Q59705579
Dotaz
Zobrazit nápovědu
The three most frequent pediatric sarcomas, i.e., Ewing's sarcoma, osteosarcoma, and rhabdomyosarcoma, were examined in this study: three cell lines derived from three primary tumor samples were analyzed from each of these tumor types. Detailed comparative analysis of the expression of three putative cancer stem cell markers related to sarcomas-ABCG2, CD133, and nestin-was performed on both primary tumor tissues and corresponding cell lines. The obtained results showed that the frequency of ABCG2-positive and CD133-positive cells was predominantly increased in the respective cell lines but that the high levels of nestin expression were reduced in both osteosarcomas and rhabdomyosarcomas under in vitro conditions. These findings suggest the selection advantage of cells expressing ABCG2 or CD133, but the functional tests in NOD/SCID gamma mice did not confirm the tumorigenic potential of cells harboring this phenotype. Subsequent analysis of the expression of common stem cell markers revealed an evident relationship between the expression of the transcription factor Sox2 and the tumorigenicity of the cell lines in immunodeficient mice: the Sox2 levels were highest in the two cell lines that were demonstrated as tumorigenic. Furthermore, Sox2-positive cells were found in the respective primary tumors and all xenograft tumors showed apparent accumulation of these cells. All of these findings support our conclusion that regardless of the expression of ABCG2, CD133 and nestin, only cells displaying increased Sox2 expression are directly involved in tumor initiation and growth; therefore, these cells fit the definition of the cancer stem cell phenotype.
- MeSH
- ABC transportér z rodiny G, člen 2 metabolismus MeSH
- antigen AC133 metabolismus MeSH
- dítě MeSH
- dospělí MeSH
- lidé MeSH
- mladiství MeSH
- myši inbrední NOD MeSH
- myši SCID MeSH
- myši MeSH
- nádorová transformace buněk metabolismus patologie MeSH
- nádorové biomarkery metabolismus MeSH
- nádorové buněčné linie MeSH
- nádorové kmenové buňky metabolismus patologie MeSH
- nádorové proteiny metabolismus MeSH
- nestin metabolismus MeSH
- osteosarkom metabolismus patologie MeSH
- předškolní dítě MeSH
- rhabdomyosarkom metabolismus patologie MeSH
- sarkom metabolismus patologie MeSH
- transkripční faktory SOXB1 metabolismus MeSH
- zvířata MeSH
- Check Tag
- dítě MeSH
- dospělí MeSH
- lidé MeSH
- mladiství MeSH
- mužské pohlaví MeSH
- myši MeSH
- předškolní dítě MeSH
- ženské pohlaví MeSH
- zvířata MeSH
- Publikační typ
- časopisecké články MeSH
- srovnávací studie MeSH
CD133 (also known as prominin-1) is a cell surface glycoprotein that is widely used for the identification of stem cells. Furthermore, its glycosylated epitope, AC133, has recently been discussed as a marker of cancer stem cells in various human malignancies. During our recent experiments on rhabdomyosarcomas (RMS), we unexpectedly identified an atypical nuclear localization of CD133 in a relatively stable subset of cells in five RMS cell lines established in our laboratory. To the best of our knowledge, this atypical localization of CD133 has not yet been proven or analyzed in detail in cancer cells. In the present study, we verified the nuclear localization of CD133 in RMS cells using three independent anti-CD133 antibodies, including both rabbit polyclonal and mouse monoclonal antibodies. Indirect immunofluorescence and confocal microscopy followed by software cross-section analysis, transmission electron microscopy and cell fractionation with immunoblotting were also employed, and all the results undeniably confirmed the presence of CD133 in the nuclei of stable minor subpopulations of all five RMS cell lines. The proportion of cells showing an exclusive nuclear localization of CD133 ranged from 3.4 to 7.5%, with only minor differences observed among the individual anti-CD133 antibodies. Although the role of CD133 in the cell nucleus remains unclear, these results clearly indicate that this atypical nuclear localization of CD133 in a minor subpopulation of cancer cells is a common phenomenon in RMS cell lines.
- MeSH
- buněčné jádro metabolismus MeSH
- CD antigeny imunologie metabolismus MeSH
- fluorescenční protilátková technika nepřímá MeSH
- glykoproteiny imunologie metabolismus MeSH
- lidé MeSH
- monoklonální protilátky imunologie MeSH
- nádorové biomarkery metabolismus MeSH
- nádorové buněčné linie MeSH
- peptidy imunologie metabolismus MeSH
- rhabdomyosarkom metabolismus MeSH
- transmisní elektronová mikroskopie MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- Publikační typ
- časopisecké články MeSH
- práce podpořená grantem MeSH
Nádorové kmenové buňky (cancer stem cells – CSCs) jsou považovány za populaci buněk, která odpovídá za iniciaci a progresi nádoru, účastní se procesu metastazování a je možnou příčinou získané lékové rezistence a rekurence nádorů. CSCs disponují schopností sebeobnovy a mají tumorigenní potenciál. Funkční testy, které umožňují detekovat zmiňované vlastnosti, jsou hlavním nástrojem pro identifikaci nádorových kmenových buněk. Tento článek přináší ucelený přehled in vivo a in vitro metod využívaných pro průkaz CSCs s důrazem na recentně zaváděné techniky detekce CSCs. Mezi nejčastěji prováděné funkční testy patří test tumorigenicity in vivo, testy tvorby sfér (sphere formation assay) a kolonií (colony‑forming unit assay) a rovněž detekce tzv. vedlejší populace (side population). Dále jsou popsány metody zadržování detekční značky (label‑retention assay) a test aktivity aldehyddehydrogenázy.
Cancer stem cells (CSCs) are considered to be a population of tumor cells, which are responsible for tumor initiation and progression. They are also involved in metastasizing and may be a possible cause of multidrug resistance and tumor recurrence. CSCs possess the ability to self‑renew and show a tumorigenic potential. Functional assays, which enable the detection of these properties, represent the main tool for identification of CSCs. This article summarizes both in vitro and in vivo methods used to identify the CSCs with emphasis on recently employed techniques of CSCs detection. In vivo tumorigenicity assay, sphere formation assay and colony‑forming unit assay belong to the most commonly used functional assays. Further, label‑retention assay and aldehyde dehydrogenase activity assay are described in this article. Key words: cancer stem cells – functional assays – tumorigenicity – tumor spheres – colony‑forming unit assay – side population cells – aldehyde dehydrogenase The study was supported by grant of Internal Grant Agency of the Czech Ministry of Health No. NT13443-4 and by the European Regional Development Fund and the State Budget of the Czech Republic – RECAMO, CZ.1.05//2.1.00/03.0101 and by the project CEB, OP VK CZ.1.07/2.3.00/20.0183. The authors declare they have no potential conflicts of interest concerning drugs, products, or services used in the study. The Editorial Board declares that the manuscript met the ICMJE “uniform requirements” for biomedical papers. Submitted: 16. 1. 2014 Accepted: 4. 4. 2014
- Klíčová slova
- tumorigenicita, tvorba kolonií, nádorové sféry, myši NSG, test zadržování detekční značky, label-retention assay,
- MeSH
- aldehyddehydrogenasa analýza MeSH
- analýza kolonii tvořících jednotek * metody MeSH
- buněčné kultury MeSH
- buněčné sféroidy MeSH
- fluoresceiny metabolismus MeSH
- kultivační média MeSH
- myši inbrední NOD MeSH
- myši SCID MeSH
- myši MeSH
- nádorové buňky kultivované * MeSH
- nádorové kmenové buňky MeSH
- testy karcinogenity * metody MeSH
- testy nádorových kmenových buněk * metody MeSH
- transplantace nádorů * metody MeSH
- vedlejší populace buněk MeSH
- zvířata MeSH
- Check Tag
- myši MeSH
- zvířata MeSH
- Publikační typ
- práce podpořená grantem MeSH
Identifikace nádorových kmenových buněk v současnosti představuje jednu z nejdůležitějších oblastí výzkumu, neboť nádorové kmenové buňky hrají důležitou úlohu v iniciaci a progresi nádoru, stejně jako v procesech metastazování a relapsu onemocnění. Tento článek shrnuje současné poznatky o známých i předpokládaných markerech nádorových kmenových buněk v různých typech sarkomů kostí i měkkých tkání. Zvláštní pozornost je věnována detekci CD133, ABC transportérů, nestinu a aldehyddehydrogenázy, které byly v posledních letech intenzivně zkoumány jak v nádorové tkáni, tak v sarkomových buněčných liniích. V závěru článku je uveden přehled možných fenotypů nádorových kmenových buněk, které byly prokázány funkčními testy tumorigenicity.
The identification of cancer stem cell markers represents one of the very relevant research topics because cancer stem cells play important roles in tumour initiation and progression, as well as during metastasis formation and in relapse of the disease. This article summarises recent knowledge on well-known and putative cancer stem cell markers in various types of bone and soft-tissue sarcomas. Special attention is paid to the detection of CD133, ABC transporters, nestin and aldehyde dehydrogenase that have been intensively studied both in tumour tissues and in sarcoma cell lines during the past few years. Finally, an overview is given of the possible CSC phenotypes provided by functional assays of tumourigenicity.
- Klíčová slova
- tumorigenicita, aldehyddehydrogenáza, CD133, rabdomyosarkom,
- MeSH
- ABC transportéry analýza genetika MeSH
- aldehyddehydrogenasa analýza genetika MeSH
- CD antigeny analýza genetika MeSH
- glykoproteiny analýza genetika MeSH
- lidé MeSH
- nádorové biomarkery analýza MeSH
- nádorové buněčné linie MeSH
- nádorové kmenové buňky * patologie MeSH
- nestin MeSH
- osteosarkom diagnóza genetika MeSH
- peptidy analýza genetika MeSH
- proteiny intermediálních filament analýza genetika MeSH
- rhabdomyosarkom diagnóza genetika MeSH
- sarkom * diagnóza genetika MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- Publikační typ
- práce podpořená grantem MeSH
