Průtoková cytometrie je moderní analytická metoda používaná v klinických i výzkumných laboratořích k imunofenotypizaci vybraných buněčných subpopulací v suspenzi (periferní krve, aspirátu kostní dřeně, mozkomíšního moku atd., ale i buněčné suspenzi získané z nefixovaného solidního tumoru). Poskytuje současně informace o četných povrchových nebo intracelulárních znacích analyzovaných elementů. V klinické praxi k tomu využívá fluorescenčních monoklonálních protilátek proti povrchovým nebo intracelulárním antigenům, které jsou asociovány s určitým typem buněk (T-lymfocyty, B-lymfocyty, apod.), jejím vývojovým stádiem nebo monoklonalitou (např. lehké řetězce povrchových imunoglobulinů). Pravděpodobně nejširšího využití dosáhla metoda v diagnostice hematologických malignit, kde právě rychlá a přesná diagnostika dává lékaři stěžejní informace ke správnému stanovení diagnózy a k výběru optimální léčby, následně lze takřka v reálném čase sledovat efekt léčby. Klíčová slova: průtoková cytometrie – imunofenotypizace – non-Hodgkinské lymfomy
Flow cytometry represents a modern analytical method useful for an assessment of selected cellular subpopulations in suspension (peripheral blood, aspirate of bone marrow, liquid fluid etc. and also in suspensions prepared from non-fixed solid tumors) in clinical and research laboratories. The method provides information on numerous surface or intracellular markers of the analyzed elements at the same time. The usage of fluorescent monoclonal antibodies against surface or intracellular antigens associated with specific type of cells (T-lymphocytes, B-lymphocytes etc.), with their developmental stage, or with monoclonality (for example antibodies against light chains of immunoglobulins), are the most valuable for the clinical practice. The most important application of flow cytometry in pathology has remained in hematologic malignancies, where this fast and exact method provides, practically in a real time, crucial information for correct diagnosis as well as for the choice of optimal therapy, and subsequently for assessing the effect of the therapy. Keywords: flow cytometry – immunophenotypization – non-Hodgkin lymphomas
- MeSH
- antigeny nádorové analýza MeSH
- antigeny povrchové analýza MeSH
- DNA analýza MeSH
- imunofenotypizace * metody MeSH
- lidé MeSH
- nehodgkinský lymfom diagnóza genetika imunologie MeSH
- průtoková cytometrie * metody využití MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- Publikační typ
- práce podpořená grantem MeSH
- přehledy MeSH
Východisko. Kromě běžně užívaného histologického a imunohistochemického vyšetření lze diagnostiku maligních lymfomů (ML) doplnit o imunofenotypizaci pomocí průtokové cytometrie. Je třeba nejprve získat buněčnou suspenzi, což je u kožních T-ML zvláště problematické. Metody a výsledky. K izolaci lymfoidních elementů z kůže používáme enzymovou digesci. Přesto při malé infiltraci tkáně selhává metoda průtokové cytometrie na nedostatečném množství lymfocytů v buněčné suspenzi. V rámci diagnostiky, stagingu a restagingu jsme dosud vyšetřili 66 vzorků od 17 pacientů s podezřením či diagnózou kožního T-lymfomu (20krát kůže, 20krát kostní dřeň a 26krát periferní krev). Devětkrát se úspěšně zdařilo izolovat lymfocyty z kůže a diagnostikovat infiltraci T-ML, 1krát byl nález suspektní pro infiltraci tkáně, 4krát byla izolace úspěšná, ale metoda nepřispěla k diagnóze a 6krát byla tkáň infiltrována tak malým množstvím lymfoidních elementů, že se nepodařilo získat optimálně buněčnou suspenzi. Při stagingu a restagingu jsme metodou průtokové cytometrie v korelaci s histologickým a imunohistochemickým vyšetřením 14krát prokázali negativní nález v kostní dřeni (KD), 3krát při negativním histologickém nálezu jsme metodou průtokové cytometrie potvrdili nádorovou infiltraci a 2krát suspekci z infiltrace KD. Nález průtokové cytometrie byl 1krát suspektní z infiltrace KD, zatímco histologický nález byl jednoznačně pozitivní. Při vyšetření vzorků periferní krve (PK) jsme 21krát nezjistili přítomnost nádorových buněk, 3krát byly nádorové buňky v PK detekovány a 2krát byl nález suspektní. Závěry. Průtoková cytometrie má nezastupitelný význam v okamžiku rozsáhlé infiltrace kůže, lymfoidní tkáně se však jeví jako vhodnější diagnostický materiál. Při zjištění aberantního imunofenotypu nádorových buněk je metoda navíc vhodná pro sledování minimální reziduální nemoci.
Background: Apart from routine histological and immunohistochemical examination the immunophenotypization by flow cytometry is a very helpful and potent auxiliary method in diagnosis of malignant lymphomas (ML). The first necessary and unevitable step for flow cytometric examination is to obtain a representative cell suspension that can prove to be rather problematic in case of cutaneous T-cell lymphomas. Methods and results: In order to isolate lymphoid cells from a skin excision the enzymatic digestion is used. Yet, in case of poor tissue infiltration the flow cytometry fails because of the small amount of lymphocytes in the cell suspension. We have analyzed 66 samples from 17 patients (20 from skin, 20 from bone marrow and 26 from peripheral blood) during primary diagnosis, staging and restaging of cutaneous T-cell lymphoma. The flow cytometry from skin was diagnostic for T-cell lymphoma in 9 cases, in 1 case the finding was suspicious for lymphoma, in 4 cases the examination did not contribute to the diagnosis. In 6 cases the tissue was only sparsely infiltrated by lymphocytes and optimal cell suspension was not obtained. During staging and restaging the examination of the bone marrow samples in 14 cases did not reveal any lymphoma either morphologically or by flow cytometry, in 3 cases the infiltration was proved by both methods. In 3 cases the flow cytometry proved the bone marrow infiltration in spite of a negative histology and in 3 cases the flow cytometric results were suspicious for infiltration while histological finding was negative in 2 cases and unequivocally positive in 1 case. In the peripheral blood samples the tumor cells were detected in 3 cases, the finding was suspicious in 2 cases and negative in 21 cases. Conclusion: The flow cytometry is of vital diagnostic importance especially in cases of massive cutaneous infiltration, but lymphoid tissue seems to be a better diagnostic material. If the infiltration of the tissue is not massive, the number of lymphocytes in suspension is insufficient, and the examination is not conclusive. In addition, if the aberrant immunophenotype of tumor cells is observed, the method is ideal for monitoring a minimal residual disease.
- MeSH
- finanční podpora výzkumu jako téma MeSH
- imunofenotypizace MeSH
- kožní T-buněčný lymfom diagnóza MeSH
- krevní buňky cytologie MeSH
- kůže cytologie MeSH
- lidé MeSH
- mycosis fungoides MeSH
- průtoková cytometrie využití MeSH
- reziduální nádor diagnóza MeSH
- Sézaryho syndrom MeSH
- vyšetřování kostní dřeně metody využití MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- Publikační typ
- hodnotící studie MeSH
- MeSH
- aglutinační testy MeSH
- finanční podpora výzkumu jako téma MeSH
- lymfatické uzliny imunologie MeSH
- myši - mutanty neurologické imunologie MeSH
- myši inbrední C3H imunologie MeSH
- průtoková cytometrie MeSH
- receptory antigenů T-buněk MeSH
- slezina MeSH
- T-lymfocyty MeSH
- thymus MeSH
- zvířata MeSH
- Check Tag
- zvířata MeSH
Východisko. Imunofenotypizace maligních lymfomů je dnes již nezbytnou podmínkou pro jejich správnou klasifikaci a následně pro stanovení terapie a prognózy pacienta (SZO). Přestože možnosti klasické imunohistologie v řezech (parafinových i zmražených) se v posledních letech významně rozšířily, je výhodné kombinovat je s vyšetřením průtokovou cytometrií. Hlavní předností průtokové cytometrie je možnost současné aplikace dvou a více protilátek značených různými fluorochromy v jednom vzorku. Limitací je nutnost vyšetřovat pouze nativní materiál. Metody a výsledky. Metodu průtokové cytometrie jsme spolu s histologickým a imunohistochemickým vyšetřením použili pro diagnostiku primárních non-Hodgkinských lymfomů z B buněk (B-NHL) a ke stagingu respektive k restagingu v kostní dřeni. Na sestavě 90 pacientů s prokázaným nebo suspektním B-NHL jsme zjistili shodu výsledků v 89 % hodnocených primárních nádorů a v 85 % hodnocených kostních dření. Celková úspěšnost průtokové cytometrie pro určení infiltrace vzorku B lymfomem byla 89 %. Závěry. Imunofenotypizace pomocí průtokové cytometrie významně přispívá ke zpřesnění klasifikace maligních lymfomů z B buněk. V některých případech není dokonce nutné doplnit imunohistochemické vyšetření. Obzvláště výhodné je využití metody při stanovení klonality pomocí povrchových markerů, kdy je průtoková cytometrie významně specifičtější i senzitivnější než imunohistochemické vyšetření v histologickém řezu. Využití imunofenotypizace pomocí průtokové cytometrie jako pomocné metody v korelaci s morfologickými nálezy zrychluje a zpřesňuje diagnostiku maligních lymfomů z B buněk.
Background. Immunophenotyping of malignant lymphomas becomes necessary for the correct classification, for the design of therapy and for prognosis projection (WHO). Although the spectrum of classic immunohistochemical (IHC) examinations in paraffin embedded or frozen sections has recently considerably extended, IHC should preferably be combined with flow cytometry. The main advantage of flow cytometry is a synchronous application of two or more antibodies marked with various fluorochromes in one sample. The method is limited by utilizing native material only. Methods and Results. The flow cytometry combinedwith histological and IHC investigations were used in diagnosis of primary non-Hodgkin’s lymphomas of B-cell origin (B-NHL) and for bone marrow staging or restaging. We studied 90 patients with confirmed or suspected B-NHL and we found a good correlation in 89 % of samples of primary lymphomas and in 85 % of bone marrow samples when IHC and flow cytometry results were compared. The overall efficacy of the flow cytometry determination in lymphoma infiltration of the samples was 89 %. Conclusions. Immunophenotyping utilizing flow cytometry contributes to diagnosis and classification of B-cell lymphomas in the significant proportion of investigated patients. In some cases it is even unnecessary to employ IHC examination of tissue sections. The method is especially suitable for determination of monoclonal populations of B-cells by detection of cell surface markers because it is more specific and sensitive than IHC. The immunophenotyping by flow cytometry as an auxiliary method and in correlation with morphological findings it can make the diagnosis of B-cell lymphomas faster and more specific.
- MeSH
- B-buněčný lymfom diagnóza patologie MeSH
- dospělí MeSH
- finanční podpora výzkumu jako téma MeSH
- imunofenotypizace metody MeSH
- kostní dřeň MeSH
- lidé středního věku MeSH
- lidé MeSH
- lymfatické uzliny MeSH
- protilátky diagnostické užití MeSH
- průtoková cytometrie metody MeSH
- senioři MeSH
- staging nádorů MeSH
- Check Tag
- dospělí MeSH
- lidé středního věku MeSH
- lidé MeSH
- mužské pohlaví MeSH
- senioři MeSH
- ženské pohlaví MeSH
- Publikační typ
- přehledy MeSH
- srovnávací studie MeSH
