Mutant Estrogen Receptor (ERT2) ligand-binding domain fusions with Cre recombinase are a key tool for spatio-temporally controlled genetic recombination with the Cre/lox system. CreERT2 is efficiently activated in a concentration-dependent manner by the Tamoxifen metabolite trans-4-OH-Tamoxifen (trans-4-OHT). Reproducible and efficient Cre/lox experimentation is hindered by the gradual loss of CreERT2 induction potency upon prolonged storage of dissolved trans-4-OHT, which potentially results from gradual trans-to-cis isomerization or degradation. Here, we combined zebrafish CreERT2 recombination experiments and cell culture assays to document the gradual activity loss of trans-4-OHT and describe the alternative Tamoxifen metabolite Endoxifen as more stable alternative compound. Endoxifen retains potent activation upon prolonged storage (3 months), yet consistently induces half the ERT2 domain fusion activity compared to fresh trans-4-OHT. Using 1H-NMR analysis, we reveal that trans-4-OHT isomerization is undetectable upon prolonged storage in either DMSO or Ethanol, ruling out isomer transformation as cause for the gradual loss of trans-4-OHT activity. We further establish that both trans-4-OHT and Endoxifen are insensitive to light exposure under regular laboratory handling conditions. We attribute the gradual loss of trans-4-OHT potency to precipitation over time, and show that heating of aged trans-4-OHT aliquots reinstates their CreERT2 induction potential. Our data establish Endoxifen as potent and reproducible complementary compound to 4-OHT to control ERT2 domain fusion proteins in vivo, and provide a framework for efficient chemically controlled recombination experiments.
- MeSH
- buněčné linie MeSH
- časové faktory MeSH
- dánio pruhované MeSH
- integrasy genetika MeSH
- lidé MeSH
- receptory pro estrogeny chemie genetika MeSH
- rekombinace genetická účinky léků MeSH
- rekombinantní fúzní proteiny chemie genetika MeSH
- stabilita léku MeSH
- stereoizomerie MeSH
- tamoxifen analogy a deriváty chemie metabolismus farmakologie MeSH
- terciární struktura proteinů MeSH
- vysoká teplota MeSH
- zvířata MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- zvířata MeSH
- Publikační typ
- časopisecké články MeSH
- práce podpořená grantem MeSH
Počáteční stadia karcinomu prsu jsou při dobře vedené terapii v dnešní době již chronicky léčitelným onemocněním. Hormonální terapie je jednou ze základních léčebných modalit hormonálně dependentního karcinomu prsu. Donedávna byl zlatým standardem hormonální terapie hormonálně dependentních postmenopauzálních žen antiestrogen tamoxifen. Dnešní konsenzus upřednostňuje v adjuvantní hormonální terapii postmenopauzálních pacientek inhibitory aromatáz (IA). Určité procento pacientek pokračuje v započaté terapii tamoxifenem. Metabolizmus tamoxifenu, jeho proměna na účinnou látku – endoxifen a schopnost organizmu toto léčivo účinně využít je daná aktivitou enzymů účastnících se jeho metabolizmu. Hlavním enzymem zodpovědným za tuto proměnu je CYP 2D6 – člen rodiny cytochromů P450. Role P-glykoproteinu, jako membránového transportéru, který je mimo jiné zodpovědný za transport tamoxifenu do intracelulárního prostředí, nebyla do dnes prozkoumána. Na pokladě metabolizmu tamoxifenu lze předpokládat, že jeho účinnost může být ovlivněna jednak zevními faktory – komedikaci inhibitory CYP 2D6, nebo vnitřními faktory – polymorfizmy genů pro CYP2D6 a MDR-1. V předkládaném článku Vám nabízíme naše dosavadní výsledky vlivu výše uvedených faktorů na účinnost tamoxifenu v adjuvantní hormonální terapii postmenopauzálních pacientek s lokálním, event. lokálně pokročilým hormonálně dependentním karcinomem prsu.
The initial stages of breast cancer are well treatable nowadays, provided the therapy is appropriate. Hormonal therapy is one of the basic therapeutic modalities for the hormone- dependent breast cancer. Tamoxifen had been the first choice of therapy in hormonedependent postmenopausal women with breast cancer till lately. The last consensus prefers selective inhibitors of aromatase (IA) in the postmenopausal adjuvant hormonal therapy. A certain percentage of patiens continue in started therapy with tamoxifen. Metabolism of tamoxifen in the organism – his change into active substance endoxifen and the ability to utilize tamoxifen is the function of activity of several enzymes. The main enzyme, important duing the change from prodrug tamoxifen into its active substance endoxifen is CYP 2D6 – the member of the cytochrome P450 family. The next important part of tamoxifen metabolism and its transport into intracellular compartment is P-glycoprotein. The process of tamoxifen utilisation and its effectivity could be affected by external factor – e. g. concomitant medication with inhibitors of CYP 2D6 or internal factors – polymorfisms of genes for CYP 2D6 or MDR-1 (gene for P-glycoprotein). In this artikle, we offer our preliminary results of several factors influencing the effect of tamoxifen, extended with new, yet unexplored factor – polymorfism of MDR-1.
- Klíčová slova
- AmpliChip, komedikace, farmakogenomika,
- MeSH
- chemorezistence genetika MeSH
- cytochrom P-450 CYP2D6 genetika metabolismus MeSH
- farmakogenetika metody MeSH
- financování organizované MeSH
- inhibitory aromatasy metabolismus MeSH
- lékové interakce genetika MeSH
- lidé MeSH
- mikročipová analýza využití MeSH
- mnohočetná léková rezistence genetika MeSH
- nádory prsu farmakoterapie genetika MeSH
- P-glykoprotein genetika MeSH
- polymorfismus genetický genetika MeSH
- postmenopauza metabolismus MeSH
- tamoxifen aplikace a dávkování metabolismus MeSH
- vztah mezi dávkou a účinkem léčiva MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- ženské pohlaví MeSH
- MeSH
- cytochrom P-450 CYP2D6 * genetika účinky léků MeSH
- dospělí MeSH
- genotyp MeSH
- inhibitory cytochromu P450 CYP2D6 aplikace a dávkování farmakologie MeSH
- lidé středního věku MeSH
- lidé MeSH
- lokální recidiva nádoru epidemiologie genetika MeSH
- nádorové biomarkery genetika MeSH
- nádory prsu farmakoterapie genetika MeSH
- tamoxifen farmakologie metabolismus MeSH
- Check Tag
- dospělí MeSH
- lidé středního věku MeSH
- lidé MeSH
- ženské pohlaví MeSH
- MeSH
- lékové interakce genetika MeSH
- lidé MeSH
- nádory prsu farmakoterapie MeSH
- selektivní inhibitory zpětného vychytávání serotoninu aplikace a dávkování škodlivé účinky MeSH
- systém (enzymů) cytochromů P-450 genetika účinky léků MeSH
- tamoxifen aplikace a dávkování metabolismus MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- ženské pohlaví MeSH
