimal residual disease MM-10 123/22 846/305 501/68 641/4000 aberrant plasma cells of 48/30/10/16/37×106 bone marrow mononuclear cells) and the expected yield of nucleic acids provided from multiple isolation kits (DNA/RNA yield from 1 to 200×103 cells was 2.14-427/0.12-123 ng). CONCLUSIONS: Tested kits for parallel isolation deliver outputs comparable with kits specialised for just one type of molecule. We also present our positive experience with the whole genome amplification method, which can serve as a very powerful tool to gain complex information from a very small cell population.

• MeSH
• DNA izolace a purifikace   MeSH
• konzervace krve metody   MeSH
• krevní bankovnictví MeSH
• krevní banky MeSH
• kryoprezervace metody   MeSH
• lidé MeSH
• odběr vzorku krve metody   MeSH
• paraproteinemie krev   MeSH
• reagenční diagnostické soupravy MeSH
• RNA izolace a purifikace   MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• Publikační typ
• časopisecké články MeSH

Náplní sdělení je aktuální informace o přínosu nové, vysoce senzitivní metody analýzy imunoglobulinů séra (Hevylite™), umožňující separátní kvantitativní vyšetřování párů těžkých/lehkých řetězců imunoglobulinu (HLC), tj. monoklonálního (involved) a polyklonálního (noninvolved) izotypu včetně jejich poměru (HLC-r) u monoklonálních gamapatií. Hlubší pozornost je věnována východiskům a charakteristice této analytické metody, srovnání jejího klinického přínosu se standardními technikami používanými v diagnostice, sledování průběhu, časné detekce relapsu a progrese nemoci, stratifikace, hodnocení léčebné odezvy a prognózy monoklonální gamapatie nejistého významu, mnohočetného myelomu, Waldenströmovy makroglobulinemie, systémové AL-amyloidózy a některých nehodgkinských lymfomů. Z dosavadních výsledků vyplývá, že ve srovnání s dosavadními standardně používanými metodami obohacuje metoda Hevylite™ klinickou praxi o vyšetření hladiny noninvolved Ig s možností vyhodnocení hloubky imunoparézy, stanovení indexu HLC-r uplatňujícího se při stratifikaci MM do rizikových skupin a přispívajícího k odhadu prognózy a zlepšení hodnocení hloubky léčebné odezvy, zatímco v případě MGUS poskytuje informaci o riziku maligní evoluce. Ke zpřesnění indikací metody Hevylite™ u MG v běžné klinické praxi zřejmě přispěje zveřejnění výsledků aktuálně probíhajících validačních studií.

The aim of the paper is to inform about the contribution of novel, highly sensitive analytic technique for the assessment of serum immunoglobulins (Hevylite™), enabling separate quantitative assessment of heavy/light chain pairs of immunoglobulin (HLC), i. e. the monoclonal („involved“) and polyclonal („noninvolved“) isotype including their ratio (HLC-r) in monoclonal gammopathies. We particularly target the characteristics of this technique, the compari­son of its clinical contribution with standard methods used in the diagnostics, course and the detection of relapse and progression of the disease, as well as the stratification, assessment of therapeutic outcome and prognosis in monoclonal gammopathy of undetermined significance, multiple myeloma, Waldenström´s macroglobulinemia, systemic AL-amyloidosis and some non-Hodgkin lymphomas. Present results show that in comparison with existing routinely used techniques the Hevylite™ method enriches clinical practice with the assessment of serum levels of „uninvolved“ Ig. It enables the evaluation of the depth of „immunoparesis“, and the determination of HLC-r index that is needful for the stratification of MM into „risk cohorts“. It also contributes to prognostic assessment and improvement of the evaluation of the depth of therapeutic response. In MGUS individuals the HLC-r index provides information about the risk of malignant transformation. We await the results of ongoing validation studies that are expected to provide specific indications for Hevylite™ technique for MG in routine practice.

• Klíčová slova
• monoklonální imunoglobulin, systémová AL-amyloidóza,
• MeSH
• amyloidóza diagnóza   imunologie   krev   MeSH
• imunoglobulinové izotypy krev   MeSH
• imunoglobuliny - kappa-řetězce krev   MeSH
• imunoglobuliny - lambda-řetězce krev   MeSH
• imunologické techniky metody   MeSH
• lehké řetězce imunoglobulinů * krev   MeSH
• lidé MeSH
• mnohočetný myelom diagnóza   imunologie   krev   MeSH
• monoklonální gamapatie nejasného významu diagnóza   imunologie   krev   MeSH
• nehodgkinský lymfom diagnóza   imunologie   krev   MeSH
• paraproteinemie * diagnóza   imunologie   krev   MeSH
• prognóza MeSH
• progrese nemoci MeSH
• recidiva MeSH
• referenční hodnoty MeSH
• těžké řetězce imunoglobulinů * krev   MeSH
• Waldenströmova makroglobulinemie diagnóza   imunologie   krev   MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• Publikační typ
• práce podpořená grantem MeSH
• přehledy MeSH

Hyperviskózní syndrom (HVS) z nekorpuskulárních příčin je klinicko-laboratorní syndrom, který vzniká v důsledku zvýšené viskozity krve, v naprosté většině případů při nadměrných hladinách imunoglobulinů či při jejich změněných fyzikálně-chemických vlastnostech. Projevy HVS jsou typické zejména pro nemocné s monoklonálními gamapatiemi – mnohočetným myelomem a Waldenströmovou makroglobulinemií, ale bývají přítomny i u celé řady dalších onemocnění – kryoglobulinemií či systémových onemocněních pojiva. Přítomnost klinických projevů spojených se sníženou perfúzí orgánů a laboratorní průkaz zvýšené viskozity plazmy představují klíčové aspekty pro provedení plazmaferézy jako léčebné modality pro takto postižené nemocné.

Hyperviscosity syndrome (HVS) from non-corpuscular cause is a clinical and laboratory syndrome due to increased blood viscosity, mostly caused by excessive levels or modified physical and chemical characteristics of serum immunoglobulins. Clinical features of HVS are typical in patients with monoclonal gammopathies – multiple myeloma and Waldenström´s macroglobulinemia. They can be, however, found in other conditions such as cryoglobulinemia or systemic connective tissue disorders. The presence of clinical manifestation accompanied with decreased organ perfusion, and laboratory confirmation of increased viscosity are the major aspects supporting plasmapheresis as supportive treatment modality in these patients.

• Klíčová slova
• hyperviskózní syndrom, nekorpuskulární viskozita,
• MeSH
• imunoglobuliny krev   škodlivé účinky   MeSH
• krevní nemoci * diagnóza   etiologie   patofyziologie   terapie   MeSH
• kryoglobulinemie diagnóza   klasifikace   krev   terapie   MeSH
• kryoglobuliny škodlivé účinky   MeSH
• lidé MeSH
• oftalmoskopie MeSH
• paraproteinemie krev   patofyziologie   terapie   MeSH
• plazmaferéza MeSH
• reologie krve MeSH
• syndrom MeSH
• viskozita krve * MeSH
• Waldenströmova makroglobulinemie krev   patofyziologie   terapie   MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• Publikační typ
• přehledy MeSH