The aim of this study was to compare the expression of selected genes in bovine embryos developed from oocytes with different developmental competence. Four oocyte populations were collected, separately either from small (2-5 mm) or medium (6-10 mm) follicles, in the growth/stagnation (G/S) or dominance/regression (D/R) stage of the first follicular wave. They were matured, fertilized and cultured to D7 or D8 blastocysts by a standard protocol. Poly (A)+ mRNA was extracted from pooled blastocysts and the expression of bax-alpha (Bax), connexin 43 (Cx 43) and connexin 31 (Cx 31) was estimated using real-time RT-PCR. The cleavage rates were significantly higher in oocytes collected from both medium and small follicles, (p < or = 0.05 and p < or = 0.01, respectively) in the G/S than in the D/R stage. There were no significant differences in the D7 blastocyst rates between oocytes from both medium and small follicles in the G/S or D/R stage. But the D8 blastocyst rate was significantly higher in oocytes from small follicles in the G/S stage compared with those in the D/R stage. The relative abundance of Bax and Cx 31 made no significant difference in both D7 and D8 blastocysts developed from oocytes collected from medium or small follicles in the G/S or D/R stages. But the relative abundance of the Cx 43 transcript was significantly higher in D8 blastocysts developed from oocytes collected from both medium and small follicles in the G/S stage compared with those in the D/R stage. We conclude that the relative abundance of Cx 43 can be used as a marker of developmental potential for embryos derived from oocytes with different developmental competence because the level of Cx 43 transcript was greater in embryos derived from oocytes with greater developmental competence compared with those derived from oocytes with lesser developmental competence.

• MeSH
• blastocysta fyziologie   MeSH
• embryo savčí metabolismus   MeSH
• embryonální vývoj MeSH
• exprese genu MeSH
• financování organizované MeSH
• konexin 43 genetika   MeSH
• konexiny genetika   MeSH
• messenger RNA analýza   izolace a purifikace   MeSH
• oocyty fyziologie   MeSH
• ovariální folikul cytologie   růst a vývoj   MeSH
• polymerázová řetězová reakce s reverzní transkripcí MeSH
• protein X asociovaný s bcl-2 genetika   MeSH
• skot embryologie   MeSH
• zvířata MeSH
• Check Tag
• skot embryologie   MeSH
• ženské pohlaví MeSH
• zvířata MeSH

The present experiments were designed to study the effects of Robertsonian translocations on the efficiency and kinetics of in vitro fertilization and early and advanced embryo development. Spermatozoa from bulls with rob(16;20), rob(1;29) and normal karyotype (A, B and C, respectively) were used. Oocytes were matured, fertilized and cultured by the standard protocol described previously. Twenty-four hours after fertilization, adequate numbers of oocytes were fixed, stained and examined. The development of embryos was evaluated on days 2 (D2), 7 (D7) and 8 (D8) after fertilization. The rate of normally fertilized oocytes was significantly lower (p < or = 0.01) for bull A than for bulls B and C. However, no significant differences in the kinetics of fertilization were found between bulls A, B and C. The D2 cleavage rate of embryos was significantly lower (p < or = 0.01) for bull A than for bulls B and C. Both D7 and D8 blastocyst rates for bull A or bull B were significantly lower (p < or = 0.01 or p < or = 0.05) than those for bull C. The percentages of both D7 advanced blastocysts and D8 expanded blastocysts were significantly lower (p < or = 0.01) for bulls A and B than for bull C. In conclusion, for rob(16;20), the efficiency of fertilization was strongly reduced; it resulted in low early and advanced embryo development. On the other hand, for the rob(1;29), neither fertilization nor early embryo development were affected and only advanced embryo development was decreased. But for both translocations, blastocyst formation was significantly delayed.

• MeSH
• analýza rozptylu MeSH
• embryonální vývoj fyziologie   genetika   MeSH
• fertilizace in vitro metody   veterinární   MeSH
• fertilizace fyziologie   genetika   MeSH
• financování organizované MeSH
• oocyty fyziologie   MeSH
• skot embryologie   genetika   MeSH
• spermie chemie   MeSH
• translokace genetická genetika   MeSH
• zvířata MeSH
• Check Tag
• mužské pohlaví MeSH
• skot embryologie   genetika   MeSH
• zvířata MeSH
• Publikační typ
• srovnávací studie MeSH

Reprodukční genetika (RG) je dalším novým odvětvím lékařské genetiky, integrovaným s reprodukční medicínou, asistovanou reprodukcí a vývojovou genetikou. RG je úzce vázána na perikoncepční a perinatologickou prevenci, ultrazvukový a biochemický skríning v I. trimestru a na začátku II. trimestru. RG je založena na systému speciali- zovaného genetického poradenství, klinické cytogenetiky, molekulární cytogenetiky a molekulární genetiky, aby bylo možno zajistit prefertilizační, preimplantační, klasickou prenatální diagnózu od I. do III. trimestru gravidity. Stává se tak součástí fetální medicíny a terapie. Jsou shrnuty šestileté zkušenosti se zaváděním a rozvojem reprodukční genetiky. Je navrhován systém této specializované léčebně preventivné péče, v němž by byla integrována RG s reprodukční medicínou (RM), pokud možno v jednom centru. RM zajišťuje všechna potřebná gynekologická a andrologická vyšetření, metody asistované reprodukce, ultrazvukové porodnické vyšetření včetně ultrazvukového skríningu v I. a II. trimestru s měřením nuchální translucence, s využitím 2D a 3D ultrazvuku a echokardiografie a rovněž tak invazivní metody prenatální diagnostiky v případech, že bude indikována, a rovněž tak potřebnou perinatologickou péči. V rámci RG je zajišťováno specializované genetické poradenství, které by mělo býti poskytováno všem partnerům s těžkými poruchami reprodukce, rovněž tak dárkyním oocytů. V indikovaných případech je doporučováno chromozomální vyšetření obou partnerů. Chromozomální aberace byly zjištěny u 6 % mužů s abnormálními výsledky vyšetření spermií a rovněž tak u žen s těžkými poruchami reprodukce. U mužů s těžkou oligo/azoospermií je doporučováno vyšetření aneuploidie spermií molekulárně cytogenetickými metodami. Rovněž je doporučeno molekulárně genetické vyšetření mikrodelecí chromozómu Y, které byly zjištěny u 9 % mužů s azoospermií s delecemi v oblasti AZFb. Vyšetření mutací a polymorfizmů intronu 8 a 10 CFTR genu je prováděno nejenom u mužů s obstrukční azoospermií (CBAVD), ale také u mužů s těžkou oligospermií s počtem spermií méně než 1x10 6 /ml ejakulátu. Molekulárně genetické vyšetření trombofilních mutací faktoru II., faktoru V. (Leiden) a MTHFR genu je doporučováno u poruch reprodukcí u žen s nevysvětlitelnými opakovanými potraty a také v případech opakovaně neúspěšné fertilizace in vitro. Byla zjištěna populační frekvence nosičů mutací faktoru II. (2,3 %), faktoru V. (5,7 %) a MTHFR genu (38 %). Byla zavedena laserová biopsie prvého polárního tělíska a blastomér pro vyšetření pohlaví a nejčastějších aneuploidií metodou FISH a pro vyšetření nejčastějších aneuploidií chromozómů 13, 18, 21, X a Y a pro detekci nejčastější mutace delta F508 CFTR genu metodou kvantitativní fluorescenční PCR (QFPCR). QFPCR byla rovněž úspěšně využita k vyšetření mužského pohlaví z částečně purifikovaných fetálních buněk v krvi matky. Je prováděn ultrazvukový a biochemický a skríning PAPP-A proteinu a bhCG v I. trimestru u všech úspěšných těhotenství po IVF. Při zjištění hraničních hodnot biochemického skríningu v I. trimestru bez patologického ultrazvukového nálezu je doporučováno vyšetření klasickým triple testem bioche - mického skríningu v 16. týdnu gravidity. V případě patologických výsledků ultrazvukového a biochemického skríningu je indikována invazivní prenatální genetická diagnostika a rovněž tak u všech gravidit po ICSI, pokud není kontraindikována z porodnických důvodů.

Reproductive genetics (RG) is another new field of medical genetics, integrated with reproductive medicine, assisted reproduction and developmental genetic. RG is closely linked to the periconceptional prevention, perinato- logy, ultrasound and biochemical screening in the end of the first and beginning of the second trimesters. RG is based on the system of specialized genetic counseling, clinical cytogenetics, molecular cytogenetics and molecular genetics to provide prefertilization, preimplantation and classical prenatal diagnosis in the Ist to IIIrd trimesters. Thus, RG is part of the fetal medicine and therapy. The six years experience with RG is summarized. A system of the specialized health care, organized, if possible in one integrated center of RG and reproductive medicine (RM) is presented. Reproductive medicine provides all necessary clinical gynecological and andrological surveillance, with assisted reproduction and further obstetrical ultrasound examinations, including nuchal translucency measurements and 2D, 3D ultrasound, echokardiography examinations, if indicated, as well as the invasive method of prenatal diagnosis and perinatology care. Specialized genetic counseling and cytogenetic analysis, if indicated, should be offered to all partners with reproductive disorders as well as to oocyte donors. Chromosome anomalies are disclosed in 6% of men with abnormal sperm analysis as well as in women with severe reproductive disorders. In males with severe oligo, azoospermia, the sperm aneuploidy analysis by molecular cytogenetic methods is recommended. Adviced is also the molecular genetic detection of Y chromosome microdeletions, which is detected in 9% of our azoospermic men with deletions in AZFb region. CFTR gene mutations and intron 8 and 10 polymorphism examination is provided not only in men with obstructive azoospermia (CBAVD), but also if severe oligospermy with less than 1x10 6 sperm/ml is detected. Molecular genetic analysis of thrombophilic mutations of factor II., V. (Leiden) and MTHFR gene in unexplained recurrent abortions and in cases with unsuccessful IVF is part of the diagnostic strategy. The population frequencies of carriers of mutation of factor II. (2.3%), factor V.-Leiden (5.7%) and MTHFR gene (38%) were determined. The laser biopsy of the first polar body and of blastomeres was introduced for FISH analysis of chromosome aneuploidies. Quantitative fluorescent PCR (QFPCR) detection is used for testing of the most frequent delta F508 CFTR gene mutation and the most frequent aneuploidies of chromosome 13, 18, 21, X and Y. QFPCR was successfully tested for male fetal sex examination from partially purified fetal cells in the maternal blood. The first trimester ultrasound and biochemical screening is recommended to all successful pregnancies after different IVF methods. If borderline levels of first trimester biochemical screening of PAPP-A protein and bhCG are detected without pathological ultrasound findings, classical triple test of biochemical screening in 16th week of gestation is recommended. If pathological results of ultrasound and biochemical screening are disclosed, invasive prenatal genetic diagnosis is indicated as well as in pregnancies after ICSL, if there is not any obstetrical contraindication.

• MeSH
• chromozomální aberace diagnóza   MeSH
• genetické poradenství MeSH
• lidé MeSH
• prenatální diagnóza MeSH
• reprodukční lékařství MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• ženské pohlaví MeSH
• Publikační typ
• přehledy MeSH

• MeSH
• aneuploidie MeSH
• hybridizace in situ fluorescenční využití   MeSH
• oocyty fyziologie   ultrastruktura   MeSH
• prasata MeSH
• zvířata MeSH
• Check Tag
• zvířata MeSH