Komplexní sekvenční analýza cDNA klonu a odvození úplné struktury příslušného proteinu. Konstrukce expresního vektoru a exprese příslušného proteinu, jeho purifikace,příprava protilátek a identifikace proteinu v tkáni.

• MeSH
• ameloblastom MeSH
• hybridizace in situ využití   metody   MeSH
• odontoblasty MeSH
• proteiny zubní skloviny analýza   MeSH
• rekombinantní proteiny diagnostické užití   MeSH
• sekvence aminokyselin MeSH
• věda o laboratorních zvířatech MeSH

• Konspekt
• Stomatologie
• NLK Obory
• zubní lékařství
• biologie
• NLK Publikační typ
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR

• MeSH
• ameloblasty metabolismus   MeSH
• aminokyseliny MeSH
• extracelulární matrix - proteiny MeSH
• hybridizace in situ MeSH
• krysa rodu rattus MeSH
• moláry MeSH
• morčata MeSH
• myši MeSH
• sekvence nukleotidů MeSH
• zubní korunka (anatomie) růst a vývoj   MeSH
• zvířata MeSH
• Check Tag
• krysa rodu rattus MeSH
• morčata MeSH
• myši MeSH
• zvířata MeSH
• Publikační typ
• přehledy MeSH
• srovnávací studie MeSH

Novel mRNA isoforms encoding the enamel matrix proteins amelin-1, amelin-2 and ameloblastin have been recently described. We have applied detailed immunohistochemical as well as non-radioactive in situ hybridization analyses to follow amelin-1 expression in developing rat incisors and molars. We constructed an expression vector, overproduced recombinant amelin in Escherichia coli and prepared an antibody. In addition to the previously reported amelin mRNA expression patterns in ameloblasts, the amelin message was also detected in pulpal mesenchymal cells including preodontoblasts and young odontoblasts. The signal in these cells persisted until deposition of mantle dentin became evident. The immunolocalization of amelin-1 in preodontoblasts and ameloblasts essentially followed the pattern of mRNA expression. The most intense staining was found in the enamel matrix adjacent to secretory ameloblasts. Focal accumulations of immunoreactive material were found at the dentinoenamel junction during the maturation stage. Also, using 5'-RACE (Rapid Amplification of cDNA Ends) we could confirm only amelin-1 and ameloblastin messages in the total RNA pool from rat molars and conclude that amelin-2 is a truncated form of ameloblastin. The sequential expression of amelin in mesenchymal and epithelial cells suggests it plays a role in cell differentiation during early tooth development.

• MeSH
• ameloblasty metabolismus   MeSH
• DNA primery genetika   MeSH
• epitelové buňky metabolismus   MeSH
• hybridizace in situ MeSH
• imunohistochemie MeSH
• komplementární DNA genetika   MeSH
• krysa rodu rattus MeSH
• messenger RNA genetika   MeSH
• mezoderm metabolismus   MeSH
• odontoblasty metabolismus   MeSH
• odontogeneze * genetika   MeSH
• potkani Sprague-Dawley MeSH
• proteiny zubní skloviny * genetika   metabolismus   MeSH
• rekombinantní fúzní proteiny genetika   MeSH
• sekvence nukleotidů MeSH
• vývojová regulace genové exprese MeSH
• zubní sklovina cytologie   metabolismus   růst a vývoj   MeSH
• zvířata MeSH
• Check Tag
• krysa rodu rattus MeSH
• zvířata MeSH
• Publikační typ
• práce podpořená grantem MeSH

Two variants of an mRNA sequence are identified that are expressed at high levels in rat ameloblasts during the formation of the enamel matrix. The sequences contain open reading frames for 407 and 324 amino acid residues, respectively. The encoded proteins, which we call amelins, are rich in proline, glycine, leucine, and alanine residues and contain the peptide domain DGEA, an integrin recognition sequence. The sequences coding for the C-terminal 305 amino acid residues, the 3' nontranslated part, and a microsatellite repeat at the nontranslated 5' region are identical in both mRNA variants. The remaining 5' regions contain 338 nucleotides unique to the long variant, 54 common nucleotides, and 46 nucleotides present only in the short variant. Eleven nucleotides have the potential to code for 5 amino acids of both proteins in different reading frames. The reading frame of the longer variant includes codons for a typical N-terminal signal peptide. The amelins are likely to be constituents of the enamel matrix and the only proteins that have so far been implicated in binding interactions between the ameloblast surface and its extracellular matrix.

• MeSH
• ameloblasty * fyziologie   MeSH
• cytoskeletální proteiny * genetika   metabolismus   MeSH
• genetický kód MeSH
• genomová knihovna * MeSH
• hybridizace in situ MeSH
• krysa rodu rattus MeSH
• molekulární sekvence - údaje MeSH
• oligonukleotidové sondy MeSH
• potkani Sprague-Dawley MeSH
• proteiny nervové tkáně * genetika   metabolismus   MeSH
• sekvence aminokyselin MeSH
• sekvence nukleotidů MeSH
• terciární struktura proteinů * MeSH
• vazba proteinů MeSH
• vývojová regulace genové exprese * fyziologie   MeSH
• zvířata MeSH
• Check Tag
• krysa rodu rattus MeSH
• zvířata MeSH
• Publikační typ
• práce podpořená grantem MeSH

• MeSH
• aminokyseliny chemie   MeSH
• krysa rodu rattus MeSH
• messenger RNA analýza   MeSH
• molekulární biologie MeSH
• novorozená zvířata MeSH
• proteiny zubní skloviny fyziologie   chemie   MeSH
• zubní sklovina chemie   růst a vývoj   MeSH
• zvířata MeSH
• Check Tag
• krysa rodu rattus MeSH
• zvířata MeSH
• Publikační typ
• srovnávací studie MeSH