Cell-free microRNAs (miRNAs) have become one of the novel promising diagnostic and prognostic biomarkers for various diseases recently. Blood serum and plasma along with urine are the most common sources of clinically well, almost noninvasively available samples containing various types of miRNAs. Here, we present a protocol for a small-scale study investigating expression of several candidate miRNAs. Small-scale experiments may be worth investigating in cases where no information is available on miRNAs expression in particular diseases, for validation of previously published miRNAs with promising diagnostic potential, particularly in situations where follow-up study is aimed at validating miRNAs coming from array or NGS experiments, or where funding for these large-scale experiments is not available.Using urine miRNAs expression as the novel diagnostic tools is challenging and currently this approach is still in its infancy. Therefore, various methods may result in different conclusions depending on clinical sample sets and differences among methods used for the miRNAs isolation and quantitation. In this protocol, we present the method evaluated in the study focused on cell-free urinary miRNAs in ovarian and endometrial cancers. We recommend using stabilization tubes for the urine collection, as this step may be necessary to stop activity of RNases. Further, routine real-time PCR methods are described. We demonstrate that assessment of urinary miRNAs expression may reveal as a feasible method to explore the potential for finding novel diagnostic and prognostic markers.
- MeSH
- analýza moči metody MeSH
- cirkulující mikroRNA genetika izolace a purifikace moč MeSH
- kvantitativní polymerázová řetězová reakce metody MeSH
- lidé MeSH
- nádory endometria genetika moč MeSH
- nádory vaječníků genetika moč MeSH
- polymerázová řetězová reakce s reverzní transkripcí metody MeSH
- regulace genové exprese u nádorů MeSH
- stanovení celkové genové exprese metody MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- ženské pohlaví MeSH
- Publikační typ
- časopisecké články MeSH
- MeSH
- cirkulující mikroRNA genetika izolace a purifikace moč MeSH
- exozómy genetika patologie MeSH
- lidé MeSH
- nádory endometria * diagnóza moč patologie MeSH
- nádory vaječníků * diagnóza moč patologie MeSH
- pilotní projekty MeSH
- regulace genové exprese u nádorů MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- ženské pohlaví MeSH
- Publikační typ
- práce podpořená grantem MeSH
- MeSH
- lidé MeSH
- mikro RNA MeSH
- nádorové biomarkery * MeSH
- nádory děložního čípku * diagnóza MeSH
- nádory endometria * diagnóza MeSH
- nádory vaječníků * diagnóza MeSH
- výzkum MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- ženské pohlaví MeSH
- Publikační typ
- práce podpořená grantem MeSH
Among gynaecological cancers, epithelial ovarian cancers are the most deadly cancers while endometrial cancers are the most common diseases. Efforts to establish relevant novel diagnostic, screening and prognostic markers are aimed to help reduce the high level of mortality, chemoresistance and recurrence, particularly in ovarian cancer. MicroRNAs, the class of post-transcriptional regulators, have emerged as the promising diagnostic and prognostic markers associated with various diseased states recently. Urine has been shown as the source of microRNAs several years ago; however, there has been lack of information on urine microRNA expression in ovarian and endometrial cancers till now. In this pilot study, we examined the expression of candidate cell-free urine microRNAs in ovarian cancer and endometrial cancer patients using quantitative real-time PCR. We compared the expression between pre- and post-surgery ovarian cancer samples, and between patients with ovarian and endometrial cancers and healthy controls, within three types of experiments. These experiments evaluated three different isolation methods of urine RNA, representing two supernatant and one exosome fractions of extracellular microRNA. In ovarian cancer, we found miR-92a significantly up-regulated, and miR-106b significantly down-regulated in comparison with control samples. In endometrial cancer, only miR-106b was found down-regulated significantly compared to control samples. Using exosome RNA, no significant de-regulations in microRNAs expression could be found in either of the cancers investigated. We propose that more research should now focus on confirming the diagnostic potential of urine microRNAs in gynaecological cancers using more clinical samples and large-scale expression profiling methods.
- MeSH
- down regulace genetika MeSH
- exozómy genetika MeSH
- lidé středního věku MeSH
- lidé MeSH
- mikro RNA genetika moč MeSH
- nádorové biomarkery genetika moč MeSH
- nádory endometria diagnóza genetika moč MeSH
- nádory vaječníků diagnóza genetika moč MeSH
- pilotní projekty MeSH
- prognóza MeSH
- senioři nad 80 let MeSH
- senioři MeSH
- studie případů a kontrol MeSH
- upregulace genetika MeSH
- Check Tag
- lidé středního věku MeSH
- lidé MeSH
- senioři nad 80 let MeSH
- senioři MeSH
- ženské pohlaví MeSH
- Publikační typ
- časopisecké články MeSH
- práce podpořená grantem MeSH
Malé regulační molekuly, tzv. mikroRNA, se podílejí na regulaci všech základních životních procesů v buňkách. Jsou regulátory exprese genů na posttranskripční úrovni. Ovlivňují tuto expresi vazbou na cílové mRNA, která vede k blokaci translace a štěpení mRNA. Nejnovější výzkumy ukázaly, že jejich výskyt není omezen jen na buňky, ale mikroRNA se vyskytují také v tělních tekutinách. Vzhledem k tomu, že diferenciální exprese určitých mikroRNA je často asociovaná s mnoha patologickými procesy, detekce deregulovaných mikroRNA v diagnosticky relevantních vzorcích (např. krvi, plazmě/séru, moči) se může stát základem nových diagnostických postupů. U gynekologických nádorových onemocnění je nalezení nových diagnostických biomarkerů důležitým cílem současných výzkumů. V tomto článku naleznete přehled cirkulujících a extracelulárních mikroRNA, které byly nejnověji nalezeny deregulovány u karcinomu ovaria, endometria a cervixu, především ve vzorcích krve, séra/plazmy a moči.
Small, non-coding molecules of RNA, microRNAs, have been shown to participate in regulation of key biological processes in the cells. They regulate the expression at post-transcriptional level by binding to target mRNA, resulting in mRNA degradation or translation inhibition. The most recent investigations revealed that microRNAs may occur not only in the cells, but also in many body fluids. Differential expression of particular microRNAs is often associated with many pathological states. Therefore, the detection of deregulated microRNAs in diagnostically relevant samples such as blood, plasma/serum, or urine may become the basis for the establishment of novel diagnostic procedures. Finding alternative diagnostic biomarkers for gynecological cancers is the goal of many recent investigations. We present here the survey of novel circulating and extracellular microRNAs which have been found deregulated in ovarian cancer, endometrial cancer and cervical cancer, particularly in blood, plasma/serum and urine samples.
- MeSH
- gynekologická onemocnění * diagnóza krev MeSH
- lidé MeSH
- mikro RNA * diagnostické užití krev MeSH
- nádorové biomarkery krev MeSH
- nádory děložního čípku krev MeSH
- nádory endometria krev MeSH
- nádory vaječníků krev MeSH
- nádory ženských pohlavních orgánů * diagnóza krev MeSH
- regulace genové exprese u nádorů * MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- ženské pohlaví MeSH
- Publikační typ
- práce podpořená grantem MeSH
