AIMS: Some types of monoclonal gammopathies are typified by a very limited availability of aberrant cells. Modern research use high throughput technologies and an integrated approach for detailed characterisation of abnormal cells. This strategy requires relatively high amounts of starting material which cannot be obtained from every diagnosis without causing inconvenience to the patient. The aim of this methodological paper is to reflect our long experience with laboratory work and describe the best protocols for sample collection, sorting and further preprocessing in terms of the available number of cells and intended downstream application in monoclonal gammopathies research. Potential pitfalls are also discussed. METHODS: Comparison and optimisation of freezing and sorting protocols for plasma cells in monoclonal gammopathies, followed by testing of various nucleic acid isolation and amplification techniques to establish a guideline for sample processing in haemato-oncology research. RESULTS: We show the average numbers of aberrant cells that can be obtained from various monoclonal gammopathies (monoclonal gammopathy of undetermined significance/light chain amyloidosis/multiple myeloma (MM)/MM circulating plasma cells/ minimal residual disease MM-10 123/22 846/305 501/68 641/4000 aberrant plasma cells of 48/30/10/16/37×106 bone marrow mononuclear cells) and the expected yield of nucleic acids provided from multiple isolation kits (DNA/RNA yield from 1 to 200×103 cells was 2.14-427/0.12-123 ng). CONCLUSIONS: Tested kits for parallel isolation deliver outputs comparable with kits specialised for just one type of molecule. We also present our positive experience with the whole genome amplification method, which can serve as a very powerful tool to gain complex information from a very small cell population.

• MeSH
• DNA izolace a purifikace   MeSH
• konzervace krve metody   MeSH
• krevní bankovnictví MeSH
• krevní banky MeSH
• kryoprezervace metody   MeSH
• lidé MeSH
• odběr vzorku krve metody   MeSH
• paraproteinemie krev   MeSH
• reagenční diagnostické soupravy MeSH
• RNA izolace a purifikace   MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• Publikační typ
• časopisecké články MeSH

Autologous haematopoietic SCT with PBSCs is regularly used to restore BM function in patients with multiple myeloma or lymphoma after myeloablative chemotherapy. Twenty-eight experts from the European Group for Blood and Marrow Transplantation developed a position statement on the best approaches to mobilising PBSCs and on possibilities of optimising graft yields in patients who mobilise poorly. Choosing the appropriate mobilisation regimen, based on patients' disease stage and condition, and optimising the apheresis protocol can improve mobilisation outcomes. Several factors may influence mobilisation outcomes, including older age, a more advanced disease stage, the type of prior chemotherapy (e.g., fludarabine or melphalan), prior irradiation or a higher number of prior treatment lines. The most robust predictive factor for poor PBSC collection is the CD34(+) cell count in PB before apheresis. Determination of the CD34(+) cell count in PB before apheresis helps to identify patients at risk of poor PBSC collection and allows pre-emptive intervention to rescue mobilisation in these patients. Such a proactive approach might help to overcome deficiencies in stem cell mobilisation and offers a rationale for the use of novel mobilisation agents.

• MeSH
• autologní transplantace MeSH
• lidé MeSH
• lymfom terapie   MeSH
• mnohočetný myelom terapie   MeSH
• mobilizace hematopoetických kmenových buněk metody   MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• Publikační typ
• časopisecké články MeSH
• práce podpořená grantem MeSH
• přehledy MeSH
• Geografické názvy
• Evropa MeSH

• Publikační typ
• abstrakty MeSH

• MeSH
• financování organizované MeSH
• Publikační typ
• abstrakt z konference MeSH

Trombotická trombocytopenická purpura (TTP) je vzácný, ale život ohrožující syndrom, který je charakterizován trombocytopenií ze zvýšeného obratu a zánikem destiček na periferii. Patří k tzv. MAHA či MAS onemocněním (mikroangiopatické hemolytické syndromy). U těchto stavů se kombinuje mikroangiopatie, trombocytopenie a intravaskulární hemolýza, klinický obraz pak doplňuje horečka, alterace renálních funkcí a neurologická symptomatologie, která má měnlivý charakter a jsou spojeny s poruchou perfuze mozku. V etiopatogenezi stojí na počátku nárůst relativního zastoupení velkých multimerů (ultra large-UL) von Willebrandova faktoru (vWF), které se v oběhu koncentrují v důsledku nedostatku vWF metaloproteinázové aktivity tzv. ADAMTS 13 proteázy, která za normálních okolností štěpí UL-vWF. Léčba spočívá v prosté substituci vWF metaloproteinázy, která je obsažena v mrazené plazmě, výměnná plazmaferéza je samozřejmě účinnější a navíc má potenciál odstraňovat z oběhu autoprotilátku proti ADAMTS 13 proteáze, která obvykle funkční deficit ADAMTS 13 proteázy způsobuje. TTP se vyskytuje rovněž u nemocných se systémovými chorobami pojiva, nejčastěji se SLE. Autoři popisují tři nemocné se SLE, u kterých došlo k rozvoji TTP. U všech byla stanovena diagnóza systémového lupus erythematodes na podkladě ARA kritérií. Všechny 3 nemocné ženy byly hospitalizovány pro poměrně náhle vzniklou symptomatologii hemolytické anémie, trombocytopenie a neurologických příznaků. Byly léčeny výměnnými plazmaferézami, dále pomocí vysokých dávek mrazených plazem a intenzivní imunosupresí. U jedné pacientky došlo k recidivě s nutností rehospitalizace, jedna nemocná se SLE zemřela během ataky TTP na multiorgánové selhání. TTP je onemocnění, které se může vyskytovat jako sekundární syndrom u systémových onemocnění pojiva, eventuálně může vznikat jako následek léčby po některých lécích. V případě náhlejšího poklesu krevních elementů, zejména trombocytů je potřeba na toto onemocnění myslet, protože nepoznané a neadekvátně léčené velmi často končí smrtelně.

Thrombotic thrombocytopenic purpura (TTP) is a rare, however life threatening syndrome, which is characterized by thrombocytopenia with increased turnover and by loss of peripheral platelets. It belongs to socalled MAHA or MAS disorders (microangiopathic heamolytic syndromes). Combination of microangiopathy, thrombocytopenia and intravascular haemolysis is observed. Clinical picture is also accompanied by fever, alteration of renal functions and variable neurological symptoms which are associated with impaired brain perfusion. The increase of relative amount of highly multimeric (ultra large-UL) von Willebrand factor (vWF) plays a crucial role in the pathogenesis of the disease. The multimer cumulates in the circulation as a result of insufficient concentration of ADAMTS 13 protease that share vWF metalloprotease activity and cleave ULvWF under normal conditions. Treatment option is either substitution of frozen plasma that contains vWF metaloprotease or plasmapheresis that is obviously more effective and has a potential to eliminate autoantibodies against ADAMTS 13 protease, which usually cause the functional ADAMTS 13 protease deficit. TTP also occurs in patients with systemic connective tissue diseases, mostly with SLE. The authors describe 3 patients with SLE that developed TTP. SLE was defined in all patients according to the ARA criteria. All three patients were hospitalized for rather acute onset of haemolytic anemia, thrombocytopenia and neurological symptoms. They were treated with plasmapheresis, and furthermore with high doses of frozen plasma and intensive immunosuppressive agents. One patient flared with the necessity of rehospitalization, and one died of multiorgan failure during the attack of TTP. TTP may accompany systemic connective tissue diseases as a secondary syndrome or can develop after the treatment with some drugs. In the case of acute decrease of blood elements, particularly thrombocytes, it is necessary to be aware of this possibility because unrecognized and insufficiently treated disease results very often in death.

• MeSH
• lidé MeSH
• systémový lupus erythematodes MeSH
• trombotická trombocytopenická purpura MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• Publikační typ
• kazuistiky MeSH

• MeSH
• autologní transplantace MeSH
• funkce levé komory srdeční MeSH
• infarkt myokardu etiologie   terapie   MeSH
• lidé MeSH
• transplantace kmenových buněk MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• Publikační typ
• randomizované kontrolované studie MeSH

• MeSH
• fluorodeoxyglukosa F18 diagnostické užití   MeSH
• funkční vyšetření srdce metody   MeSH
• infarkt myokardu diagnóza   terapie   MeSH
• jednofotonová emisní výpočetní tomografie MeSH
• lidé MeSH
• technecium 99mTc sestamibi diagnostické užití   MeSH
• tomografie emisní počítačová MeSH
• transplantace kostní dřeně metody   MeSH
• výsledek terapie MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• Publikační typ
• srovnávací studie MeSH