ALL is the most frequent malignant disease of childhood. Surviving of leukemic cells is dependent on the bone marrow microenvironment, therefore we will focus on the analysis of soluble proteins pattern in the bone marrow plasma of children with ALL. Soluble proteins pattern will be analyzed by proteomic methods. Proteins differently expressed in ALL and control bone marrow plasma will be verified by flow cytometry and enzyme-linked immunoanalysis investigation. Identified proteins can be used as diagnostic markers of leukemias with worse prognosis or as the potential therapeutic targets, if these proteins significantly support the surviving of leukemic cells.

ALL je nejčastějším maligním onemocněním dětí. Přežívání leukemických buněk je závislé na mikroprostředí kostní dřeně, proto se v našem projektu zaměříme na analýzu solibilních faktorů přítomných v plazmě kostní dřeně dětí s ALL. Složení kostní plazmy dětí s ALL a kontrolní skupiny budeme analyzovat pomocí proteomických technik jako je "protein array" a dvoudimenzionální elektroforéza. Rozdíly v zastoupení proteinů ověříme pomocí průtokové cytometrie a enzymové imunoanalýzy. Zjištěné proteiny z kostní plazmy mohou sloužit jako diagnostické znaky leukémií s horší prognózou, nebo jako potenciální terapeutické cíle, bude-li se jednat o molekuly významně podporující přežívání leukemických buněk.

• MeSH
• akutní lymfatická leukemie diagnóza   MeSH
• akutní nemoc MeSH
• dítě MeSH
• krevní plazma MeSH
• prognóza MeSH
• proteomika MeSH
• výsledek terapie MeSH
• Check Tag
• dítě MeSH

• Konspekt
• Pediatrie
• NLK Obory
• pediatrie
• hematologie a transfuzní lékařství
• onkologie
• NLK Publikační typ
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR

BACKGROUND: Residual disease (RD) is an important prognostic factor in acute lymphoblastic leukemia (ALL). Flow cytometry (FC)-based RD detection is easy to perform, but interpretation requires expert analysis due to individual differences among patients. PROCEDURE: We focused at the design of standardized and reproducible RD monitoring in ALL. RD was investigated by a uniform gating strategy, which was designed internationally and tested in one center by Ig/TCR rearrangements. RESULTS: For each gate, positivity cutoff value was assigned using quantification of non-leukemic background. Comparing to Ig/TCR at 0.1% level, 80 of 103 specimens were correctly diagnosed by FC. The predictive value of FC RD at day 15 was then analyzed. In B lineage ALL, day 15 FC significantly correlated with Ig/TCR results at day 33 and/or week 12 (P < 0.01). No significant correlation was found in T lineage ALL. CONCLUSIONS: Thus, FC with preset uniform gating at day 15 predicts PCR-detectable MRD in B precursor ALL. Presented data may be used to define new polychromatic cytometric diagnostics of MRD including semiautomatic assessment. Pediatr Blood Cancer 2010; 54:62-70. (c) 2009 Wiley-Liss, Inc. Copyright 2009 Wiley-Liss, Inc.

• MeSH
• dítě MeSH
• genová přestavba MeSH
• indukce remise MeSH
• lidé MeSH
• polymerázová řetězová reakce MeSH
• pre-B-buněčná leukemie diagnóza   genetika   MeSH
• prognóza MeSH
• průtoková cytometrie MeSH
• receptory antigenů T-buněk genetika   MeSH
• reziduální nádor diagnóza   genetika   MeSH
• Check Tag
• dítě MeSH
• lidé MeSH
• mužské pohlaví MeSH
• ženské pohlaví MeSH
• Publikační typ
• práce podpořená grantem MeSH

Některé klinické symptomy u akutní leukemie (AL) mohou vznikat v důsledku působení solubilních faktorů secernovaných leukemickými buňkami do mikroprostředí kostní dřeně. Na druhé straně jsou leukemické buňky často závislé na mikroprostředí hostitele, takže většina leukemických buněk podlehne apoptóze během prvních dnů v in vitro podmínkách. I tento podpůrný vliv na leukemické buňky může být zprostředkován solubilními faktory. Většina pozornosti se logicky soustřeďuje na maligní buňky, a tak složení solubilních faktorů může být neprávem opomíjeno. Vyšetřovali jsme proteiny v kostní plazmě dětí s akutní lymfoblastickou leukemií (ALL), které mohou být zodpovědné za agresivitu ALL blastů nebo za mikroprostředím zprostředkované přežívání ALL buněk. Plazma z kostní dřeně a periferní krve byla analyzovaná pomocí proteinové array a dvojrozměrné elektroforézy (2-DE). Metodou proteinové array jsme detekovali 23 proteinů, jejichž koncentrace byla signifikantně odlišná u pacientů a kontrolních vzorků. Z kostní plazmy jsme před provedením 2-DE depletovali 12 abundatních proteinů pomocí afinitní chromatografie. Tím se nám podařilo zvýšit počet spotů, které jsme analyzovali pomocí softwaru PDQuest.

In acute leukemia (AL), several clinical symptoms may be caused by soluble factors secreted by AL cells into the bone marrow (BM) microenvironment. On the other hand, AL cells are often dependent on the microenvironment of the host, with most AL cells dying during first days after transferred to in vitro. This support of leukemic cells may be mediated by soluble factors as well. Attention is logically focused on malignant cells and the composition of soluble factors may be unjustly omitted. We aimed at identifying proteins in BM plasma of children with lymphoblastic AL (ALL), which may be responsible for ALL aggressiveness or for microenvironment-mediated survival of ALL cells. BM plasma and blood samples were analyzed by protein microarray and/or by two-dimensional electrophoresis (2D PAGE). We detected 23 proteins with a significantly different concentration in patients by Protein microarray. Before 2D PAGE, BM plasma was immuno-depleted from 12 abundant proteins by affinity chromatography. With this approach we succeeded to increase the number of spots that were analyzed by the PDQuest software.

• Klíčová slova
• akutní lymfoblastická leukemie, proteinová array, dvojrozměrná elektroforéza 2-DE, protein,
• MeSH
• 2D gelová elektroforéza metody   využití   MeSH
• akutní lymfatická leukemie genetika   metabolismus   patologie   MeSH
• akutní nemoc MeSH
• dítě MeSH
• financování organizované MeSH
• leukemie genetika   patologie   MeSH
• lidé MeSH
• proteiny analýza   MeSH
• vyšetřování kostní dřeně přístrojové vybavení   MeSH
• Check Tag
• dítě MeSH
• lidé MeSH

BACKGROUND: Mixed phenotype acute leukemia (MPAL) represents a diagnostic and therapeutic dilemma. The European Group for the Immunological Classification of Leukemias (EGIL) scoring system unambiguously defines MPAL expressing aberrant lineage markers. Discussions surrounding it have focused on scoring details, and information is limited regarding its biological, clinical and prognostic significance. The recent World Health Organization classification is simpler and could replace the EGIL scoring system after transformation into unambiguous guidelines. DESIGN AND METHODS: Simple immunophenotypic criteria were used to classify all cases of childhood acute leukemia in order to provide therapy directed against acute lymphoblastic leukemia or acute myeloid leukemia. Prognosis, genotype and immunoglobulin/T-cell receptor gene rearrangement status were analyzed. RESULTS: The incidences of MPAL were 28/582 and 4/107 for children treated with acute lymphoblastic leukemia and acute myeloid leukemia regimens, respectively. In immunophenotypic principal component analysis, MPAL treated as T-cell acute lymphoblastic leukemia clustered between cases of non-mixed T-cell acute lymphoblastic leukemia and acute myeloid leukemia, while other MPAL cases were included in the respective non-mixed B-cell progenitor acute lymphoblastic leukemia or acute myeloid leukemia clusters. Analogously, immunoglobulin/T-cell receptor gene rearrangements followed the expected pattern in patients treated as having acute myeloid leukemia (non-rearranged, 4/4) or as having B-cell progenitor acute lymphoblastic leukemia (rearranged, 20/20), but were missing in 3/5 analyzed cases of MPAL treated as having T-cell acute lymphobastic leukemia. In patients who received acute lymphoblastic leukemia treatment, the 5-year event-free survival of the MPAL cases was worse than that of the non-mixed cases (53+/-10% and 76+/-2% at 5 years, respectively, P=0.0075), with a more pronounced difference among B lineage cases. The small numbers of MPAL cases treated as T-cell acute lymphoblastic leukemia or as acute myeloid leukemia hampered separate statistics. We compared prognosis of all subsets with the prognosis of previously published cohorts. CONCLUSIONS: Simple immunophenotypic criteria are useful for therapy decisions in MPAL. In B lineage leukemia, MPAL confers poorer prognosis. However, our data do not justify a preferential use of current acute myeloid leukemia-based therapy in MPAL.

• MeSH
• akutní lymfatická leukemie diagnóza   imunologie   terapie   MeSH
• akutní myeloidní leukemie diagnóza   imunologie   terapie   MeSH
• diferenciální diagnóza MeSH
• dítě MeSH
• fenotyp MeSH
• imunofenotypizace metody   MeSH
• kojenec MeSH
• leukemie diagnóza   imunologie   terapie   MeSH
• lidé MeSH
• mladiství MeSH
• následné studie MeSH
• novorozenec MeSH
• předškolní dítě MeSH
• prognóza MeSH
• receptory antigenů T-buněk imunologie   MeSH
• Check Tag
• dítě MeSH
• kojenec MeSH
• lidé MeSH
• mladiství MeSH
• novorozenec MeSH
• předškolní dítě MeSH
• Publikační typ
• časopisecké články MeSH
• multicentrická studie MeSH
• práce podpořená grantem MeSH
• srovnávací studie MeSH

Minimal residual disease (MRD) detection using quantification of clone-specific Ig or TCR rearrangements before and after transplantation in children with high-risk ALL is an important predictor of outcome. The method and guidelines for its interpretation are very precise to avoid both false-negative and -positive results. In a group of 21 patients following transplantation, we observed detectable MRD positivities in Ig/TCR-based real-time quantitative PCR (RQ-PCR) leading to no further progression of the disease (11 of 100 (11%) total samples). We hypothesized that these positivities were mostly the result of nonspecific amplification despite the application of strict internationally agreed-upon measures. We applied two non-self-specific Ig heavy chain assays and received a similar number of positivities (20 and 15%). Nonspecific products amplified in these RQ-PCR systems differed from specific products in length and sequence. Statistical analysis proved that there was an excellent correlation of this phenomenon with B-cell regeneration in BM as measured by flow cytometry and Ig light chain-kappa excision circle quantification. We conclude that although Ig/TCR quantification is a reliable method for post transplant MRD detection, isolated positivities in Ig-based RQ-PCR systems at the time of intense B-cell regeneration must be viewed with caution to avoid the wrong indication of treatment.

• MeSH
• B-lymfocyty imunologie   MeSH
• Burkittův lymfom MeSH
• DNA nádorová genetika   MeSH
• financování organizované MeSH
• genová přestavba MeSH
• homologní transplantace imunologie   MeSH
• kojenec MeSH
• lidé MeSH
• mladiství MeSH
• polymerázová řetězová reakce MeSH
• předškolní dítě MeSH
• reziduální nádor diagnóza   genetika   MeSH
• sekvenční analýza hybridizací s uspořádaným souborem oligonukleotidů MeSH
• transfuze lymfocytů MeSH
• transplantace kmenových buněk MeSH
• Check Tag
• kojenec MeSH
• lidé MeSH
• mladiství MeSH
• mužské pohlaví MeSH
• předškolní dítě MeSH