BACKGROUND: Deficiency of the lysosomal enzyme galactosylcerebrosidase (GALC) causes Krabbe disease. Newborn screening for Krabbe disease is ongoing, but improved methods for follow-up analysis of screen-positive babies are needed to better advise families and to optimize treatment. We report a new assay for the enzymatic activity of GALC in lymphocytes. METHODS: T lymphocytes were isolated from venous blood by magnetic bead technology. The assay used a close structural analog of the natural substrate and LC-MS/MS to quantify the amount of product with the aid of a chemically identical internal standard. RESULTS: The analytical range of the assay (ratio of assay response for the QC high standard to that from all non-enzymatic-dependent processes) was 20-fold greater than that for the conventional radiometric GALC assay. The LC-MS/MS could distinguish cells that were null in GALC from those that contained traces of active enzyme (down to 0.3% of normal). There was a good correlation between the level of residual GALC activity in lymphocytes and the severity of Krabbe disease. CONCLUSIONS: The new assay can measure small amounts of residual GALC activity in leukocytes with high accuracy compared to previous assays and can contribute, along with genotyping, biomarker analysis, and neurological imaging, a better plan for post-newborn screening follow-up for Krabbe disease.
- MeSH
- chromatografie kapalinová MeSH
- dítě MeSH
- galaktosylceramidasa analýza nedostatek metabolismus MeSH
- globoidní leukodystrofie enzymologie metabolismus MeSH
- lidé MeSH
- novorozenec MeSH
- novorozenecký screening metody MeSH
- T-lymfocyty enzymologie metabolismus MeSH
- tandemová hmotnostní spektrometrie MeSH
- Check Tag
- dítě MeSH
- lidé MeSH
- novorozenec MeSH
- Publikační typ
- časopisecké články MeSH
Globoidní leukodystrofie (Krabbeho nemoc) je vzácné demyelinizační onemocnění postihující centrální i periferní myelin. Podstatou onemocnění je deficit aktivity lyzosomálního enzymu galaktocerebrosidázy. Podle věku při prvních klinických symptomech se rozlišují 4 typy onemocnění: forma infantilní a 3 formy s pozdním začátkem (pozdně infantilní, juvenilní, adultní). Cílem práce je uvést přehled českých pacientů diagnostikovaných během 26 let. Soubor zahrnuje 14 pacientů. U pacientů mělo infantilní formu, 2 pacienti pozdně infantilní formu a 1 pacient adultní formu. U pacientů s infantilní formou se do 6 měsíců věku výskytly následující příznaky: retardace nebo regrese vývoje (11/11), vysoká dráždivosť (11/11), potíže s příjmem stravy (8/11), zvýšený svalový tonus (8/11) se současným snížením (6/11) i zvýšením (1/11) šlachosvalových reflexů, spastické pyramidové jevy (7/11), křeče (6/11), horečky nejasné etiologie (3/11), ataky opistotonu (6/11), křik bez zjevné příčinyiy (5/11), zvracení (2/11). Iniciálním příznakem u pacientů S pozdně infantilní formou byla porucha zraku (1/2) nebo porucha chůze (1/2). U pacienta s adultní formou byla klinickým projevem spastická paraparéza. Diagnóza globoidní leukodystrofie byla u pacientů stanovena průkazem deficitní aktivity galaktocerebrosidázy v periferních leukocytech, u starších případů mozkovou biopsií nebo pitvou. Na onemocnění pomýšlel klinik v 10/14 případů. Diagnózu globoidní leukodystrofie je třeba zvažovat u neurologického onemocnění se symetrickým postižením bílé hmoty mozku (nejlépe dokumentovaným pomocí MR) při absenci jakýchkoliv známek viscerálního, klinicky manifestního orgánového postižení. Výjimkou je postižení periferního myelinu, patrné klinicky nebo laboratořně pomocí elektrofyziologického vyšetření.
Globoid cell leukodystrophy (Krabbe's disease) is a rare demyelinating disorder affecting both the central and peripheral myelin. The nature of the disease is deficient activity of lysosomal enzyme galactocerebrosidase. Based on the age at the first clinical symptoms, there are 4 types of the disease recognized: infantile form and 3 forms with later onset (late infantile, juvenile, adult). The report aimed at the survey of Czech patients diagnosed during 26 years. A set involves 14 patients. 11 of them had infantile form, 2 patients late infant form, and 1 patients adult form. By 6 months of age the patients with the infantile form manifested the following symptoms: retardation or regression of development (11/11), high irritability (11/11), problems with food intake (8/11), increased muscle tone (S/11) with simultaneous decrease (6/11) as well as increase (1/11) of tendon reflexes, spastic pyramidal signs (7/11), convulsions (6/11), fever of unclear etiology (3/11), attacks of opisthotonus (6/11), screaming without any evident cause (5/11), vomiting (2/11). The initial symptom in the patients with the late infantile form was the disturbance of vision (1/2) or of walking (1/2). Spastic paraparesis was a clinical manifestation in a patient with the adult form. The diagnosis of globoid cell leukodystrophy was established by demonstrating deficient activity of galactocerebrosidase in peripheral leukocytes, in older case by the brain biopsy or autopsy. The disease was thought of in 10/14 cases. The diagnosis of globoid cell leukodystrophy should be considered in a neurological disease with symmetrical affection of the white matter (the best documented by MRI) if any signs of visceral, clinically manifestable organ involvement are missing. The exception is the affection of the peripheral myelin evident either clinically or by means of electrophysiological examination.
- MeSH
- demyelinizační nemoci diagnóza MeSH
- finanční podpora výzkumu jako téma MeSH
- galaktosylceramidasa metabolismus nedostatek MeSH
- globoidní leukodystrofie diagnóza klasifikace patofyziologie MeSH
- lidé MeSH
- mozkomíšní mok cytologie chemie MeSH
- následné studie MeSH
- oligodendroglie enzymologie metabolismus patologie MeSH
- psychosin toxicita MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
