Transkripční faktor MITF (microphthalmia-associated transcription factor) je klíčovým regulátorem embryonálního vývoje melanocytové linie a aktivuje transkripci asi 30 genů mezi kterými jsou geny specifické pro diferenciaci melanocytů, jejich proliferacia viabilitu. MITF je nutný i pro přežívání melanomových buněk. Lokální remodelace chromatinu specifickými komplexy je nutná pro expresi MITF i některých jeho cílových genů. Zablokováním transkripční aktivity faktoru MITF je možné docílit ztrátu proliferace a přežívání melanomových buněk v kultuře. Cílem projektu tedy bude identifikovat nejvhodnější molekulární postup úplné inhibice aktivity a/nebo exprese MITF a pomocí metody microarrays detekovat další cílové geny transkripčně závislé na MITF nutné kproliferaci a k blokování apoptozy u melanomových buněk. Výsledky ukáží na faktory účastnící se progrese melanomu a na mechanismus jejich exprese, a mohou být podkladem pro cílenou genovou terapii nádoru, jenž je rezistentní chemo- i radio-terapii.; Transcription factor MITF (microphthalmia-associated transcription factor) is a key regulator of the development of embryonic melanocytes and activates about 30 genes among which are differentiation markers and genes maintaining the viability of melanocytes. Moreover, MITF is also required for the viability melanoma cells. Local chromatin remodeling at promoters is required for the expression of MITF and some of its targets. Blocking of the MITF expression could be therefore used to inhibit the viability and proliferation of melanoma cells. The aim of this project is to identify a suitable molecular approach to fully inhibit expression and/or activity of MITF and to detect additional MITF targets which are crucial for proliferation and maintenance of antiapoptotic signals in melanoma cells. The results will improve our understanding of the role of MITF in melanoma progression and may be a route to targeted gene therapy of this chemo- and radio-therapy resistant tumor.

• MeSH
• Molecular Targeted Therapy MeSH
• Genetic Therapy MeSH
• Precision Medicine MeSH
• RNA, Small Interfering MeSH
• Melanoma therapy   MeSH
• Pathology, Molecular MeSH
• Chromatin Assembly and Disassembly MeSH
• Sequence Analysis, RNA MeSH
• Microphthalmia-Associated Transcription Factor antagonists & inhibitors   genetics   MeSH

• Conspectus
• Patologie. Klinická medicína
• NML Fields
• dermatovenerologie
• onkologie
• biologie
• NML Publication type
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR

Multiproteinový chromatin-remodelující komplex SWI/SNF je považován za nádorový supresor a jeho funkce je u několika typů nádorových buněk porušena tím, že některé jeho složky (Brm, Brg1 a INI1) jsou deletovány nebo mutovány. Bude zkoumána exprese komponent komplexu v buňkách malobuněčného (SCLC) i nemalobuněčného (NSCLC) karcinomu plic a maligního melanomu a vztah exprese k nádorové progresi. Dále bude zkoumána úloha tohoto komplexu při transkripci genů a markerů spojených s diferenciací melanomových buněk. Výsledky ukáží na možnou úlohu porušeného komplexu při patogenezi těchto nádorů zejména ve vztahu k invazivitě a metastasování a pomohou při prognose nádorového onemocnění.; The SWI/SNF chromatin-remodeling complex functions as a tumor suppressor and several of its subunits (Brm, Brg1 a INI1) were found to be mutated in human tumors. We propose to study the expression of the SWI/SNF components in non-small cell lung cancer (NSCLC), small cell lung cancer (SCLC) and melanoma, and to investigate the role of an abrogated function of SWI/SNF in the progression of these three specific tumor types. We will further study how SWI/SNF participates in the differentiation program of melanoma cells. The results will indicate how the altered function or loss of subunits contribute to malignant behavior of the selected types of tumors with respect to invasion and formation of metastases.

• MeSH
• Gene Expression MeSH
• Transcription, Genetic MeSH
• Small Cell Lung Carcinoma MeSH
• Melanoma MeSH
• Neoplasm Metastasis MeSH
• Neoplastic Processes MeSH
• Carcinoma, Non-Small-Cell Lung MeSH
• Prognosis MeSH
• Chromatin Assembly and Disassembly MeSH
• Cell Line, Transformed MeSH

• Conspectus
• Biochemie. Molekulární biologie. Biofyzika
• NML Fields
• onkologie
• biologie
• NML Publication type
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR

• MeSH
• DNA Modification Methylases MeSH
• Histone Deacetylases MeSH
• Histone Code MeSH
• Immunologic Factors MeSH
• Histone Deacetylase Inhibitors MeSH
• Neoplasms genetics   immunology   MeSH
• Adoptive Transfer MeSH
• Chromatin Assembly and Disassembly MeSH
• T-Lymphocytes, Helper-Inducer physiology   immunology   MeSH
• Toll-Like Receptors physiology   genetics   immunology   MeSH
• Publication type
• Collected Work MeSH

• Conspectus
• Biochemie. Molekulární biologie. Biofyzika
• NML Fields
• alergologie a imunologie
• biologie

Bude studována exprese pomocí DNA microarrays u leukémií, vhodných kontrolních buněk a pro in vitro populace. Změny budou korelovány s epigenetickými charakteristikami chromatinu na úrovni jeho modifikací (metylace, acetylace histonů, metylace DNA). Strukturální charakteristiky chromatinu budou zkoumány v místech se změnami exprese pomocí fluorescenční in situ hybridizace, spektrální mikroskopie a imunoFISH. Budou testovány protinádorové látky s úzkým spektrem účinku na úrovni exprese. Využitím pokročilých metod vizualizace jaderných stuktur a moderní konfokální mikroskopie bude studován mechanismus vzniku a progrese leukémií. Cílem bude navrhnout vhodné markry pro diagnostiku. Domníváme se, že studium genů měnících expresi a epigenetických mechanismůstojících za těmito změnami nám umožní navrhnout cílové molekuly pro léčbu.; Using DNA microarrays, gene expression will be studied in leukemia, in control cell populations and in cell cultures. Changes will be correlated to epigenetic characteristics of chromatin at the level of its modifications (methylation, acetylation). Structural characteristics of chromatin at sites with altered expression will be studied using fluorescence in situ hybridization (FISH), spectral microscopy and immunoFISH. Drugs with narrow spectrum of genes with altered expression wil be studied. Using advanced techniques of gene or protein visualization and top level confocal microscopy, the mechanisms of the induction and progression of leukemia will be investigated with the goal to suggest appropriate markers for diagnostics. We hope that our study ofgene expression in parallel to epigenetics will allow us to propose target molecules of effective therapy.

• MeSH
• Protein Array Analysis methods   utilization   MeSH
• Histone Deacetylases analysis   MeSH
• In Situ Hybridization, Fluorescence methods   utilization   MeSH
• Histone Deacetylase Inhibitors MeSH
• Intracellular Signaling Peptides and Proteins analysis   MeSH
• Leukemia diagnosis   MeSH
• Chromatin Assembly and Disassembly MeSH

• Conspectus
• Biochemie. Molekulární biologie. Biofyzika
• NML Fields
• hematologie a transfuzní lékařství
• onkologie
• radiologie, nukleární medicína a zobrazovací metody
• biologie
• NML Publication type
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR