Q112407687
Dotaz
Zobrazit nápovědu
Cílem práce byla transformace exogenních prekurzorů kulturami in vitro Datura meteloides, Coronilla varia, Leuzea carthamoides a Schisandra chinensis. K těmto kulturám byly přidávány námi dosud nezkoušené prekurzory arbutinu a salicinu (fenylalanin, kyselina skořicová, p-kumarová, p-anisová, o-kumarová, salicylová, salicylaldehyd, helicin). Ke kultuře Schisandra chinensis byl přidáván kromě výše uvedených prekurzorů rovněž hydrochinon, neboť tato kultura nebyla dosud k biotransformačním účelům použita. Testované prekurzory byly použity v koncentraci 100 mg.l-1 a doba jejich působení byla 6; 12; 24; 48 a 168 hodin. Pozitivní výsledky (TLC i HPLC) v produkci arbutinu byly získány u kultury Schisandra chinensis po přidání hydrochinonu. Nejvyšší množství arbutinu bylo v extraktech kalusů naměřeno po týdenní kultivaci s hydrochinonem (5,08 %). V této pokusné variantě docházelo i k uvolňování arbutinu do živného média. Jako optimální prekurzor salicinu se na základě našich výsledků ukázal salicylaldehyd, který byl transformován kulturou Datura meteloides po 6; 24 a 168 hodinách a kulturou Coronilla varia po 6 hodinách. Jeho množství bylo oproti arbutinu nižší.
The paper aimed to transform exogenous precursors with in vitro cultures of Datura meteloides, Coronilla varia, Leuzea carthamoides and Schisandra chinensis. These cultures were added the precursors of arbutin and salicin (phenylalanine, cinnamic, p-coumaric, p-anisoic, o-coumaric, salicylic acids, salicylaldehyde, helicin), not yet tested by the present authors. The culture of Schisandra chinensis was also added, besides the above-mentioned precursors, hydroquinone, because this culture had not been employed for biotransformation purposes yet. The precursors tested were used in a concentration of 100 mg.l-1 and the period of their action was 6; 12; 24; 48, and 168 hours. Positive results (both TLC and HPLC) in arbutin production were obtained in the culture of Schisandra chinensis after an addition of hydroquinone. The largest amount of arbutin in callus cultures was measured after a week’s cultivation with hydroquinone (5.08 %). In this experimental variant, arbutin was released also to the culture medium. Our results revealed salicylaldehyde to be the optimal precursor of salicin. It was transformed by the culture of Datura meteloides after 6; 24, and 168 hours and by the culture of Coronilla varia after 6 hours. In comparison with arbutin, its amount was smaller.
Z úseků sterilních klíčních rostlin byla odvozena tkáňová kultura. Testováním optimálního hormonálníhosložení média z hlediska růstu kultur bylo zjištěno, že nejvyššího nárůstu biomasy bylodosaženo na médiu s přídavkem 2,4-D (0,1; 1,0 mg.l-1), NAA (10,0 mg.l-1) a kombinace IAA(1,0 mg.l-1) + K (1,0 mg.l-1). Rozdíl mezi těmito hodnotami byl statisticky nevýznamný. Ostatnízkoušené koncentrace růstových regulátorů vykazovaly přírůstky statisticky významně nižší. Dálejsme sledovali vliv různých typů růstových regulátorů a jejich koncentrací na produkci vybranýchmetabolitů v tkáňových kulturách a porovnávali s výsledky získanými z extraktu z drogy. Z alkaloidůbyl jak v extraktu z drogy, tak v extraktech všech testovaných kalusů bez ohledu na typa koncentraci růstového regulátoru prokázán stachydrin. Z flavonoidních látek byly v extraktuz drogy i v extraktech všech testovaných kalusů prokázány dvě skvrny. Žádná nebyla identickás použitými standardy rutinu a kvercetinu. Výsledky TLC iridoidních látek byly u extraktu z drogy(12 skvrn) a u extraktů z kalusů (4 skvrny – 3 identické se skvrnami v extraktu z drogy) rozdílné.Ze sacharidů byly v extraktu z drogy i v extraktech všech kalusů identifikovány tři sacharidy –glukosa, fruktosa a sacharosa. Ve všech extraktech byly rovněž prokázány třísloviny.
Segments of sterile germinating plants were used to derive the tissue culture. Tests of the optimalhormonal composition of the medium from the standpoint of the growth of cultures revealed thatthe highest growth in biomass was achieved in the medium with an addition of 2.4-D (0.1, 1.0mg.l-1),NAA (10.0 mg.l-1), and a combination of IAA (1.0 mg.l-1) + K (1.0 mg.l-1). The difference betweenthese valueswas statistically insignificant.Other tested concentrations of growth regulators showedstatistically significantly lower increases. The effects of different types of growth regulators andtheir concentrations on the production of selected metabolites in the tissue cultures were alsoexamined and compared with the results obtained from the extract of the drug. Of alkaloids,stachydrinewas demonstrated both in the extract of the drug and the extracts from all tested callusesregardless of the type and concentration of the growth regulator. Of flavonoid substances, two stainswere demonstrated in the extract from the drug as well as in the extracts from all tested calluses.Neither of them was identical with the employed standards of rutin and quercetin. The results ofTLC of iridoid substances were different in the extract from the drug (12 stains) and in the extractsfrom calluses (4 stains – 3 identical with the stains in the extract from the drug). As to saccharides,three of them – glucose, fructose, and sucrose – were identified in the extract of the drug as well asin the extracts from all calluses.
- MeSH
- genistein farmakologie izolace a purifikace MeSH
- isoflavony farmakologie MeSH
- kultivované buňky MeSH
- léčivé rostliny MeSH
- Publikační typ
- kongresy MeSH
- MeSH
- biotechnologie MeSH
- léčivé rostliny MeSH
- rostlinné extrakty chemie terapeutické užití MeSH
- Publikační typ
- kongresy MeSH
Ze sterilních klíčních rostlin byla odvozena tkáňová kultura. Největší stimulační efekt na růstkultury měly NAA ve všech zkoušených koncentracích, IAA v koncentraci 1,0 a 10,0 mg.l -1 , IBAv koncentraci 0,1 mg.l -1 a kombinace IBA + K. Rozdíl mezi hodnotami růstu na těchto médiích bylstatisticky nevýznamný. TLC analýzou extraktů kalusů byla prokázána přítomnost bergeninu,arbutinu, hydrochinonu a methylarbutinu. Analýza HPLC toto zjištění potvrdila (arbutin 0,25 %,hydrochinon 0,05 %, methylarbutin 0,28 %). Z výsledků biotransformačních pokusů vyplývá, žek nejvyššímu nárůstu arbutinu došlo po přidání 4-hydroxybenzoové kyseliny a odběru vzorku po 24hodinách (3,82 %). K transformaci arbutinu ani 4-methoxyfenolu na methylarbutin za daných podmínek v kultuře nedocházelo. K nejvyššímu nárůstu sumárního obsahu fenolických látek došlo při použití elicitoru Pseudomonas aeruginosa – 88 % (konc. 0,0001 g/100 ml, 12hodinové působení).
Sterile germinating plants were used to derive a tissue culture. The greatest stimulating effect onthe growth of the culture was exerted by NAA cultures in all concentrations tested, by IAA inconcentrations of 1.0 and 10.0 mg.l -1 , by IBA in a concentration of 0.1 mg.l -1 , and by the combinationof IBA + K. The difference between the values of growth on these media was statistically insignifi-cant. TLC analysis of callus extracts demonstrated the presence of bergenin, arbutin, hydroquinone,and methylarbutine. HPLC analysis confirmed the findings (arbutin 0.25 %, hydroquinone 0.05 %,methylarbutin 0.28 %). The results of biotransformation tests show that the highest increase inarbutin took place after addition of 4-hydroxybenzoic acid and withdrawal of the sample after 24hours (3.82 %). No transformation of arbutin or 4-methoxyphenol to produce methylarbutin tookplace in the culture under the given conditions. The highest increase in the summary content ofphenolic substances occurred with the use of the elicitor Pseudomonas aeruginosa – 88 % (conc.0.0001 g/100 ml, 12-hour action).
