Virus-neutralizační test (VNT) je v sérologii arbovirů považován za zlatý standard pro svou vysokou specificitu a senzitivitu. V Národní referenční laboratoři České republiky (NRL ČR) pro arboviry byla vyvinuta jeho mikromodifikace na mikrotitračních deskách s 96 jamkami s vitálním barvením buněčných kultur. Metoda je využívána pro detekci specifických protilátek proti různým virům, zejména arbovirům. Je popsán postup provedení VNT v mikromodifikaci pro virus Ťahyňa. Jsou prezentovány výsledky vyšetření protilátek antiŤahyňa u obyvatelstva v Moravskoslezském kraji dosažené pomocí VNT. Celková séroprevalence u 1001 vyšetřovaných osob byla 3,80 %. Nejvyšší podíl séropozitivních osob byl zjištěn u populace starší 59 let (17,53 %). Naopak u vyšetřovaných dětí do 5 let byla séroprevalence 0,00 % a ve věkové skupině 6–14 ůet 0,56 %.

Virus neutralization test (VNT) is considered to be the gold standard for arbovirus serology because of its high specificity and sensitivity. Its micromodification in 96-well plate with vital staining of cell cultures was developed in the National Reference Laboratory (NRL) for Arboviruses of the Czech Republic and is used for the detection of specific antibodies against various viruses, mainly arboviruses. The test procedure is described for the Tahyna virus micromodified neutralization assay in 96-well plate. Results of an anti-Tahyna antibody survey conducted among the population of northern Moravia using the VNT assay are presented. The overall anti-Tahyna seroprevalence among 1001 tested persons was 3.80%. The highest positivity rate was found in persons aged over 59 years (17.53%) comparing to children with the seroprevalence rates of 0.00% and 0.56% in the age groups 0-5 years and 6-14 years, respectively.

• MeSH
• barvicí látky MeSH
• dítě MeSH
• dospělí MeSH
• kalifornská encefalitida diagnóza   epidemiologie   MeSH
• kultivované buňky MeSH
• lidé středního věku MeSH
• lidé MeSH
• mladiství MeSH
• neutralizační testy MeSH
• neutrální červeň MeSH
• předškolní dítě MeSH
• protilátky virové analýza   MeSH
• senioři MeSH
• séroepidemiologické studie MeSH
• viry kalifornské encefalitidy imunologie   MeSH
• Check Tag
• dítě MeSH
• dospělí MeSH
• lidé středního věku MeSH
• lidé MeSH
• mladiství MeSH
• mužské pohlaví MeSH
• předškolní dítě MeSH
• senioři MeSH
• ženské pohlaví MeSH
• Geografické názvy
• Česká republika MeSH

Cíl práce: Virus západonilské horečky (WNV) je významný celosvětově rozšířený flavivirus přenášený komáry. Ve střední Evropě se virus dlouhodobě sporadicky vyskytuje, ale v letech 2008 a 2009 se masivně rozšířil po celém Maďarsku. Cílem práce bylo zjistit aktuální výskyt infekce WNV u koní v České republice (ČR). Materiál a metody: Celkem bylo v letech 2011–2013 vyšetřeno 2 349 sér dospělých zdravých nevakcinovaných koní z území celé ČR. K vyšetření byl použit komerčně vyráběný kompetitivní imunoenzymatický test (cELISA), pozitivně reagující vzorky byly konfirmovány virus-neutralizačním testem (VNT) s WNV a virem klíšťové encefalitidy (TBEV). Výsledky: Imunoenzymatický test byl pozitivní u 11,5 % vzorků (271 pozitivních/2349 vyšetřených). Konfirmačním vyšetřením VNT byly prokázány protilátky proti WNV u 16 vzorků. Jedenáct z nich reagovalo pozitivně pouze s WNV v titrech 8 až 1024, ve VNT s virem TBEV byly negativní. Souběžná WNV a TBEV séropozitivita byla zjištěna u třech vzorků. Titry protilátek proti WNV byly ale vždy nižší nebo shodné s titry proti TBEV. Pravděpodobně se uplatnila křížová reaktivita flavivirů, ale u vzorků s obdobným titrem WNV a TBEV nelze vyloučit ani souběžnou infekci oběma patogeny. Dva koně reagovali ve VNT s WNV v hraničním titru 4. U séropozitivních koní byl ověřován jejich původ a přesuny. Pět sérologicky WNV pozitivních/TBEV negativních koní (0,2 %) pocházelo z pěti krajů ČR (Jihočeský, Karlovarský, Středočeský, Jihomoravský, Moravskoslezský), přičemž do zahraničí nebyla tato zvířata nikdy přemisťována. Čtyři z nich nebyli přemísťováni ani po ČR a hospodářství majitele neopustili. Dalších šest WNV pozitivních/TBEV negativních koní bylo do ČR dovezeno ze severní Ameriky nebo střední a západní Evropy, nelze jednoznačně určit, zda se v těchto případech jedná o importovanou nebo autochtonní infekci. Závěr: Výsledky studie potvrzují, že výskyt protilátek proti WNV u koní v ČR je sporadický. Bylo prokázáno, že virus cirkuluje v různých částech České republiky, nejen na jižní Moravě.

Study aim: The West Nile virus (WNV) is an important mosquito-borne flavivirus occurring around the world. Occasionally found in Central Europe, the virus spread massively through whole Hungary between 2008 and 2009. The aim of our study was to determine the recent prevalence of the WNV infection in horses in the Czech Republic. Material and methods: Overall, 2349 serum samples, collected from healthy unvaccinated adult horses in the Czech Republic between 2011 and 2013, were tested. A commercially available competitive ELISA kit (cELISA) was used for this purpose and positive samples were confirmed by virus neutralisation tests using WNV and tick-borne encephalitis virus (TBEV). Results: Altogether 271 of 2348 samples (11.5%) were positive by cELISA. Confirmatory VNT revealed 16 WNV positive samples, 11 of which had titres from 8 to 1024; VNTs with TBEV were negative. Three samples had antibodies against both viruses and the WNV antibody titres were less than or equal to the TBEV antibody titres. A cross reactivity of flaviviruses might have had an impact on the results, but in samples with similar WNV and TBEV titres, co-infection with both pathogens cannot be ruled out either. VNT antibody titres in two horses were inconclusive (cut-off titre 4). The place of birth and transfers (if any) were checked for each WNV seropositive horse. Five WNV positive/TBEV negative samples (0.2 %) came from five administrative regions (South Bohemian, Karlovy Vary, Central Bohemian, South Moravian, and Moravian-Silesian) and the respective animals were never moved to a foreign country. Four of these horses never left the farm. Other six WNV positive/TBEV negative horses were imported to the Czech Republic from North America or Central and West Europe and therefore, it is not possible to tell unambiguously whether their infection is autochthonous or imported. Conclusion: The results of the present study confirm that WNV antibodies occur sporadically in horses in the Czech Republic. WNV was found to circulate in different parts of the Czech Republic and not only in the South of Moravia.

• MeSH
• ELISA MeSH
• imunoenzymatické techniky MeSH
• koně * MeSH
• nemoci koní diagnóza   krev   MeSH
• sérum MeSH
• statistika jako téma MeSH
• západonilská horečka * diagnóza   veterinární   MeSH
• zvířata MeSH
• Check Tag
• zvířata MeSH

V souvislosti s prvními importovanými případy horečky chikungunya do Evropy v průběhu epidemie v oblasti Indického oceánu v roce 2006 i výskytem autochtonních nákaz v oblasti severní Itálie v létě 2007 byla v Národní referenční laboratoři České republiky (NRL ČR) pro arboviry zavedena sérologická diagnostika horečky chikungunya. Materiál a metody: V roce 2006 byla nejprve zavedena diagnostika pomocí komplement-fixační reakce (KFR). Pro zpřesnění diagnostiky byl v roce 2007 vyvinut a do praxe zaveden virus-neutralizační test (VNT) v mikromodifikaci na mikrotitračních destičkách s využitím vitálního barvení pro průkaz specifických protilátek anti-chikungunya v. V roce 2008 byla diagnostika doplněna průkazem specifických protilátek anti-chikungunya v. ve třídách IgG a IgM pomocí nepřímé imunofluorescence (NIF) s využitím komerčního setu firmy EUROIMMUN. V práci je popisován princip VNT v mikromodifikaci i postup jeho provedení. Výsledky: Od února 2006 do konce února 2008 bylo vyšetřeno celkem 110 vzorků sér od 104 osob na protilátky anti-chikungunya v. Akutní infekce byla potvrzena u 4 pacientů, u dalších 2 osob byla prokázána séropozitivita bez průkazu akutní infekce. Závěr: Jednotlivými metodami bylo dosaženo souhlasných kvalitativních výsledků a potvrzen přínos virus-neutralizačního testu pro konfirmaci.

During the year 2006 first imported cases of chikungunya fever in Europe occured contextual to the epidemic in the area of Indian ocean. In summer 2007 also autochthonnic chikungunya infections in the northern part of Italy appeared. On the basis of these facts serologic diagnostics of chikungunya fever was initiated in the National Reference Laboratory (NRL) for Arboviruses of the Czech Republic. MATERIAL AND METHODS: Complement-fixation assay was estabilished in 2006. Micromodification of virus-neutralisation assay in 96-well plate with staining of the cell cultures for detection of anti-chikungunya v. antibodies was developed and estabilished for improvement of the diagnostics in 2007. Consequently in 2008 the diagnostics was completed with indirect immunofluorescence assay for detection of anti-chikungunya v. IgG and IgM antibodies using the commercial EUROIMMUN assay. Principle of virus-neutralisation and the test procedure is described in the paper. Results reached by the use of all these methods are compared. RESULTS: From February 2006 to February 2008 110 serum samples from 104 persons were tested for anti-chikungunya v. antibodies. In 4 pateints acute chikungunya v. infection was proved and two other persons revealed seropositivity without acute infection. CONCLUSIONS: Qualitative correspondence between the particular methods was demonstrated and a benefit of virus-neutralisation assay for confirmation of the results was proved.

• MeSH
• infekce alfaviry diagnóza   MeSH
• lidé MeSH
• protilátky virové krev   MeSH
• sérologické testy MeSH
• virus chikungunya MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH

Autoři upozorňují na diagnostická úskalí v sérologii klíšťové encefalitidy u očkovaných osob. Na konkrétní kazuistice pacientky se selháním očkování proti viru klíšťové encefalitidy je ilustrován přínos a omezení jednotlivých sérologických metod. U očkovaných pasntů s podezřením na klíšťovou encefalitidu je zdůrazněna nutnost vyšetření párových vzorků sér a průkaz signifikantní dynamiky v titru protilátek pro potvrzení diagnózy. Metodou volby je v těchto případech virusneutralizační test (VNT).

The authors draw attention to diagnostic pitfalls in tick born encephalitis serology in vaccinated people. Benefits and limitations of particular serologic methods are demostrated by case study of a patient with a failure of anti-TBEV vaccination. It is necessary to examine paired serum samples in previously vaccinated patients with suspicion of tick born encephalitis and to demonstrate significant increase of antibodies titers for confirmation of the diagnosis. The virusneutralisation assay is considered a method of choice in these special cases.

• MeSH
• atenuované vakcíny škodlivé účinky   terapeutické užití   MeSH
• ELISA metody   MeSH
• klíšťová encefalitida diagnóza   prevence a kontrola   MeSH
• komplement fixační testy metody   MeSH
• lidé MeSH
• neutralizační testy metody   MeSH
• senzitivita a specificita MeSH
• virové vakcíny škodlivé účinky   terapeutické užití   MeSH
• viry klíšťové encefalitidy izolace a purifikace   MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• ženské pohlaví MeSH
• Publikační typ
• kazuistiky MeSH