UNLABELLED: As angiogenesis plays a key role in tumor growth and metastasis, the angiogenic process has attracted scientific interest as a target for diagnostic and therapeutic agents. Factors influencing angiogenesis include the vascular endothelial growth factor (VEGF) family and the two associated receptor types (VEGFR-1 and VEGFR-2). VEGFR-1/-2 detection and quantification in cancer lesions are essential for tumor process management. As a result of the advantageous pharmacokinetics and image contrast, peptides radiolabeled with PET emitters have become interesting tools for the visualization of VEGFR-1/-2-positive tumors. In this study, we prepared 68Ga-labeled peptides containing 15 (peptide 1) and 23 (peptide 2) amino acids as new PET tracers for tumor angiogenic process imaging. METHODS: The peptides were conjugated with NODAGA-tris(t-Bu ester) and subsequently radiolabeled with [68Ga]Ga-chloride. The prepared [68Ga]Ga-NODAGA-peptide 1 and [68Ga]Ga-NODAGA-peptide 2 were tested for radiochemical purity and saline/plasma stability. Consequently, the binding affinity toward VEGFRs was assessed in vitro on human glioblastoma and kidney carcinoma cells. The found peptide receptor affinity was compared with the calculated values in the PROtein binDIng enerGY prediction (PRODIGY) server. Finally, the biodistribution study was performed on BALB/c female mice to reveal the basic pharmacokinetic behavior of radiopeptides. RESULTS: The in vitro affinity testing of [68Ga]Ga-NODAGA-peptides 1 and 2 showed retained receptor binding as characterized by equilibrium dissociation constant (KD) values in the range of 0.5-1.2 μM and inhibitory concentration 50% (IC50) values in the range of 3.0-5.6 μM. Better binding properties of peptide 2 to VEGFR-1/-2 were found in the PRODIGY server. The biodistribution study on mice showed remarkable accumulation of both peptides in the kidneys and urinary bladder with a short half-life after intravenous application. The in vitro plasma stability of [68Ga]Ga-NODAGA-peptide 2 was superior to that of [68Ga]Ga-NODAGA-peptide 1. CONCLUSIONS: The obtained results demonstrated a high radiolabeling yield with no need for purification and preserved binding potency of 68Ga-labeled peptides 1 and 2 toward VEGFRs in cancer cells. The peptide-receptor protein interaction assessed in protein-peptide docking determined the strongest interaction of peptide 2 with domain 2 of VEGFR-2 in addition to a more acceptable plasma stability (t1/2 = 120 min) than that for peptide 1. We found both radiolabeled peptides very potent in their receptor binding, which makes them suitable imaging agents. The rapid transition of the radiopeptides into the urinary tract indicates suitable pharmacokinetic characteristics.
- MeSH
- aminokyseliny MeSH
- chloridy MeSH
- estery MeSH
- heterocyklické sloučeniny monocyklické chemie MeSH
- lidé MeSH
- myši inbrední BALB C MeSH
- myši MeSH
- nádorové buněčné linie MeSH
- peptidy chemie MeSH
- pozitronová emisní tomografie metody MeSH
- radioizotopy galia * chemie MeSH
- receptor 1 pro vaskulární endoteliální růstový faktor MeSH
- receptor 2 pro vaskulární endoteliální růstový faktor MeSH
- receptory vaskulárního endoteliálního růstového faktoru MeSH
- tkáňová distribuce MeSH
- vaskulární endoteliální růstový faktor A * MeSH
- zvířata MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- myši MeSH
- ženské pohlaví MeSH
- zvířata MeSH
- Publikační typ
- časopisecké články MeSH
- práce podpořená grantem MeSH
- Klíčová slova
- ramucirumab,
- MeSH
- adenokarcinom diagnóza farmakoterapie MeSH
- gastroezofageální junkce * patologie MeSH
- humanizované monoklonální protilátky terapeutické užití MeSH
- indukce remise MeSH
- kombinovaná farmakoterapie MeSH
- lidé MeSH
- nádory jícnu diagnóza farmakoterapie MeSH
- nádory žaludku diagnóza farmakoterapie MeSH
- paclitaxel terapeutické užití MeSH
- receptor 2 pro vaskulární endoteliální růstový faktor * antagonisté a inhibitory MeSH
- senioři MeSH
- výsledek terapie MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- senioři MeSH
- ženské pohlaví MeSH
- Publikační typ
- kazuistiky MeSH
Karcinom žaludku patří v České republice mezi malignity s klesající incidencí v čase, celosvětově jde o třetí nejčastější příčinu úmrtí na onkologickou diagnózu. Nejčastějším histologickým podtypem je adenokarcinom. Léčba adenokarcinomu žaludku je vždy komplexní, zahrnující operativu, chemoterapii, radioterapii i cílenou terapii. Ramucirumab je monoklonální protilátka proti receptoru vaskulárního endoteliálního růstového faktoru 2 (vascular endothelial growth factor receptor 2, VEGFR-2), která blokuje vazbu specifického ligandu a tím brání přenosu signálu a spuštění signální dráhy vedoucí k nádorové neoangiogenezi. Účinnost byla popsána ve dvou studiích - RAINBOW a REGARD.
Gastric cancer is one of the malignancies in the Czech Republic with a declining incidence over time and is the third most common cause of death from oncological diagnosis worldwide. The most common histological subtype is adenocarcinoma. The treatment of gastric adenocarcinomas is always complex, including surgery, chemotherapy, radiotherapy and targeted therapy. Ramucirumab is a monoclonal antibody against vascular endothelial growth factor receptor 2 (VEGFR-2), which blocks the binding of a specific ligand, thereby preventing signal transduction and triggering a signaling pathway leading to tumor neoangiogenesis. Efficacy has been described in two studies - RAINBOW and REGARD.
- Klíčová slova
- ramucirumab,
- MeSH
- antitumorózní látky farmakologie škodlivé účinky terapeutické užití MeSH
- humanizované monoklonální protilátky farmakologie terapeutické užití MeSH
- lidé MeSH
- nádory žaludku * farmakoterapie krevní zásobení MeSH
- patologická angiogeneze patofyziologie MeSH
- receptor 2 pro vaskulární endoteliální růstový faktor * antagonisté a inhibitory MeSH
- receptory vaskulárního endoteliálního růstového faktoru fyziologie MeSH
- vaskulární endoteliální růstové faktory fyziologie MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
BACKGROUND: Clubfoot deformity (pes equinovarus) is one of the most common birth defects, and its etiology is still unknown. Initial clubfoot treatment is based on the Ponseti method throughout most of the world. Despite the effectiveness of this therapy, clubfoot may relapse. Recent studies confirm the theory of active fibrotic remodeling processes in the extracellular matrix of the affected tissue. The aim of this study was to clarify whether relapses in clubfoot therapy are associated with altered angiogenesis and to suggest possible regulatory pathways of this pathologic process. METHODS: We compared microvessel density, arteriole density, and concentration of angioproliferative-related proteins found between tissues in the contracted, that is, the medial side (M-side), and noncontracted, that is, the lateral side (L-side) of the relapsed clubfeet. Tissue samples from 10 patients were analyzed. Histopathologic analysis consisted of immunohistochemistry and image analysis. Real-time polymerase chain reaction was used to study mRNA expression. RESULTS: An increase in microvessel and arteriole density was noted in contracted, relapsed clubfoot tissue. This was accompanied by a significant increase in the levels of the vascular endothelial growth factor, vascular endothelial growth factor receptor 2, β catenin and active β catenin. Vascular endothelial growth factor, vascular endothelial growth factor receptor 2, and CD31 overexpression was also seen with mRNA analysis. CONCLUSIONS: Increased microvessel and arteriole density in the contracted side of the relapsed clubfoot was noted. These processes are mediated by specific proangiogenic proteins that are overexpressed in the contracted tissue. These findings contribute to the etiology and the development of relapses in the treatment of clubfoot. LEVEL OF EVIDENCE: Level II-analytical and prospective.
- MeSH
- arterioly * MeSH
- beta-katenin metabolismus MeSH
- lidé MeSH
- patologická angiogeneze * MeSH
- pes equinovarus etiologie metabolismus terapie MeSH
- předškolní dítě MeSH
- prospektivní studie MeSH
- receptor 2 pro vaskulární endoteliální růstový faktor metabolismus MeSH
- recidiva MeSH
- sádrové obvazy MeSH
- vaskulární endoteliální růstový faktor A metabolismus MeSH
- výsledek terapie MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- mužské pohlaví MeSH
- předškolní dítě MeSH
- ženské pohlaví MeSH
- Publikační typ
- časopisecké články MeSH
Focal adhesion kinase (FAK) is essential for vascular endothelial growth factor-A (VEGFA)/VEGF receptor-2 (VEGFR2)-stimulated angiogenesis and vascular permeability. We have previously noted that presence of the Src homology-2 domain adapter protein B (SHB) is of relevance for VEGFA-stimulated angiogenesis in a FAK-dependent manner. The current study was conducted in order address the temporal dynamics of co-localization between these components in HEK293 and primary lung endothelial cells (EC) by total internal reflection fluorescence microscopy (TIRF). An early (<2.5 min) VEGFA-induced increase in VEGFR2 co-localization with SHB was dependent on tyrosine 1175 in VEGFR2. VEGFA also enhanced SHB co-localization with FAK. FAK co-localization with VEGFR2 was dependent on SHB since it was significantly lower in SHB deficient EC after VEGFA addition. Absence of SHB also resulted in a gradual decline of VEGFR2 co-localization with FAK under basal (prior to VEGFA addition) conditions. A similar basal response was observed with expression of the Y1175F-VEGFR2 mutant in wild type EC. The distribution of focal adhesions in SHB-deficient EC was altered with a primarily perinuclear location. These live cell data implicate SHB as a key component regulating FAK activity in response to VEGFA/VEGFR2.
- MeSH
- adaptorové proteiny signální transdukční metabolismus MeSH
- endoteliální buňky metabolismus MeSH
- fokální adhezní tyrosinkinasy genetika metabolismus MeSH
- fyziologická neovaskularizace fyziologie MeSH
- HEK293 buňky MeSH
- lidé MeSH
- myši inbrední BALB C MeSH
- myši knockoutované MeSH
- myši MeSH
- pohyb buněk fyziologie MeSH
- protoonkogenní proteiny metabolismus MeSH
- receptor 2 pro vaskulární endoteliální růstový faktor metabolismus MeSH
- vaskulární endoteliální růstový faktor A genetika metabolismus MeSH
- zvířata MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- mužské pohlaví MeSH
- myši MeSH
- ženské pohlaví MeSH
- zvířata MeSH
- Publikační typ
- časopisecké články MeSH
- práce podpořená grantem MeSH
Background/Aim: Radiolabelling of monoclonal antibodies (mAbs) could be beneficial in cancer diagnosis and therapy, however it may cause structural changes and consequently deteriorate their immunoreactivity. Materials and Methods: The therapeutic mAb ramucirumab (RAM) was technetium-99m labelled using either a direct or an indirect method with the use of two bifunctional chelating agents (HYNIC, DTPA). The radiochemical purity was assessed using instant thin-layer chromatography (ITLC) and high-performance liquid chromatography (HPLC) technique. The affinity of radiolabelled RAM was tested on human cancer cell lines. Results: The radiolabelling provided the following stable compounds: [99mTc]RAM, [99mTc]HYNIC-RAM and [99mTc]DTPA-RAM. Their radiochemical purity was over 95%. All prepared radiopharmaceuticals showed moderate affinity to the targeted receptor, in vitro. However, their affinity was one order lower compared to that of the natural mAb. Moreover, directly and DTPA-radiolabelled RAM demonstrated less favourable binding kinetics. Conclusion: Radiolabelling negatively affected the affinity of RAM to its targeted receptor.
- MeSH
- chelátory chemie MeSH
- chromatografie na tenké vrstvě MeSH
- inhibiční koncentrace 50 MeSH
- inhibitory angiogeneze chemie farmakologie MeSH
- lidé MeSH
- monoklonální protilátky chemie farmakologie MeSH
- nádorové buněčné linie MeSH
- nádory prostaty patologie MeSH
- poločas MeSH
- radiofarmaka farmakologie MeSH
- receptor 2 pro vaskulární endoteliální růstový faktor metabolismus MeSH
- technecium MeSH
- tkáňová distribuce MeSH
- vysokoúčinná kapalinová chromatografie MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- mužské pohlaví MeSH
- Publikační typ
- časopisecké články MeSH
Zhoubný novotvar tlustého střeva a konečníku je jednou z nejčastějších onkologických diagnóz v ČR i v celosvětovém měřítku. Asi u poloviny pacientů s touto diagnózou dochází k rozvoji diseminovaného onemocnění, což významně zhoršuje dosažitelné výsledky léčby. Metastatický kolorektální karcinom je systémovým onemocněním vyžadujícím systémovou léčbu. Standardem zůstává chemoterapie, která působí neselektivně na rychle rostoucí buňky organismu. Nástup antiangiogenní terapie v kombinaci s chemoterapií znamenal velký průlom v léčbě diseminovaného nádoru kolorekta. Přidání cílených přípravků k chemoterapii, ale i jejich samostatné použití (zejména ve vyšších liniích léčby) může vést ke zlepšení léčebných výsledků.
Malignant neoplasm of the colon and rectum is one of the most frequent oncologic diagnosis in the Czech Republic as well as on a global scale. About half of the patients with this diagnosis encounters disseminated disease which is associated with worsening of treatment outcomes. Metastatic colorectal carcinoma is systemic disease requiring systemic treatment. Standard of care is represented by chemotherapy which hits any quickly growing cell unselectively. The arrival of anti-angiogenic agents combined with chemotherapy was considered as a great breakthrough in the treatment of disseminated colorectal cancer. Adding of targeted agents to chemo-therapy, or using targeted drugs alone – especially in the further lines of treatment, can lead to improvement of treatment results.
- MeSH
- bevacizumab aplikace a dávkování farmakologie MeSH
- inhibitory angiogeneze aplikace a dávkování farmakokinetika farmakologie MeSH
- inhibitory proteinkinas farmakologie terapeutické užití MeSH
- kolorektální nádory * farmakoterapie patologie MeSH
- lidé MeSH
- monoklonální protilátky farmakologie terapeutické užití MeSH
- protokoly antitumorózní kombinované chemoterapie MeSH
- receptor 2 pro vaskulární endoteliální růstový faktor antagonisté a inhibitory účinky léků MeSH
- receptory vaskulárního endoteliálního růstového faktoru účinky léků MeSH
- rekombinantní fúzní proteiny aplikace a dávkování farmakologie MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
Non-small-cell lung cancer (NSCLC), the most common type of lung cancer, remains the leading cause of cancer death worldwide. Blocking vascular endothelial growth factor (VEGF) signalling is an effective approach to the treatment of NSCLC. Small molecules have been proven to be good resource for discovery of inhibitors of VEGF signalling. DMH4 is a small molecule that we previously developed and demonstrated to have the property of selectively inhibiting VEGF signalling by targeting VEGF receptor 2 (VEGFR2). In this study, we reported that DMH4 can effectively block phosphorylation of VEGFR2 in both H460 and A549 NSCLC cells, which resulted in significant reduction of NSCLC cell viability in a dose-dependent manner, and the growth inhibition (GI50) of DMH4 against H460 and A549 cell lines were 13.27 and 2.75 mm respectively at 24 h. Our further studies demonstrated that DMH4 significantly suppressed migration and invasion of A549 and H460 cells, and induced apoptosis in those cells. Therefore, DMH4 as a small molecular VEGFR2 inhibitor may represent a new valuable drug lead for NSCLC treatment.
- MeSH
- antitumorózní látky farmakologie MeSH
- apoptóza účinky léků MeSH
- fosforylace účinky léků MeSH
- nádorové buňky kultivované účinky léků MeSH
- nemalobuněčný karcinom plic * farmakoterapie metabolismus MeSH
- proliferace buněk účinky léků MeSH
- receptor 2 pro vaskulární endoteliální růstový faktor antagonisté a inhibitory metabolismus MeSH
- techniky in vitro MeSH
- Publikační typ
- práce podpořená grantem MeSH
V současné klinické praxi cílenou terapii žaludečního adenokarcinomu představuje použití anti-HER2 monoklonální protilátky trastuzumabu u nádorů s imunohistochemickým skóre 3+ a zároveň s prokázanou amplifikací genu HER2 in situ hybridizací. Na základě současných poznatků o molekulární biologii adenokarcinomu žaludku, roli nádorového mikroprostředí a jeho cévním zásobení se jako slibné možnosti dalšího vývoje cílené terapie jeví zejména ovlivnění PD-1/PD-L1 a inhibice VEGFR2. Studie efektivity nových postupů cílené terapie, stejně jako zavádění metodik prediktivní diagnostiky, jsou však komplikovány nedostatečnou subtypizací nádorů ve studovaných souborech.
Anti-HER2 monoclonal antibody trastuzumab remains the only targeted therapy of gastric carcinoma based on histopathological predictive diagnostics used in current routine clinical practice. In the Czech Republic only the adenocarcinomas with HER2 immunohistochemical score of 3+, together with HER2 amplification detected with in situ hybridization are indicated for treatment with trastuzumab. There has been recent progress in our understanding of the molecular biology of gastric cancer, the role of its tumor microenvironment and vascular supply points to PD-1/PD-L1 and VEGFR2 as possible future targets of targeted therapy. Unfortunately, the interpretation of the results of pharmacological studies, as well as establishing new algorithms of predictive diagnostics are complicated by insufficient molecular stratification of tumors enrolled in the study groups.
- MeSH
- adenokarcinom klasifikace MeSH
- antigeny CD274 MeSH
- antigeny CD279 MeSH
- cílená molekulární terapie MeSH
- geny erbB-2 MeSH
- imunohistochemie MeSH
- lidé MeSH
- nádory žaludku * diagnóza farmakoterapie klasifikace MeSH
- prediktivní hodnota testů * MeSH
- protinádorové látky imunologicky aktivní MeSH
- receptor 2 pro vaskulární endoteliální růstový faktor antagonisté a inhibitory terapeutické užití MeSH
- trastuzumab terapeutické užití MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- Publikační typ
- práce podpořená grantem MeSH
- přehledy MeSH
VEGFR-2/Notch signalling regulates angiogenesis in part by driving the remodelling of endothelial cell junctions and by inducing cell migration. Here, we show that VEGF-induced polarized cell elongation increases cell perimeter and decreases the relative VE-cadherin concentration at junctions, triggering polarized formation of actin-driven junction-associated intermittent lamellipodia (JAIL) under control of the WASP/WAVE/ARP2/3 complex. JAIL allow formation of new VE-cadherin adhesion sites that are critical for cell migration and monolayer integrity. Whereas at the leading edge of the cell, large JAIL drive cell migration with supportive contraction, lateral junctions show small JAIL that allow relative cell movement. VEGFR-2 activation initiates cell elongation through dephosphorylation of junctional myosin light chain II, which leads to a local loss of tension to induce JAIL-mediated junctional remodelling. These events require both microtubules and polarized Rac activity. Together, we propose a model where polarized JAIL formation drives directed cell migration and junctional remodelling during sprouting angiogenesis.
- MeSH
- aktiny účinky léků metabolismus MeSH
- buněčná adheze MeSH
- CD antigeny účinky léků metabolismus MeSH
- cévní endotel MeSH
- endoteliální buňky pupečníkové žíly (lidské) MeSH
- endoteliální buňky účinky léků metabolismus fyziologie MeSH
- fyziologická neovaskularizace účinky léků fyziologie MeSH
- kadheriny účinky léků metabolismus MeSH
- komplex proteinů 2-3 souvisejících s aktinem metabolismus MeSH
- lehké řetězce myosinu metabolismus MeSH
- lidé MeSH
- mezibuněčné spoje účinky léků metabolismus MeSH
- mikrotubuly účinky léků metabolismus MeSH
- modely kardiovaskulární MeSH
- pohyb buněk účinky léků fyziologie MeSH
- polarita buněk účinky léků fyziologie MeSH
- protein 2 související s aktinem metabolismus MeSH
- protein 3 související s aktinem metabolismus MeSH
- protein Wiskottova-Aldrichova syndromu metabolismus MeSH
- pseudopodia účinky léků metabolismus fyziologie MeSH
- rac proteiny vázající GTP metabolismus MeSH
- receptor 2 pro vaskulární endoteliální růstový faktor metabolismus MeSH
- remodelace cév MeSH
- rodina proteinů Wiskottova-Aldrichova syndromu metabolismus MeSH
- signální transdukce MeSH
- srdeční myosiny metabolismus MeSH
- vaskulární endoteliální růstový faktor A metabolismus farmakologie MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- Publikační typ
- časopisecké články MeSH
- práce podpořená grantem MeSH
