Dehydrogenase/reductase (SDR family) member 7 (DHRS7, retSDR4, SDR34C1) is a previously uncharacterized member of the short-chain dehydrogenase/reductase (SDR) superfamily. While human SDR members are known to play an important role in various (patho)biochemical pathways including intermediary metabolism and biotransformation of xenobiotics, only 20% of them are considered to be well characterized. Based on phylogenetic tree and SDR sequence clusters analysis DHRS7 is a close relative to well-known SDR member 11β-hydroxysteroid dehydrogenase 1 (11β-HSD1) that participates in metabolism of endogenous and xenobiotic substances with carbonyl group. The aim of present study is to determine the basic biochemical properties of DHRS7 and its possible involvement in metabolism of substrates with carbonyl group. For the first time the computational predictions of this membrane protein and membrane topology were experimentally confirmed. DHRS7 has been demonstrated to be an integral protein facing the lumen of the endoplasmic reticulum with lack of posttranscriptional glycosylation modification. Subsequently, NADP(H) cofactor preference and enzymatic reducing activity of DHRS7 was determined towards endogenous substrates with a steroid structure (cortisone, 4-androstene-3,17-dion) and also toward relevant exogenous substances bearing a carbonyl group harmful to human health (1,2-naphtoquinone, 9,10-phenantrenequinone). In addition to 11β-HSD1, DHRS7 is another enzyme from SDR superfamily that have been proved, at least in vitro, to contribute to the metabolism of xenobiotics with carbonyl group.
- MeSH
- 11-beta-hydroxysteroiddehydrogenasa typ 1 chemie metabolismus MeSH
- benzaldehydy metabolismus MeSH
- fluorescenční protilátková technika MeSH
- intracelulární membrány metabolismus MeSH
- izoenzymy chemie metabolismus MeSH
- jaterní mikrozomy enzymologie MeSH
- kinetika MeSH
- lidé MeSH
- molekulární sekvence - údaje MeSH
- NAD metabolismus MeSH
- NADP metabolismus MeSH
- nitrosaminy chemie metabolismus MeSH
- oxidoreduktasy chemie metabolismus MeSH
- sekvence aminokyselin MeSH
- Sf9 buňky MeSH
- spektrofotometrie MeSH
- substrátová specifita MeSH
- ultracentrifugace MeSH
- western blotting MeSH
- zvířata MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- zvířata MeSH
- Publikační typ
- časopisecké články MeSH
- práce podpořená grantem MeSH
Tobacco smoking is the most widely known cause of human cancer-related death worldwide. NNK is one of the proved human carcinogens contributing to the development of several types of cancer. The carcinogenic effect of NNK depends on the metabolic pathway. Reduction of NNK by carbonyl reducing enzymes leads to the formation of NNAL. This pathway is generally regarded as detoxification pathway although the conditions and circumstances are quite complicated - the process depends on a formed enantiomer of NNAL. In this study a novel method for the determination of the metabolite NNAL was developed. This makes it possible to findand characterize carbonyl reducing enzymes that are involved in NNK metabolism. This simple HPLC method uses conventional HPLC instrumentation and is designed mainly for biochemical laboratories. A new microsomal carbonyl reducing enzyme participating in the metabolism of NNK in vitro has been described. Its activity was compared with other carbonyl reducing enzymes taking part in the biotransformation of NNK.
- MeSH
- alkoholoxidoreduktasy metabolismus MeSH
- jaterní mikrozomy metabolismus MeSH
- karcinogeny metabolismus MeSH
- kouření škodlivé účinky metabolismus MeSH
- lidé MeSH
- nitrosaminy analýza metabolismus MeSH
- pyridiny analýza MeSH
- stereoizomerie MeSH
- vysokoúčinná kapalinová chromatografie metody MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- Publikační typ
- časopisecké články MeSH
- práce podpořená grantem MeSH
Nitrate is a natural and essential part of plants, its concentration in plants depends on a number of factors. Its compounds are used in food industry as preservatives. In production of cheeses, nitrate additive prevents formation of gases. The main source of nitrate in foodstuffs is vegetables, drinkable water and pickled products. Foodstuffs usually contain immaterial amount of nitrite, the source is mainly pickled meat products. Endogenous formation of nitrite from nitrate is however of substantially greater significance. In stomach, nitrite forms nitrosamines together with amines, amides and amino acids that have carcinogenic effect. The concentration of nitrate, nitrite and nitrosamines in pickled products has reduced significantly in the recent years. The health risk based on the current reception of nitrite, nitrate and nitrosamines through foodstuffs is considered very low.
- MeSH
- dusičnany metabolismus normy škodlivé účinky MeSH
- dusitany izolace a purifikace metabolismus škodlivé účinky MeSH
- Evropská unie MeSH
- kontaminace potravin analýza prevence a kontrola MeSH
- lidé MeSH
- masné výrobky analýza klasifikace MeSH
- nitrosaminy izolace a purifikace metabolismus škodlivé účinky MeSH
- potraviny konzervované normy škodlivé účinky toxicita MeSH
- potraviny normy škodlivé účinky toxicita MeSH
- statistika jako téma MeSH
- zákonodárství jako téma MeSH
- zelenina chemie klasifikace MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- Publikační typ
- přehledy MeSH
The interaction of carcinogenic N-nitrosodimethylamine (NDMA) and N-nitrosomethylaniline (NMA) with cytochromes P450 (CYP), CYP2B4, CYP2E1 and CYP3A6, and their metabolism by these enzymes reconstituted with NADPH-CYP reductase in liposomes were studied. Using the difference spectroscopy, the lowest values of spectral dissociation constants (KS) of the binary complex of NDMA and NMA with the enzyme were found for CYP2E1. Both N-nitrosamines bind to the heme iron atom as ligands. On the contrary, the binding of NDMA and NMA to CYP2B4 gives the type I spectra. NDMA is bound to CYP3A6 analogously as to CYP2B4, whereas no difference spectra were acquired with NMA and CYP3A6. All tested CYPs oxidize NDMA and NMA. CYP2E1 exhibits the lowest Km values, 7.5 and 5.0 micromol/l for NDMA and NMA, respectively, and for CYP3A6 we found 30.0 and 10.0 micromol/l for NDMA and NMA, respectively, while CYP2B4 exhibits the lowest affinity for both carcinogens. In spite of different binding affinities of NDMA and NMA, the values of Vmax for their oxidation were, however, similar for all tested CYPs. The results demonstrate that investigations utilizing several enzymatic approaches are necessary to properly evaluate the mechanism and efficiency of NDMA and NMA oxidation by CYPs in vitro.
- MeSH
- aromatické hydroxylasy metabolismus MeSH
- cytochrom P-450 CYP2E1 metabolismus MeSH
- dimethylnitrosamin metabolismus MeSH
- jaterní mikrozomy metabolismus MeSH
- karcinogeny metabolismus MeSH
- kinetika MeSH
- králíci MeSH
- liposomy MeSH
- NADPH-cytochrom c-reduktasa metabolismus MeSH
- nitrosaminy metabolismus MeSH
- oxidace-redukce MeSH
- systém (enzymů) cytochromů P-450 metabolismus MeSH
- techniky in vitro MeSH
- zvířata MeSH
- Check Tag
- králíci MeSH
- zvířata MeSH
- Publikační typ
- časopisecké články MeSH
- práce podpořená grantem MeSH
Dusičnany se na naší Zemi vyskytují zcela přirozeně, v posledních desítiletích se však jejich výskyt v přírodě uměle zvýšil díky přímým zásahům člověka (zvýšené osídlení krajiny, chemizace zemědělství). Konzumace dusičnanů v malém množství není pro člověka zdravotně nebezpečná. Příjem vyššího množství dusičnanů z vody nebo potravin však může vést u člověka k vyšší produkci dusitanů v zažívacím traktu a po jejich sloučení se sekundárními aminy i k tvorbě karcinogenních nitrosaminů. Vyšší konzumace dusičnanů může mít negativní vliv také na trávení a vstřebávání živin, metabolizmus vitaminu A, funkci štítné žlázy, poruchy činnosti mozku a srdce. Závažným projevem vyššího příjmu dusičnanů u kojenců může být vznik dusičnanové alimentární methemoglobinémie. Významným zdrojem dusičnanů může být pitná voda (zvláště soukromé nekontrolované zdroje), dále zelenina, konzervované potraviny, maso, ryby, uzeniny a tvrdé sýry. Vzhledem k přísným, stanoveným, nejvyšším mezním hodnotám dusičnanů v pitné vodě a potravinách se však nemusíme obávat závažných zdravotních důsledků z nadměrného příjmu dusičnanů.
- MeSH
- analýza moči MeSH
- chlorzoxazon aplikace a dávkování metabolismus MeSH
- chromozomální aberace MeSH
- disulfiram aplikace a dávkování farmakologie MeSH
- dospělí MeSH
- inhibitory cytochromu P450 MeSH
- lidé MeSH
- nitrosaminy metabolismus MeSH
- pracovní expozice MeSH
- systém (enzymů) cytochromů P-450 MeSH
- Check Tag
- dospělí MeSH
- lidé MeSH
- mužské pohlaví MeSH
