The increase of mixed chimerism (MC) after allogeneic hematopoietic stem cell transplantation has been associated with a high risk of relapse. A variety of techniques that use polymorphic markers have been established to survey hematopoietic chimerism status. The highest sensitivity is achieved using real-time quantitative polymerase chain reaction (RQ-PCR) analysis of insertion/deletion polymorphism, which allows the detection of disease recurrence and subsequently the earlier initiation of therapeutic intervention. The purpose of this study is the evaluation of multiplex RQ-PCR for MC assessment (six biallelic genetic systems and Y-specific locus), allowing the amplification and detection of target gene of interest and glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase reference housekeeping gene in a single microtube. With optimized amounts of primers and probe, the quantification of target DNA was shown to be linear throughout the tested range (100%-0.05%). The efficiencies of multiplex RQ-PCR were in a range of 0.89 to 1.07. The sensitivity of individual systems ranged 0.02% to 0.04% with an average of 0.034%. A high degree of linear correlation between the chimerism results obtained by multiplex RQ-PCR vs singleplex RQ-PCR was observed (P < 0.0001, Spearman's coefficient = 0.9927), while correlation between multiplex RQ-PCR vs short tandem repeat analysis was also statistically significant (P < 0.0001, Spearman's coefficient = 0.9769). This new multiplex RQ-PCR assay is a quick, sensitive, reproducible, and cost-effective method for accurate MC assessment.
- MeSH
- alely MeSH
- chimérismus * MeSH
- DNA primery MeSH
- leukemie terapie MeSH
- lidé MeSH
- lokální recidiva nádoru diagnóza etiologie prevence a kontrola MeSH
- multiplexová polymerázová řetězová reakce metody MeSH
- polymerázová řetězová reakce s reverzní transkripcí metody MeSH
- polymorfismus genetický * MeSH
- transplantace hematopoetických kmenových buněk škodlivé účinky MeSH
- transplantační chiméra krev genetika MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- Publikační typ
- časopisecké články MeSH
- práce podpořená grantem MeSH
- Publikační typ
- abstrakt z konference MeSH
- Publikační typ
- abstrakt z konference MeSH
- MeSH
- bcr-abl fúzní proteiny genetika MeSH
- chronická myeloidní leukemie terapie MeSH
- diagnostické techniky molekulární MeSH
- dítě MeSH
- finanční podpora výzkumu jako téma MeSH
- interferon alfa terapeutické užití MeSH
- kombinovaná terapie MeSH
- lidé středního věku MeSH
- lidé MeSH
- mladiství MeSH
- transfuze lymfocytů MeSH
- transplantace hematopoetických kmenových buněk MeSH
- Check Tag
- dítě MeSH
- lidé středního věku MeSH
- lidé MeSH
- mladiství MeSH
- MeSH
- bcr-abl fúzní proteiny biosyntéza genetika MeSH
- chiméra MeSH
- chronická myeloidní leukemie * patologie terapie MeSH
- genetická transkripce * MeSH
- indukce remise MeSH
- lidé MeSH
- messenger RNA biosyntéza MeSH
- minisatelitní repetice MeSH
- nádorové cirkulující buňky MeSH
- nádorové kmenové buňky * patologie MeSH
- následné studie MeSH
- polymerázová řetězová reakce s reverzní transkripcí MeSH
- regulace genové exprese u leukemie * MeSH
- RNA nádorová biosyntéza MeSH
- senzitivita a specificita MeSH
- transplantace hematopoetických kmenových buněk * MeSH
- viabilita buněk MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- mužské pohlaví MeSH
- ženské pohlaví MeSH
- Publikační typ
- dopisy MeSH
- práce podpořená grantem MeSH
- srovnávací studie MeSH
- Publikační typ
- abstrakt z konference MeSH
