U některých pacientů se špatnou odpovědí na léčbu CML jsme zjistili velmi nízkou hladinu transkriptu BCR-ABL. Na základě studia role BCR-ABL, BCR i ABL chceme zjistit, zda v těchto případech může CML probíhat mechanismem nezávislých na BCR-ABl. Výsledkypřispějí ke zkvalitnění diagnostiky i léčby CML.; In some of CML patients with poor response to treatment we have found low BCR-ABL transcript levels. We will study the role of BCR-ABL as well as BCR and ABL in order to find out whether CML mechanism may be independent of BCR-ABL in these cases. The work will contribute to improvement of the diagnostic and treatment of CML.

• MeSH
• bcr-abl fúzní proteiny diagnostické užití   MeSH
• chronická myeloidní leukemie diagnóza   terapie   MeSH
• filadelfský chromozom MeSH
• responzivní elementy MeSH

• Konspekt
• Patologie. Klinická medicína
• NLK Obory
• onkologie
• hematologie a transfuzní lékařství
• NLK Publikační typ
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR

Chronická myeloidní leukémie (CML) je klonální myeloproliferativní onemocnění vznikající v důsledku chromosomální translokace, jež vede k produkci chimerického BCR-ABL proteinu s neregulovanou tyrosin kinázovou (TK) aktivitou. Inhibice BCR-ABL aktivity pomocí TK inhibitorů (TKI) představuje standard v léčbě CML. Ačkoliv většina pacientů pozitivně reaguje na administraci TKI, jejich použití nevede k eradikaci choroby. Skutečnost, že: i) pacienti s CML vyvinou resistenci vůči TKI v důsledku mutací v BCR-ABL, ii) TKI jsou neefektivní pro pomalu proliferující rakovinné kmenové buňky, a iii) řada dalších onkogenických signálních drah se spolupodílí na propagaci CML, vede k relapsu onemocnění. Hlavním cílem tohoto projektu je charakterizace interaktomu BCR-ABL zahrnujícího stabilně a transientně asociované proteiny v různých klinických fázích CML a identifikace protein-proteinových interakcí zodpovědných za přežívání buněk pozitivních na BCR-ABL. Výsledky tohoto projektu umožní identifikaci nových přístupů k léčbě CML.; Chronic myeloid leukemia (CML) is a clonal myeloproliferative disorder arising from chromosomal translocation producing a chimeric BCR-ABL protein with unregulated tyrosine kinase (TK) activity. Targeting of the BCR-ABL activity by the TK inhibitors (TKIs) is a frontline in treatment of the CML. While majority of the CML patients positively respond to the TKIs, their use does not cure the disease. The facts that the CML patients often acquire BCR-ABL mutations causing resistance to TKIs, that slowly proliferating cancer stem cells are poorly targeted with TKIs, and that other oncogenic pathways cooperate with the BCR-ABL in the CML development are all responsible for disease relapse. Main goal of the proposed project is to characterise the BCR-ABL interactome comprising of stably and transiently associated proteins in different clinical stages of CML along with identification of protein-protein interactions responsible for survival of the BCR-ABL positive cells. The results are to identify novel treatment strategies in CML.

• MeSH
• bcr-abl fúzní proteiny MeSH
• chronická myeloidní leukemie terapie   MeSH
• klinický obraz nemoci MeSH
• mapování interakce mezi proteiny MeSH
• mapy interakcí proteinů MeSH
• proteinkinasa BTK MeSH
• signální transdukce MeSH

• Konspekt
• Patologie. Klinická medicína
• NLK Obory
• onkologie
• hematologie a transfuzní lékařství
• biochemie
• NLK Publikační typ
• závěrečné zprávy o řešení grantu AZV MZ ČR

Jde o rozšíření současných vědomostí o imunologické reaktivitě proti myším buňkám transformovaným fúzním genem bcr-abl. Hlavním cílem je konstrukce terapeutickýchvakcín z genově modifikovaných buněk. Z pokusů by měly vzejít poznatky, které vytvoří předpoklady pro vznik nové strategie pro léčbu chronické myeloidní leukemie (CML) Jako příprava pro její realizaci budou zavedeny postupy umožňující izolaci buněčných linií z kultur pupečníkových kmenových buněk a posléze od pacientů s CML. Ty budou sloužit jako substrát pro měření specifických imunitních reakcí a po genetické modifikaci resultující v produkci různých imunostimulačních a antiangiogenetických faktorů se v budoucnu stanou kandidáty na autologní terapeutické vakcíny.; The proposed study aims at broadening the present knowledge of the immune reactivity against bcr-abl- transformed cells in mice. New vaccines based on gene-modified cells will be constructed and tested in animals which had been inoculated with the tumourcells It is expected that stimuli for forming a new strategy for treatment of chronic myeloid leukemia (CML) will be the outcome of the experiments. As a preparatory step, attempts will be made to isolate bcr-abl expressing cell lines from cultures of human umbilical stem cells, and later on, from cultures of cells obtained from CML patients. These cell lines will serve for monitoring specific immune reactions of the patients and in the future may develop into candidates for autologous therapeutic vaccines.

• MeSH
• aktivní imunoterapie MeSH
• bcr-abl fúzní proteiny MeSH
• chronická fáze myeloidní leukemie farmakoterapie   MeSH
• lidé MeSH
• modely u zvířat MeSH
• odběr fetální krve využití   MeSH
• posttranslační úpravy proteinů MeSH
• protinádorové vakcíny MeSH
• translační modifikace proteinu MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH

• Konspekt
• Patologie. Klinická medicína
• NLK Obory
• onkologie
• hematologie a transfuzní lékařství
• NLK Publikační typ
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR

De novo DNA metylace bcr-abl lokusu byla pozorována během přechodu chronické myeloidní leukémie z chronické do zrychlené fáze a blastické krize. Stanovení vztahu mezi metylací DNA translokované abl alely, její expresí a průběhem nemoci je hlavní náplní tohoto projektu.

• MeSH
• bcr-abl fúzní proteiny diagnostické užití   analýza   MeSH
• chronická myeloidní leukemie diagnóza   MeSH
• CpG ostrůvky imunologie   genetika   MeSH
• geny abl MeSH
• metylace DNA účinky léků   MeSH
• polymerázová řetězová reakce využití   metody   MeSH
• telomerasa diagnostické užití   MeSH

• Konspekt
• Patologie. Klinická medicína
• NLK Obory
• biologie
• hematologie a transfuzní lékařství
• radiologie, nukleární medicína a zobrazovací metody
• chemie, klinická chemie
• NLK Publikační typ
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR

Studium podílu aktivity P-glykoproteinu na vzniku rezistence vůči imatinibu (STI571) u buněk exprimujících Bcr-Abl tyrosin kinázu pomocí přímého stanovení intracelulární koncentrace tohoto léčiva.; Study of the P-gp contribution to the development of resistance to imatinib in Bcr-Abl positive cells using the direct determination of intracellular content of the drug.

• MeSH
• bcr-abl fúzní proteiny MeSH
• malá interferující RNA MeSH
• mnohočetná léková rezistence MeSH
• myeloidní leukemie MeSH
• nádory farmakoterapie   MeSH
• P-glykoprotein MeSH
• tyrosinkinasové receptory MeSH

• Konspekt
• Farmacie. Farmakologie
• NLK Obory
• farmacie a farmakologie
• farmacie a farmakologie
• onkologie
• NLK Publikační typ
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR

Stanovení in vitro senzitivity leukemických buněk u nemocných s chronickou myeloidní leukemií léčenými inhibitory tyrosinové kinázy a její využití při rozhodování o léčbě. Klony leukemických buněk in vitro rezistentní k imatinibu, získané od nemocných sPh+ CML, jsou vyšetřovány technologií CGH mikroarray na skryté genetické změny s cílem rozšířit poznání mechanismů odpovědných za vznik rezistence k imatinibu.; Assessment of in vitro sensitivity of leukemic cells from patients with chronic myeloid leukemia treated with tyrosine kinase inhibitors and its implications for the therapy management. Clones of in vitro imatinib-resistant cells, obtained from patientswith Ph+ CML, are assessed for hidden genetic changes using CGH microarray with the aim to increase our knowledge of the mechanisms responsible for imatinib resistance development.

• MeSH
• bcr-abl fúzní proteiny antagonisté a inhibitory   terapeutické užití   MeSH
• chronická myeloidní leukemie terapie   MeSH
• cytogenetické vyšetření MeSH
• hybridizace in situ fluorescenční MeSH
• léková rezistence MeSH
• nádorové biomarkery MeSH
• polymerázová řetězová reakce MeSH
• senzitivita a specificita MeSH
• tyrosinkinasy antagonisté a inhibitory   terapeutické užití   MeSH

• Konspekt
• Biochemie. Molekulární biologie. Biofyzika
• NLK Obory
• hematologie a transfuzní lékařství
• onkologie
• biologie
• NLK Publikační typ
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR

Bude studován molekulární mechanismus na úrovni proteinů terapeutických účinků Interferonu - alfa, inhibitoru přenosu signálu STI571, inhibitoru proteasomu a fotodynamické terapie, na buňky chronické myeloidní leukemie K562 a BV173 a na primární buňky. Metodami proteomové analýzy (dvourozměrná elektroforéza v kombinaci s hmotnostní spektrometrií) budou identifikovány buněčn proteiny, které jsou diferenčně exprimovány po účinku těchto terapeutik. Metodami buněčné biochemie bude stanoven účinek uvedenýchterapeutik na viabilitní, proliferační a apototické parametry a adhezivní vlastnosti CML buněk. Budou vypracovány kvantitativní mětody stanovení hladiny Bcr-Abl proteinu a jeho tyrosin-kinázové aktivity a adhezivních vlastností CML buněk.; The molecular mechanisms of therapeutic effects of cytokine Interferon - alfa, signal transduction inhibitor STI571, proteasome inhibitor and photodynamic therapy will be studied at the protein level. By proteome analysis methods (two-dimensional gel electrophoresis in combination with mass spectrometry) the cellular proteins will be identified which are differentially expressed following drugs treatment. Employing cell biochemistry methods the effects of the above therapeutics on CML cells viability, proliferation and apoptotic parameters as well as adhesive properties will be studied. The quantitative methods of Bcr-Abl level and TK activity determination as well as CML cells adhesive properties will be elaborated.

• MeSH
• bcr-abl fúzní proteiny MeSH
• chronická myeloidní leukemie farmakoterapie   MeSH
• interferon alfa MeSH
• proteom analýza   MeSH

• Konspekt
• Biochemie. Molekulární biologie. Biofyzika
• NLK Obory
• hematologie a transfuzní lékařství
• onkologie
• farmakoterapie
• NLK Publikační typ
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR

Projekt je zaměřen na hledání časných markerů progrese CML do akutní fáze,aby bylo možno včasnou léčbou tomuto zvratu zabránit. Jako možný marker bude pomocí kvantitativních RT-PCR sledována haldina transkriptů BCR-ABL a poměr transkriptů BCR-ABL/BCR.Pomocí metody cDNA bio-čipů budou sledovány změny v expresi různých genů v různých fázích onemocnění.; We shall search for early markers of CML progression into acute phase to be able to interrupt this progression with timely treatment. As possible markers,we shall identify the genes differentially expressed in different stages of CML by the method of cDNA bio-chips and follow up the BCR-ABL transcript level BCR-ABL transcript ratio by quantitative RT-PCR.

• MeSH
• akcelerovaná fáze myeloidní leukemie MeSH
• bcr-abl fúzní proteiny MeSH
• exprese genu MeSH
• nádorové biomarkery MeSH
• polymerázová řetězová reakce s reverzní transkripcí MeSH

• Konspekt
• Patologie. Klinická medicína
• NLK Obory
• hematologie a transfuzní lékařství
• biologie
• NLK Publikační typ
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR

Zvýšení účinnosti terapeutických protinádorových vakcín založených na fúzi nádorového antigenu s beta-glukuronidázou E. coli. Modifikace genů směřující ke zvýšení produkce imunogenů, kterými budou onkoproteiny E7 a E6 HPV16 a fúzní onkoprotein Bcr-Abl. Stanovení mechanismů uplatňujících se při indukci imunitních reakcí po aplikaci fúzních genů intradermálně genovou pistolí nebo intramuskulárně injikací. Testování účinků imunizací na myších nádorových modelech. Posílení protinádorového účinku DNA vakcínkombinací jednotlivých fúzních genů a dále kombinací s látkami stimulujícími vrozenou imunitu, a to zejména přes receptory TLR (Toll-like receptors). Sledování možnosti odstranění nádorových buněk vyznačujících se různými mechanismy úniku z hostitelské imunity, zejména poklesem tvorby molekul MHC-I a mutovaným imunodominantním epitopem nádorového antigenu; Enhancement of efficacy of therapeutic anti-tumor vaccines based on fusion of a tumor antigen with E. coli beta-glucuronidase. Increase of production of immunogens (oncoproteins E7 and E6 of HPV16 and fusion oncoprotein Bcr-Abl) by modification of genes.Determination of mechanisms involved in induction of immune reactions after administration of fusion genes intradermally by a gene gun or intramuscularly by injection. Examination of immunization effects in mouse tumor models. Enhancement of anti-tumorefficacy of DNA vaccines by combination of single fusion genes and by combination with drugs stimulating innate immunity, particularly via Toll-like receptors. Elimination of tumor cells with different mechanisms of escape from the host immunity, especially down-regulation of MHC class I surface expression and mutation of the immunodominant epitope of a tumor antigen..

• MeSH
• adjuvancia imunologická MeSH
• antigeny nádorové MeSH
• bcr-abl fúzní proteiny MeSH
• chronická myeloidní leukemie MeSH
• DNA vakcíny MeSH
• geny MHC třídy I MeSH
• lidský papilomavirus 16 MeSH
• metastázy nádorů prevence a kontrola   MeSH
• onkogenní fúze MeSH
• toll-like receptory MeSH

• Konspekt
• Biochemie. Molekulární biologie. Biofyzika
• NLK Obory
• biologie
• hematologie a transfuzní lékařství
• NLK Publikační typ
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR

Analýza profilu metabolomu buněčného modelu nádorových kmenových buněk, BCR-ABL pozitivních buněčných linií senzitivních a rezistentních k imatinibu a buněk získaných od nemocných s chronickou myeloidní leukémií a myelodysplastickým syndromem léčených inhibitory tyrosinových kináz nebo chelátory železa umožní identifikovat metabolomické markery optimální léčebné odpovědi, rezistence a mechanismy jakými chelatační léčba ovlivňuje buněčný cyklus. Získané údaje budou využity k upřesnění prognózy a individualizaci cílené léčby nemocných s uvedenými chorobami krvetvorby.; Analysis of metabolome profile in model of cancer stem cells, BCR-ABL positive cell lines sensitive and resistant to imatinib and cells obtained from patients with chronic myeloid leukemia and myelodysplastic syndrome treated with tyrosine kinase inhibitors or iron chelators enable to identify metabolomic markers of optimal treatment response and resistance and mechanisms by which iron chelators influence the cell cycle of cancer cells. Results obtained will be used for prognostic refinement and individualization of targeted treatment in patients with above-mentioned hematopoietic disorders.

• MeSH
• bcr-abl fúzní proteiny MeSH
• chelátory železa MeSH
• chelátory MeSH
• cílená molekulární terapie MeSH
• individualizovaná medicína MeSH
• metabolomika MeSH
• myelodysplastické syndromy farmakoterapie   MeSH
• myeloproliferativní poruchy farmakoterapie   MeSH
• nádorové biomarkery MeSH
• prognóza MeSH
• tyrosinkinasy antagonisté a inhibitory   MeSH

• Konspekt
• Patologie. Klinická medicína
• NLK Obory
• onkologie
• hematologie a transfuzní lékařství
• NLK Publikační typ
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR