Diamond-Blackfan anemia (DBA) is a rare inherited erythroid aplasia diagnosed in early infancy in 90% of cases and the first human disease caused by mutations in ribosomal proteins (RP). Despite intensive research, there are still many unresolved issues concerning the pathophysiology of ribosomal dysfunction. We plan to evaluate 1) molecular pathogenesis, gene expression profiling and nucleolar disruption in DBA patients 2) eryptosis, ferroptosis, anti-oxidative defense, metabolism of red blood cells (RBC) and the effect of antioxidants on the erythroid differentiation program and mature RBC of DBA patients. In connection to patients' we will analyze 3) eryptosis, oxidative defense and iron metabolism in RPS19-deficient mice as well as the effect of erythropoiesis stimulating agents. We aim to find new diagnostic markers for more precise diagnosis of DBA and new effective treatment modalities as the current standard treatment approaches are limited and include only steroids, transfusions and bone marrow transplantation, all of which have serious side-effects including iron overload.

Diamondova-Blackfanova anémie (DBA) je vzácná vrozená aplázie erytropoézy manifestující se v 90% případů v prvním roce života. DBA je prvním onemocněním u člověka způsobeným mutacemi ribozomálních proteinů (RP). Přes intenzivní výzkum zůstává stále mnoho nevyřešených otázek týkajících se patofyziologie ribozomální dysfunkce. V rámci projektu je plánována analýza 1) molekulární patogeneze, genové exprese a abnormalit jadérek u DBA pacientů; 2) eryptózy, feroptózy, oxidačního stresu, metabolizmu erytrocytů a účinku antioxidantů na erytroidní diferenciaci a zralé erytrocyty. V souvislostech s nálezy u pacientů bude analyzována 3) eryptóza, oxidační stres a metabolizmus železa u DBA myšího modelu a současně efekt látek stimulujících erytropoézu. Cílem projektu je nalezení nových diagnostických markerů ke zpřesnění diagnostiky DBA a nových léčebných přístupů, protože současná standardní léčba zahrnující pouze steroidy, podávání transfuzí a transplantaci kostní dřeně je spojena s výraznými nežádoucími účinky včetně přetížení železem.

• MeSH
• biologické markery MeSH
• Diamondova-Blackfanova anemie genetika   MeSH
• erytrocyty metabolismus   MeSH
• exprese genu MeSH
• lidé MeSH
• modely nemocí na zvířatech MeSH
• myši MeSH
• oxidační stres MeSH
• ribozomy patologie   MeSH
• stanovení celkové genové exprese MeSH
• železo MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• myši MeSH

• Konspekt
• Patologie. Klinická medicína
• NLK Obory
• hematologie a transfuzní lékařství
• genetika, lékařská genetika
• NLK Publikační typ
• závěrečné zprávy o řešení grantu AZV MZ ČR

One of the biggest goals of the gene therapy is to replace the defective gene or its part by the fully functional gene at the natural chromosomal localization. This would avoid the insertion of the whole therapeutic gene including foreign or regulation sequences. The project will establish and evaluate the new technology based on special therapeutical targeting of mutations causing monogenetic diseases. This technology relies on transcription activator-like effector nucleases (TALENs) that will help to insert corrected sequences to the site of damaged DNA. To confirm gene-therapeutical possibilities we selected: Diamond-Blackfan anemia (DBA) and hemophilia A. Particular goals are: the generation of new mouse models of the selected diseases using TALEN-technology to resemble better the human mutations; the correction of mutations using gene therapy; the establishment of the set of specific TALE-nucleases for the repair of human mutations; their validation using cells obtained from patients.

Jedním z největších cílů genové terapie je dosáhnout výměny defektního genu, nebo jeho části, za funkční gen ve své přirozené chromosomální lokalizaci a tím se vyvarovat začlenění celého terapeutického genu s případnými cizími či regulačními sekvencemi. Navržený projekt bude zavádět a ověřovat novou technologii, která spočívá ve speciální cílené terapii mutací způsobujících monogenetické choroby. Tato technologie je založena na využití transcription activator–like effector nukleáz (TALEN), které pomohou vkládat korigované (normálně funkční) sekvence na místo poškozené DNA. K ověření genově-terapeutických možností byly vybrány dvě onemocnění: Diamond–Blackfan anemie (DBA) a hemofilie A. Dílčími cíly projektu jsou: vytvoření nových myších modelů zmíněných chorob pomocí TALEN-technologie tak, aby lépe odpovídaly lidským mutacím, korekce mutací pomocí genové terapie, vytvoření sady specifických TALE-nukleáz ke korekci mutací u lidí a jejich validace v buňkách získaných od pacientů.

• MeSH
• Diamondova-Blackfanova anemie MeSH
• faktor VIII MeSH
• fenotyp MeSH
• genetická terapie MeSH
• hemofilie A MeSH
• modely nemocí na zvířatech MeSH
• myši MeSH
• ribozomální proteiny MeSH
• TALENs MeSH
• Check Tag
• myši MeSH

• Konspekt
• Biochemie. Molekulární biologie. Biofyzika
• NLK Obory
• molekulární biologie, molekulární medicína
• hematologie a transfuzní lékařství
• NLK Publikační typ
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR

The project deals with implementation of polychromatic flow cytometry and new molecular methods in diagnostic algorithm for most common hematological causes of bone marrow failure in childhood. By prospective follow-up and detailed analysis of patients with myelodysplastic syndrome and aplastic anemia we will define characteristic factors, which will contribute to classification of both diseases and distinguishing from reactive states in the future. The use of above listed techniques will lead to new information about immunopathology and pathogenesis of the diseases.

Projekt se zabývá začleněním polychromatické průtokové cytometrie a nových molekulárních metod do diagnostického algoritmu nejčastějších hematologických příčin selhání kostní dřeně v dětském věku. Prospektivním sledováním a detailní analýzou pacientů s myelodysplastickým syndromem a aplastickou anémií chceme nalézt charakteristické znaky, které do budoucna přispějí ke klasifikaci obou onemocnění a k rozlišení od reaktivních stavů. Využití výše uvedených technik povede k získání nových informací o imunopatologii a patogenezi nemoci.

• MeSH
• algoritmy MeSH
• aplastická anemie diagnóza   MeSH
• diagnostické techniky molekulární MeSH
• dítě MeSH
• imunofenotypizace MeSH
• myelodysplastické syndromy diagnóza   MeSH
• pancytopenie diagnóza   MeSH
• proteiny WT1 MeSH
• průtoková cytometrie MeSH
• vysoce účinné nukleotidové sekvenování MeSH
• vzácné nemoci diagnóza   MeSH
• Check Tag
• dítě MeSH

• Konspekt
• Biochemie. Molekulární biologie. Biofyzika
• NLK Obory
• molekulární biologie, molekulární medicína
• pediatrie
• hematologie a transfuzní lékařství
• onkologie
• vzácné nemoci
• NLK Publikační typ
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR

The aims of the proposed project is the study of the molecular pathophysiology of alpha-thalassemia and congenital hemolytic anemias resulting from enzymopathies of unknown etiology in patients from the Czech Republic. We propose: 1/ to focuse on thalassemia syndromes characterized by aplha- and non-alpha-globin chains ratio as alpha thalassemias to analyze these thalassemias on the molecular-genetic level; 2/ to perform biochemical and molecular-genetic analyses of cases with congenital nonspherocytichemolytic anemia.

Předmětem řešení projektu je studium molekulární patofyziologie alfa-talasemií a vrozených hemolytických anémií neznámé etiologie u nemocných z České republiky. V rámci projektu plánujeme: 1/ u rodin, které fenotypově odpovídají talasemii, ale u kterýchnebyla nalezena beta příp. delta-beta-talasemie, stanovovat poměr alfa- a beta-globinových řetězců a detekovat nejčastěji se vyskytující se delece u alfa-talasemií; 2/ u nemocných s korpuskulární hemolytickou anémií neznámé etiologie, které nejsou spojené s hemoglobinopatiemi, methemoglobinemiemi ani membránovými defekty, se zaměříme na stanovování aktivity vybraných enzymů metabolismu červených krvinek s následnou charakterizací zjištěné enzymopatie na molekulární úrovni.

• MeSH
• alfa-talasemie diagnóza   genetika   MeSH
• diagnostické techniky molekulární MeSH
• erytrocytární membrána fyziologie   MeSH
• erytrocyty fyziologie   MeSH
• hemoglobinopatie diagnóza   genetika   MeSH
• hypoplastická kongenitální anemie diagnóza   patofyziologie   MeSH
• molekulární biologie metody   MeSH

• Konspekt
• Biochemie. Molekulární biologie. Biofyzika
• NLK Obory
• hematologie a transfuzní lékařství
• biochemie
• biologie
• NLK Publikační typ
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR

Diamond-Blackfan anaemia (DBA) is a rare inherited erythroid aplasia. The etiology was only partly elucidated in 1999 with the discovery of mutated ribosomal protein (RP) S19. DBA is the first known hematological disease caused by ribosomal protein mutations. Recent studies have found a relation between mutations in ribosomal protein genes and the tumor suppressor p53 stability that may be important in DBA pathogenesis. In the cohort of 30 paediatric DBA patients haematological and biochemical indiciesof anaemia will be assessed. Mutations of RP genes and proteins involved in ribosomal biogenesis, single nucleotide polymorphisms of NQO1 and MDM2 protein by sequencing and PCR method and expression of p53, p51 and hTERT using the method of flow cytometry wiill be examined with the aim to determine their influence on the disease etiology and phenotype. The aim of the project is identification of pathogenetic mechanism and creation of new diagnostic and treatment algorithms for DBA.

Diamondova-Blackfanova anémie (DBA) je vzácná vrozená aplazie erytropoézy. Etiologie byla částečně objasněna teprve v posledních letech. U 40-50% pacientů byly nalezeny mutace genů pro ribosomální proteiny (RP). Etiologie nemoci u ostatních pacientů neníjasná. Nejnověji je intenzivně zkoumán možný vliv změn exprese proteinu p53. Prognóza pacientů s těžkou anémií je nejistá, léčebné možnosti omezené. Bude vytvořena databáze pacientů s DBA v České republice, vyšetřeny základní charakteristiky anémie. Budou zkoumány SNP genů pro NQO1 a MDM2 pomocí PCR technik a sekvenování, exprese genů pro proteiny p53, p21, hTERT pomocí mnohobarevné průtokové cytometrie. U pacientů bez dosud známé mutace bude analyzována přítomnost mutací genů pro RP a jiné proteiny proteosyntetického aparátu metodou vysokokapacitního sekvenování. Smyslem projektu je identifikace patogenetických mechanizmů nemoci, upřesnění diagnostiky, hledání nových léčebných možností s cílem zlepšení kvality života pacientů a prognózy onemocnění.

• MeSH
• časná diagnóza MeSH
• diagnostické techniky molekulární metody   využití   MeSH
• Diamondova-Blackfanova anemie diagnóza   terapie   MeSH
• exprese genu MeSH
• geny p53 MeSH
• iniciace translace peptidového řetězce MeSH
• jednonukleotidový polymorfismus MeSH
• kvalita života MeSH
• mutace MeSH
• polymerázová řetězová reakce metody   využití   MeSH
• prognóza MeSH
• průtoková cytometrie metody   využití   MeSH
• registrace MeSH
• ribozomální proteiny MeSH
• vrozené, dědičné a novorozenecké nemoci a abnormality prevence a kontrola   MeSH

• Konspekt
• Patologie. Klinická medicína
• NLK Obory
• hematologie a transfuzní lékařství
• genetika, lékařská genetika
• biologie
• NLK Publikační typ
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR

A reference guide for the participants of the symposium that focused on aplastic anemia and paroxysmal nocturnal hemoglobinuria.

• MeSH
• aplastická anemie MeSH
• molekulární biologie MeSH
• paroxysmální hemoglobinurie MeSH
• Publikační typ
• sborníky MeSH

• Konspekt
• Patologie. Klinická medicína
• NLK Obory
• hematologie a transfuzní lékařství
• biologie

Molecular genetic studies of the pathogenesis of Diamond-Blackfan anemia (DBA). Genetic analysis of candidate genes for DBA/ the role of haploinsuficiency of ribosomal protein S19 (RPS) in human hematopoiesis Murine model of the human hematopoiesis of DBA patients/ the role of modulatory cytokines on DBA hematopoiesis engrafted in NOD/SCID mice. Mechanismus of pathogenesis of primary familial and congenital polycythemia (PFCP)/ genetic analyses of candidate genes for PFCP, novel diagnostic approaches.

Studium mechanismů patogeneze Diamond-Blackfanovy anemie (DBA). Genetická analýza kandidátních genů proDBA/ studium vlivu haploinsuficience RPS19 na lidskou hematopoezu. Myší model na lidské hematopoezy pacientů s DBA/vliv růstových faktorů na hematopoetické buňky na modelu NOD/SCID in vivo. Studium mechanismů patogeneze primární familiální a kongenitální polycytemie (PFCP)/ genetická analýza a nové diagnostické metody.

• MeSH
• Diamondova-Blackfanova anemie MeSH
• erythropoetin MeSH
• hematopoetické kmenové buňky MeSH
• hematopoéza MeSH
• polycytemie MeSH
• ribozomální proteiny MeSH

• Konspekt
• Patologie. Klinická medicína
• NLK Obory
• hematologie a transfuzní lékařství
• pediatrie
• genetika, lékařská genetika
• biologie
• NLK Publikační typ
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR

The role of erythropoietin in normal and refractory anemia erythropoiesis.

Role erythropoietinu v normální erythropoiese a u refrakterní anemie

• MeSH
• Diamondova-Blackfanova anemie MeSH
• erythropoetin MeSH
• erytroidní prekurzorové buňky MeSH
• hematopoéza MeSH
• polycytemie MeSH

• Konspekt
• Patologie. Klinická medicína
• NLK Obory
• hematologie a transfuzní lékařství
• NLK Publikační typ
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR

The aim of the project is to provide a life-saving treatment,using transplantation of haemopoietic stem cells from unrelated donors,to children with high-risk forms of leukaemia or certain rare nonhaematological diseases from all over the Czech Republic.The project proposes to achieve a significant reduction of the risk of development of the most serious complication in unrelated transplantation,the graft-versus-host reaction,via ex vivo depletion of donor T cells from graft.

Cílem projektu je poskytnout život zachraňující léčbu, využívající transplantace kmenových buněk krvetvorby od nepříbuzných dárců, dětem s vysoce rizikovými formami leukémie a některými vzácnými nehematologickými onemocněními z celé České republiky. Projekt předkládá významné snížení rizika vzniku nejzávažnější komplikace nepříbuzenské transplantace, reakce štěpu proti hostiteli, pomocí ex vivo deplece dárcovských I lymfocytů ze štěpu.

• MeSH
• aplastická anemie terapie   MeSH
• dítě MeSH
• kojenec MeSH
• syndromy imunologické nedostatečnosti terapie   MeSH
• transplantace heterologní MeSH
• transplantace kostní dřeně MeSH
• Check Tag
• dítě MeSH
• kojenec MeSH

• Konspekt
• Patologie. Klinická medicína
• NLK Obory
• hematologie a transfuzní lékařství
• transplantologie
• NLK Publikační typ
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR

Cultivation of erythroid progentors and their response to growth factors,will be performed in all children with DBA,to establish the severity of erythropoiesis impairment,determine prognosis and predict response to CSF in vivo.

U všech dětí s Diamond-Blackfanovou anemií bude provedena kultivace erythroidních progenitorů a stanovena jejich odpověď na růstové faktory k upřesnění charakteru postižení erythropoezy, prognózy a predikce odpovědi na SCF in vivo.

• MeSH
• erytroidní prekurzorové buňky MeSH
• Fanconiho anemie MeSH
• lidský parvovirus B19 MeSH
• polymerázová řetězová reakce využití   metody   MeSH
• prognóza MeSH
• registrace MeSH
• Geografické názvy
• Česká republika MeSH

• Konspekt
• Patologie. Klinická medicína
• NLK Obory
• biologie
• hematologie a transfuzní lékařství
• NLK Publikační typ
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR