We want to contribute to further understanding of the 5q- syndrome pathogenesis mechanism by the study of the important transcription factors, EKLF (erythroid Krüppel like factor, also called KLF1), Fli1 (Friend leukemia virus integration 1) and GATA1, which take part together with other factors on the differentiation of common MEP progenitor cell into erythroid or megakaryocytic line. The expression of these and other important genes in this mechanism will be analysed in separated bone marrow and blood cells of patients MDS with 5q- syndrom in comparison with low-risk MDS with normal chromosome 5 and with healthy controls by TaqMan real-time PCR. Our second aim is to contribute to the understanding of the mechanism of the effective agent lenalidomide in patients with 5q- syndrome in comparison with low-risk MDS with normal chromosome 5. Mutations of EKLF, which can significantly affect lenalidomide treatment, will be also detected.

Chceme přispět k objasnění mechanismu patogeneze 5q – syndromu studiem důležitých transkripčních faktorů, EKLF (“erythroid Krüppel-like factor“, označovaný také KLF1), Fli1 (“Friend leukemia integration 1“) a GATA1, které se kromě řady dalších faktorů podílejí na diferenciaci společné progenitorové buňky MEP (“megakaryocyte-erythroid progenitor“) do erytroidní nebo megakaryocytární řady. Expresi uvedených a dalších genů, potenciálně důležitých v tomto mechanismu, chceme zkoumat metodou kvantitativní TaqMan RT-PCR v reálném čase na pacientech MDS s 5q- syndromem ve srovnání s MDS o nízkém riziku a s normálním chromozomem 5 a se zdravými kontrolami na separovaných buňkách kostní dřeně a periferní krve. Naším druhým záměrem je přispět k objasnění mechanismu účinku účinné imunomodulační látky lenalidomidu u pacientů s 5q- syndromem ve srovnání s MDS o nízkém riziku a s normálním chromozomem 5. Budou analyzovány mutace EKLF, které mohou významně ovlivnit odpověď na lenalidomid.

• MeSH
• erytroidní buňky MeSH
• exprese genu MeSH
• lidské chromozomy, pár 5 MeSH
• messenger RNA MeSH
• mikro RNA MeSH
• myelodysplastické syndromy MeSH
• prekancerózy MeSH
• progenitorové buňky megakaryocytů MeSH
• thalidomid analogy a deriváty   MeSH

• Konspekt
• Biochemie. Molekulární biologie. Biofyzika
• NLK Obory
• molekulární biologie, molekulární medicína
• hematologie a transfuzní lékařství
• onkologie
• NLK Publikační typ
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR

The goal of the project is to find new prognostic markers characterizing the disease progression and response to therapy of myelodysplastic syndrome (MDS) using 5-azacytidine (Vidaza) that is currently used as the first choice remedy. We assume that MDS as preneoplastic stadium is caused by genome instability of stem and stromal bone marrow cells, which leads to DNA damage response, resulting in cellular senescence or apoptosis. From immunologic point of view, this state is associated with functional and phenotypic changes of effector and regulatory cells. The treatment with Vidaza results in the phenotypic changes of the bone marrow cells also in respect to senescence, as well as in the cytokine milieu that influence the disease progression. Analysis of changes in the cytokine production, expression of senescence markers and the phenotype of bone marrow cells before and during the treatment will enable us to find prognostic markers for the disease development and Vidaza treatment efficacy monitoring.

Cílem projektu je nalézt nové prognostické markery charakterizující rozvoj onemocnění a účinnost terapie myelodysplastického syndromu (MDS) pomocí 5-azacytidinu (Vidázy). Vycházíme z předpokladu, že MDS jako preneoplastické stadium je způsoben nestabilitou genomu kmenových či stromálních buněk kostní dřeně, která vede k aktivaci odpovědi na poškození DNA doprovázené aktivací cytokinové signalizace a buněčné senescence či apoptózy. Z imunologického hlediska je tento stav spojen se změnami funkce efektorových a regulačních buněk. Terapeutickým působením 5-azacytidinu dochází k ovlivnění fenotypu (i z hlediska senescence) buněk kostní dřeně a změnám v cytokinovém milieu, které ovlivní další progresi onemocnění. Z porovnání produkce cytokinů, senescentních markerů a fenotypu buněk kostní dřeně před léčbou a v jejím průběhu lze najít prognostické markery pro sledování průběhu onemocnění a účinnost terapie 5-azacytidinem.

• MeSH
• azacytidin MeSH
• epigenetická represe MeSH
• genom MeSH
• hematopoetické kmenové buňky MeSH
• myelodysplastické syndromy terapie   MeSH
• nádorové biomarkery MeSH
• poškození DNA MeSH
• prognóza MeSH
• techniky in vitro MeSH

• Konspekt
• Biochemie. Molekulární biologie. Biofyzika
• NLK Obory
• molekulární biologie, molekulární medicína
• hematologie a transfuzní lékařství
• onkologie
• NLK Publikační typ
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR

Calcium ions belong to the complex szstem of second messengers. Many important intracellular functions are controlled or influenced by changes of intracellular Ca2+ concentration in all cellular systems. In lymphocytes, Ca2+ rises after their activation.It is not clear what role calcium ions play in proliferation of hematopoietic stem cells after transplantation, pathology of tumor growth of hematologic malignancies, and response to the therapy with monoclonal antibodies. Ca2+ regulated prohoproteins and fluorescent indicators will be used as the tools. Signals will be detected with specially constructed luminometer will and multiparametric flow cytometry with UV and blue excitation. The authors will measure the intracellular Ca2+ concentrations in cultures of tumor cells (leukemias and lymphomas), response to the treatment with monoclonal antibodies, and proliferation of CD34+ cells in cultures.

Vápníkové ionty patří ke složitému systému second messengers. Specifickou změnou jejich koncentrace je ovlivňován chod řady závažných celulárních dějů prakticky ve všech buněčných systémech. V lymfocytech periferní krve jsou prvním signálem při aktivaci.Dosud není známo, jakou roli hrají v proliferaci hematopoetických kmenových buněk, regeneraci krvetvorby po transplantaci a patologii nádorového růstu hematologických malignit a odpovědi na protinádorovou terapii. Metodicky bude k měření použito luminescentního fotoproteinu se snímáním luminiscentního signálu luminometrem a fluorescenčních indikátorů analyzovaných multiprarametrikou flow cytometrií. Autoři budou sledovat hladiny intracelulátního Ca2+ v kulturách nádorových buněk lymfomů a leukemií, odpověď na podání monoklonálních protilátek v kulturách in vitro i v podmínkách in vivo.

• MeSH
• hematopoetické kmenové buňky MeSH
• intracelulární membrány MeSH
• leukemie farmakoterapie   patologie   MeSH
• lymfom farmakoterapie   patologie   MeSH
• monoklonální protilátky MeSH
• proliferace buněk MeSH
• proteiny vázající vápník MeSH
• transplantace kostní dřeně MeSH
• vápníkové kanály MeSH

• Konspekt
• Patologie. Klinická medicína
• NLK Obory
• onkologie
• hematologie a transfuzní lékařství
• biochemie
• NLK Publikační typ
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR

The hypothesis will be tested that the critical period for the origin of atherosclerotic changes in women is menopausal transition depending of genetic, metabolic and environmental insults. Longitudinal study will be performed focused on the damage of vascular wall by measurement of circulating endothelial progenitor cells in different reproductive stages and their association will be determined with external (mainly smoking), metabolic (mainly indicators of decreased insulin resistance and reverse cholesterol transport) and new genetic (length of telomeres) risk factors. Population sample of 909 women of the age 45-54 will be re-examined after 6 years. In addition, sixty women will be selected on the basis of reproduction stage and smoker's habits anddetailed evaluation will be performed of the relation of vascular wall rigidity to sexual hormones and reverse cholesterol transport in this group to determine the effect of the fluctuation of sex hormones on the vessel wall and metabolic parameters.

Předmětem řešení je testování hypotézy, že kritickým obdobím pro vznik aterosklerotických změn a jejich následků u žen je přechod do menopauzy. Bude provedena longitudinální studie zaměřená na poškození cévní stěny stanovením počtu cirkulujících endoteliálních progenitorových buněk v různých reprodukčních obdobích a bude určena jejich asociace se zevními (především kouření), metabolickými (především ukazateli snížené inzulínové senzitivity a reverzního transportu cholesterolu) a novými genetickými (délka telomér) rizikovými faktory. Bude vyšetřen populační vzorek 909 žen ve věku 45-54 let vyšetřených v letech 2003-2005. U 60 žen vybraných na základě reprodukčního stavu a kuřáckých návyků bude provedeno podrobnější vyšetření vztahu tuhosti cévní stěny kpohlavním hormonům a reverznímu transportu cholesterolu. Tím bude otestována hypotéza, že v období přechodu do menopauzy za zvýšenou citlivostí cévní stěny k zevním a metabolickým inzultům stojí výrazné kolísání hladin pohlavních hormonů.

• MeSH
• ateroskleróza MeSH
• cholesterol MeSH
• inzulinová rezistence MeSH
• kardiovaskulární nemoci etiologie   MeSH
• kouření MeSH
• longitudinální studie MeSH
• membránové transportní proteiny MeSH
• perimenopauza genetika   metabolismus   MeSH
• progenitory granulocytů a makrofágů MeSH
• telomery MeSH
• věkové faktory MeSH
• ženy MeSH

• Konspekt
• Patologie. Klinická medicína
• NLK Obory
• gynekologie a porodnictví
• angiologie
• NLK Publikační typ
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR

The project outlines the role of CD14+CD16+ monocyte subpopulation in transplant reactions against the kidney allograft and in antibody mediated rejection. Monitoring of peripheral monocyte subpopulations will be performed with respect to clinical parameters, occurence of allospecific antibodies, and immunosupressive schedule. The determination of T regulatory cells (CD4+CD25+Foxp3+) and gene polymorphisms of CD16 molecule will be assessed. In a model of human monocyte/macrophage cell line THP-1, the expression of CD14+CD16+ phenotype will be induced by cytokines and the genotype will be assessed with respect to chemokine and cytokine production. Cytokines from IL-1 family (IL-1beta, IL-18, IL-33) and TNF alfa and furthermore, cytokines associated withTh1/Th2/Th17 polarization (IFN gama, IL-4, IL-13, IL-23, IL-17) will be used as stimuli. The project may contribute to better monitoring of kidney transplant patients and new information on cytokine interactions in mononuclear phagocyte differentiation.

Projekt vymezuje úlohu monocytární subpopulace CD14+CD16+ v transplantačních reakcích proti ledvinnému alotransplantátu a u protilátkové rejekce. Monitorováno bude zastoupení subpopulací monocytů v periferní krvi osob po transplantaci ledviny s ohledem na klinický stav, výskyt alospecifických protilátek a imunosupresivní režim. Stanoveno bude také zastoupení T regulačních buněk (CD3+CD25+Foxp3+) a vyšetřeny genové polymorfismy CD16 molekuly. Na modelu lidské monocyto-makrofágové line THP-1 bude pomocí cytokinů indukována a dále modulována exprese CD14+CD16+ fenotypu s ohledem na současné změny v cytokinovém a chemokinovém genotypu. Ke stimulaci budou využity prozánětlivé cytokiny z rodiny IL-1 (IL-1beta, IL-18, IL-33) a TNF alfa a dále i cytokiny související s koncepcí Th1/Th2/Th17 polarizace (IFN gama, IL-4, IL-13, IL-23, IL-17). Projekt může přispět ke kvalitnějšímu monitorování pacientů po transplantaci ledviny a novým poznatkům o cytokinových interakcích při diferenciaci mononukleárních fagocytů.

• MeSH
• buněčná diferenciace MeSH
• CD antigeny analýza   krev   MeSH
• cytokiny analýza   MeSH
• interleukin-12 sekrece   MeSH
• monitorování imunologické MeSH
• NF-kappa B fyziologie   MeSH
• podskupiny lymfocytů MeSH
• prekurzorové buňky monocytů-makrofágů MeSH
• rejekce štěpu MeSH
• TNF-alfa sekrece   MeSH
• transplantace ledvin imunologie   MeSH
• výběr pacientů MeSH
• zkracování telomer MeSH

• Konspekt
• Patologie. Klinická medicína
• NLK Obory
• alergologie a imunologie
• nefrologie
• transplantologie
• NLK Publikační typ
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR

Prospective randomized study evaluating the effect of PVE on the side of LMCRC and intraportal application of HPC (CD 33+ and CD 133+) in opposite lobe of liver for stimulation of liver tissue regeneration - group A. Group B will be created from patientswith PVE without application of HPC and group C from patients with stimulation of production of HPC (intravenous administration of Neupogen) without PVE and intraportal application of HPC. In the study there will be included the patients with primarilyinoperable LMCRC from the reasons of small FLRV (smaller than 25%). The results will be statistically evaluated. By the significant shortening of the period (a presumption is by a half of original time after PVE) the chance of further progression of a tumour in liver will be reduced and in the same time resecability of originally an inoperable liver tumour will increase.

Prospektivní randomizovaná studie s hodnocením efektu PVE na straně nádoru a aplikace HPB (CD 34+,CD 133+) do druhostranné větve portální žíly pro podporu regenerace jaterního parenchymu ? skupina A. Kontrolní skupinou (skupina B) nemocných budou nemocníjen s PVE bez aplikace HPB a dále nemocní (skupina C) po stimulaci vyplavení HPB Neupogenem bez PVE a aplikace HPB do portálního oběhu. Do studie budou zařazeni nemocní s primárně inoperabilní JMKRK z důvodů malého (< 25%) FLRV. Výsledky budou statisticky zpracovány a klinickým výstupem bude stanovení efektu použití HPB a PVE pro podporu regenerace jaterního parenchymu u primárně inoperabilních JMKRK. Předpokládáme, že navrhovaným postupem dosáhneme dalšího posunu v resekabilitě a tedy radikalitě léčbyJMKRK.

• MeSH
• antigeny CD34 MeSH
• hematopoetické kmenové buňky MeSH
• hepatocyty MeSH
• kolorektální nádory MeSH
• metastázy nádorů MeSH
• míra přežití MeSH
• mobilizace hematopoetických kmenových buněk MeSH
• nádory jater chirurgie   sekundární   terapie   MeSH
• regenerace jater MeSH
• terapeutická embolizace MeSH
• vena portae MeSH

• Konspekt
• Patologie. Klinická medicína
• NLK Obory
• onkologie
• chirurgie
• hepatologie
• NLK Publikační typ
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR

Study of activation of Chk1 and Chk2 kinases in G1 checkpoint in mouse embryonic stem cells. Characterization of kinases involved in regulation of G1 checkpoint in mouse embryonic stem cells. Study of influence of an active oncoprotein on the cell cycleprogression in mouse embryonic stem cells.

Studium aktivace Chk1 a Chk2 kinázy v G1-fázi buněčného cyklu u myších embryonálních kmenových buněk. Charakterizace kináz zapojených do regulace kontrolního bodu v G1 fázi u myších embryonálních kmenových buněk. Studium vlivu aktivního onkoproteinu na průchod buněk buněčným cyklem u myších embryonálních kmenových buněk.

• MeSH
• body zlomu chromozomu MeSH
• buněčný cyklus MeSH
• embryonální kmenové buňky MeSH
• faktor 2 asociovaný s receptory TNF MeSH
• fosfatasy cdc25 MeSH
• G1 fáze MeSH
• hematopoetické kmenové buňky fyziologie   MeSH
• methyltransferasy MeSH
• myši MeSH
• nádorové supresorové proteiny analýza   MeSH
• nádorový supresorový protein p53 analýza   MeSH
• protoonkogenní protein MLL MeSH
• teleangiektatická ataxie MeSH
• Check Tag
• myši MeSH

• Konspekt
• Biochemie. Molekulární biologie. Biofyzika
• NLK Obory
• biologie
• cytologie, klinická cytologie
• NLK Publikační typ
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR

1. Analysis of differences in secretion of chemokines playing role in CD34+ mobilization mechanism before and during granulocyte- colony stimulating factor administration using ELISA methods and multiplex analysis. Flow cytometric analysis of adhesive molecules expression on CD34+ cells. 2. Comparison of differencies in chemokine levels and adhesive molecules expression between good and poor mobilizers. 3. Assessment of analytes, which can serve as predictive factors of stimulation efficay and allogeneic graft quality. 4. Optimization of management of peripheral blood stem cells mobilization and collection in healthy donors.

1. Analýza změny sekrece chemokinů zůčastněných v procesu mobilizace CD34+ buněk před a při podávání růstového faktoru granulopoezy pomocí ELISA metod a multiplexové analýzy. Stanovení exprese adhezivních molekul na CD34+ buňkách průtokovou cytometrií. 2. Porovnání rozdílů hladiny chemokinů a exprese adhezivních molekul mezi dobře a špatně mobilizovatelnými zdravými dárci. 3. Stanovení analytů využitelných jako prediktivní faktory efektivity stimulace a kvality odebraného alogenního štěpu. 4. Optimalizace managementu mobilizace a odběrů periferních kmenových buněk u zdravých dárců.

• MeSH
• adhezivita MeSH
• antigeny CD34 MeSH
• autologní transplantace MeSH
• cytokiny MeSH
• hematopoéza MeSH
• mobilizace hematopoetických kmenových buněk MeSH
• myeloidní progenitorové buňky MeSH
• průtoková cytometrie MeSH
• transplantace hematopoetických kmenových buněk MeSH

• Konspekt
• Biochemie. Molekulární biologie. Biofyzika
• NLK Obory
• biologie
• hematologie a transfuzní lékařství
• NLK Publikační typ
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR

Evaluation of the role of autologoust haematopoetic stem cells in regulation of neurodegeneration and support of regeneration in the central nervous system in malignant multiple sclerosis. Evaluation of the rate of degenerative processes using not only clinical scales but in the first place imaging and electrophysiological methods (MRI volumetric methods, optic coherence tomography, videonystagmography), and detailed neuropsychological testing. Evaluation of stem cells influence on immunological procceses as assessed in peripheral blood and cerebrospinal fluid using flow cytometry to detect T lymphocyte subpopulations and intracellular cytokines, osteopontin, and antibodies against neurofilaments. This multidisciplinary approach should help to clarifyand improve treatment strategies in malignant MS with early development of disability of young patients, resulting in worsening of quality of life and high socio-economic costs.

Studium úlohy autologních hematopoetických kmenových buněk v omezení neurodegenerace a podpoře regenerace centrálního nervového systému u maligní roztroušené sklerózy. Hodnocení míry degenerativních pochodů nejen klinickými škálami, ale především zobrazovacími a elektrofyziologickými metodami (moderní MRI techniky včetně volumometrie šedé a bílé hmoty, OCT, videonystagmografie) a podrobným neuropsychologickým testováním. Hodnocení míry ovlivnění imunitních procesů kmenovými buňkami v periferní krvi i likvoru pomocí metod průtokové cytometrie se stanovením subpopulací lymfocytů a stanovením intracelulárních cytokinů, osteopontinu a protilátek proti neurofilamentům. Tento multidisciplinární přístup umožní ověřit a zlepšit terapeutický přístup včetně zhodnocení přínosu obou léčebných režimů u maligní RS, která ohrožuje pacienta rychlým vznikem těžké invalidity, ztrátou kvality života a soběstačnosti.

• MeSH
• hematopoetické kmenové buňky MeSH
• magnetická rezonanční tomografie metody   MeSH
• mozek patofyziologie   MeSH
• neuroprotektivní látky MeSH
• optická koherentní tomografie MeSH
• osteopontin MeSH
• roztroušená skleróza terapie   MeSH
• transportní proteiny MeSH

• Konspekt
• Patologie. Klinická medicína
• NLK Obory
• neurologie
• NLK Publikační typ
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR

1. Monitoring of anti-CMV specific cellular immunity in patients after hemopoietic stem cell transplantation and after kidney transplantation using tetramer technology and flow cytometry. 2. Survey of correlation between the frequency of anti-CMV specific T- lymphocytes and the occurrence of CMV reactivation. Determination of predictive level associated with increased risk of CMV reactivation. 3. Evaluation of the influence of CMV profylaxis and CMV viremia on kinetics of immune reconstitution and on late CMV infection occurrence. Association of hemopoietic stem cells donor/recipient CMV serological status with kinetics of anti- CMV specific immune response. 4. Modification of antiviral treatment guidelines: firstly treat the high risk patients group and postpone the treatment in patients with satisfactory immunity to avoid the antiviral medications adverse effect.

1. Monitorování anti- CMV specifické buněčné imunity u pacientů po transplantaci hemopoetických progenitorových buněk a transplantaci ledviny pomocí tetramer technologie a průtokové cytometrie. 2. Zjištění korelace mezi frekvencí anti- CMV specifických T- lymfocytů a výskytem CMV reaktivace. Stanovení prediktivní hladiny, která je spojena s vysokým rizikem CMV reaktivace. 3. Posouzení vlivu CMV profylaxe a virémie na dynamiku rekonstituce a výskyt pozdní CMV infekce. Porovnání kinetiky anti-CMV specifické imunitní odpovědi s ohledem na CMV sérologický status dárce u transplantací hemopoet. kmenových buněk. 4. Úprava postupů při rozhodování o zahájení protivirové léčby s cílem léčit pouze vysoce rizikové nemocné a nezatěžovat virostatiky pacienty s dostatečnou anti- CMV imunitou.

• MeSH
• CD8-pozitivní T-lymfocyty cytologie   MeSH
• cytomegalovirové infekce imunologie   MeSH
• hematopoetické kmenové buňky imunologie   MeSH
• molekulární sekvence - údaje MeSH
• průtoková cytometrie MeSH
• transplantace ledvin MeSH

• Konspekt
• Patologie. Klinická medicína
• NLK Obory
• hematologie a transfuzní lékařství
• onkologie
• NLK Publikační typ
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR