Clostridioides (Clostridium) difficile infection (CDI) is the most common causative pathogen of health care-associated gastrointestinal infections; however, due to the overlap of clinical symptoms with those of other causes of acute gastroenteritis, the selection of the most appropriate laboratory test is difficult. From April to October 2018, 640 stool samples requested for CDI testing were examined using the mariPOC CDI and Gastro test (ArcDia), which allows the detection of C. difficile glutamate dehydrogenase (GDH) and toxin A/B, norovirus genogroups GI and GII.4, rotavirus, adenovirus, and Campylobacter spp. In parallel, the C. Diff Quik Chek Complete test (Alere) was used as a routine diagnostic assay, and C. difficile toxigenic culture was used as a reference method. The sensitivity of the mariPOC CDI and Gastro test was comparable to that of C. Diff Quik Chek Complete for the detection of GDH (96.40% [95% confidence interval {CI}, 91.81% to 98.82%] versus 95.68% [95% CI, 90.84 to 98.40%]; P = 1.00) and was higher for the detection of toxin A/B (66.67% [95% CI, 57.36 to 75.11%] versus 55.56% [95% CI, 46.08 to 64.74%]; P = 0.00). The specificity of the mariPOC CDI and Gastro test was lower than that of C. Diff Quik Chek Complete for GDH detection (95.21% [95% CI, 92.96% to 96.91%] versus 97.60% [95% CI, 95.85% to 98.76%]; P = 0.04) and comparable to that of C. Diff Quik Chek Complete for toxin A/B detection (99.24 [95% CI, 98.05% to 99.79%] versus 99.81% [95% CI, 98.94% to 100.0%]; P = 0.37). In 29 cases (4.53%), other causative agents of diarrhea were detected (Campylobacter spp. [n = 17], rotavirus [n = 7], and norovirus genogroup GII.4 [n = 5]).

• MeSH
• bakteriální proteiny genetika   MeSH
• bakteriální toxiny genetika   MeSH
• Clostridioides difficile * enzymologie   genetika   imunologie   MeSH
• diagnostické testy rutinní MeSH
• dítě MeSH
• dospělí MeSH
• enterotoxiny genetika   MeSH
• feces mikrobiologie   MeSH
• glutamátdehydrogenasa MeSH
• imunoanalýza * metody   normy   MeSH
• klostridiové infekce diagnóza   imunologie   mikrobiologie   MeSH
• kojenec MeSH
• lidé středního věku MeSH
• lidé MeSH
• management nemoci MeSH
• mladiství MeSH
• mladý dospělý MeSH
• předškolní dítě MeSH
• pseudomembranózní enterokolitida diagnóza   imunologie   mikrobiologie   MeSH
• senioři nad 80 let MeSH
• senioři MeSH
• senzitivita a specificita MeSH
• Check Tag
• dítě MeSH
• dospělí MeSH
• kojenec MeSH
• lidé středního věku MeSH
• lidé MeSH
• mladiství MeSH
• mladý dospělý MeSH
• mužské pohlaví MeSH
• předškolní dítě MeSH
• senioři nad 80 let MeSH
• senioři MeSH
• ženské pohlaví MeSH
• Publikační typ
• časopisecké články MeSH

Cíl práce: Posouzení dostupnosti a laboratorní diagnostiky infekcí vyvolaných C. difficile v České republice (ČR) včetně spektra používaných testů, jejich využití v kombinacích a odpovídající interpretace modelových nálezů. Materiál a metodika: Data byla získána na základě vyplnění webového dotazníku zástupci 61 státních i soukromých mikrobiologických laboratoří. Dotazník byl zaměřen na používané diagnostické soupravy a kultivační média v rámci diagnostiky CDI (C. difficile infection). Dále byla požadována interpretace laboratorního nálezu GDH (glutamátdehydrogenáza) pozitivní, toxin A/B negativní bez konfirmace nebo s konfirmací podle možnosti laboratoře. Výsledky: V ČR je nejčastěji v prvním diagnostickém kroku u CDI používán test C. diff Quik Chek Complete? (Alere) pro průkaz GDH a toxinů A/B, jak uvedlo 50 laboratoří (82 %). Anaerobní kultivaci provádí 43 laboratoří (70,5 %), z toho 21 laboratoří (48,8 %) používá selektivní agar (Oxoid). Možnost přímého průkazu DNA toxigenních C. difficile má k dispozici 17 laboratoří (27,9 %) a většina z nich (15 laboratoří) používá uzavřený systém Xpert? C. difficile (Cepheid). Diagnostiku založenou pouze na průkazu GDH a toxinů A/B uvedlo 13 laboratoří (21,3 %). Dvě laboratoře (3,3 %) prokazují jen toxiny A/B a tři laboratoře (4,9 %) průkaz toxinů A/B doplňují anaerobní kultivací. Třístupňové schéma: průkaz GDH a toxinů A/B doplněné o anaerobní kultivaci provádí 26 laboratoří (42,6 %). Průkaz GDH, toxinů A/B a PCR nabízejí tři laboratoře (4,9 %). Kompletní diagnostické schéma CDI (průkaz GDH, toxinů, přímý průkaz DNA anaerobní kultivaci) má k dispozici 14 laboratoří (23 %). Závěr: V naší dotazníkové studii jsme identifikovali 24 různých testovacích algoritmů používaných v době studie (duben až červenec 2014) v ČR. Pět laboratoří (8,2 %) nemá ve svém testovacím algoritmu zahrnut citlivý screeningový test, jako je průkaz GDH nebo NAAT (Nucleic Acid Amplification Test). Třináct laboratoří (21,3 %) stanovuje GDH a toxiny a v případě izolované pozitivity jednoho testu nemá k dispozici konfirmační metodu. U GDH pozitivních a toxin A/B negativních vzorků by každý výsledek měl být opatřen doplňujícím komentářem o dalších možnostech laboratorního průkazu CDI a o uváděné senzitivitě použitého testu. V případě, že není možnost konfirmace dalším testem, by po vyloučení jiné příčiny průjmu, měl být výsledek hodnocen jako epidemiologicky i klinicky významný.

Objective: To assess the availability of the laboratory diagnosis of infections caused by C. difficile in the Czech Republic (CR), including the range of tests used, possible combinations, and adequate interpretation of model results. Material and methods: Data were collected through a web questionnaire survey with the participation of representatives of 61 public and private microbiological laboratories. The questionnaire addressed the use of diagnostic test kits and culture media in the diagnosis of C. difficile infection (CDI). In addition, the respondents were asked to interpret a glutamate dehydrogenase (GDH) positive and, at the same time, toxin A/B negative result, without or with laboratory confirmation if available. Results: In the CR, the most commonly used test in the diagnosis of CDI is the C. DIFF Quik Chek Complete? test (Alere) for the detection of GDH and A/B toxins, as reported by 50 (82 %) laboratories. Anaerobic culture is performed by 43 (70.5 %) laboratories, 21 (48.8 %) of which use selective agar (Oxoid). Direct detection of DNA of toxigenic C. difficile is feasible in 17 (27.9 %) laboratories, with most of them (15 laboratories) using the closed system Xpert? C. difficile (Cepheid). The diagnosis based only on the detection of GDH and A/B toxins is used by 13 (21.3 %) laboratories. Two (3.3 %) laboratories detect A/B toxins alone and three (4.9 %) laboratories carry out the detection of A/B toxins followed by anaerobic culture. A three step scheme: detection of GDH and A/B toxins with subsequent anaerobic culture is used by 26 (42.6 %) laboratories. The detection of GDH and A/B toxins along with a PCR assay are provided by three (4.9 %) laboratories. A complete diagnostic scheme for CDI (detection of GDH and A/B toxins, direct detection of DNA, and aerobic culture) is feasible in 14 (23 %) laboratories. Conclusion: This questionnaire survey study identified 24 different testing algorithms to be in use within the study period (April to July 2014) in the CR. Five (8.2 %) laboratories have no highly sensitive screening test such as the detection of GDH or nucleic acid amplification test (NAAT) included in their testing algorithm. Thirteen (21.3 %) laboratories perform the detection of GDH and A/B toxins but have no confirmation method to be used if only one test turns out positive. In the case of GDH positivity and A/B toxin negativity, the result should be provided with a supplementary comment on further possibilities for the laboratory detection of CDI and the claimed sensitivity of the test used. If no confirmation test is available, the result should be considered as epidemiolo-gically and clinically significant, once other possible causes of diarrhoea are ruled out.

• Klíčová slova
• testovací algoritmus, toxiny A/B,
• MeSH
• algoritmy MeSH
• bakteriální toxiny izolace a purifikace   toxicita   MeSH
• Clostridioides difficile * enzymologie   izolace a purifikace   MeSH
• feces mikrobiologie   MeSH
• glutamátdehydrogenasa analýza   MeSH
• imunoenzymatické techniky metody   MeSH
• klinické laboratorní techniky * metody   statistika a číselné údaje   využití   MeSH
• klostridiové infekce * diagnóza   mikrobiologie   MeSH
• kultivační média MeSH
• laboratoře MeSH
• lidé MeSH
• průzkumy a dotazníky MeSH
• reagenční diagnostické soupravy využití   MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• Publikační typ
• hodnotící studie MeSH
• práce podpořená grantem MeSH
• Geografické názvy
• Česká republika MeSH

Cíl práce: Porovnání senzitivity a specificity dvou komerčních testů na stanovení Clostridium difficile GDH (glutamát dehydrogenázy) a toxinů A/B. Materiál a metodiky: Bylo testováno 86 stolic pacientů hospitalizovaných ve FN Motol. GDH a toxiny A/B byly paralelně vyšetřovány dvěma testy: C. difficile Quik Chek Complete?, Techlab,USA) a Liaison? C. difficile GDH a Toxins AαB (DiaSorin USA). Současně byly ze stolic izolovány nukleové kyseliny pomocí UltraClean? Fecal DNA (MoBio Laboratories, USA). Pro metodu PCR byla použita komerční souprava C. difficile Elite MGB? kit (Nanogen, Itálie). Anaerobní kultivace na selektivním médiu pro C. difficile (Oxoid) proběhla u všech vzorků vykazující pozitivitu alespoň jednoho testu. Čisté izoláty byly molekulárně analyzovány ribotypizací. Výsledky: GDH a toxin A/B negativních oběma metodami bylo 36 vzorků (42 %). GDH a toxin pozitivních oběma metodami bylo 20 vzorků (23 %). GDH pozitivních a toxin negativních oběma metodami, ale PCR pozitivních bylo 9 vzorků (10 %). GDH pozitivních a toxin negativních oběma metodami a PCR negativních bylo 11 vzorků (13 %). GDH pozitivní, toxin pozitivní pouze testem Liaison? bylo 6 vzorků (7 %). GDH pozitivní pouze Liaison? byly 4 vzorky (5 %). K selhání kultivace došlo u 11 vzorků (13), z toho u 7 vzorků byl pozitivní test PCR. PCR reakce byla inhibována v 5 případech (6 %). Zachycené ribotypy toxigenní: AI-3, 001, 002, 012,014, 017, 020, 049, 054, 078, 176, 203, 413 a netoxigenní: AI-34, AI-61, 010, 485, 495, 596. Závěr: Stanovení toxinu A/B testem Liaison? vykazuje u námi vyšetřeného souboru o 7 % vyšší senzitivitu. Dvoukrokové uspořádání testů také přináší ekonomickou úsporu, která může být využita např. k zavedení PCR metod do diagnostického algoritmu laboratoře.

Study objective: Comparison of two commercially avail­able tests for the detection of Clostridium difficile Glutamate Dehydrogenase (GDH) and toxins A and B for their sensitivity and specificity. Material and methods: Eighty-six stool samples from patients hospitalised in the Motol University Hospital were analysed. GDH and toxins A and B were assayed in parallel by two tests: C. difficile Quik Chek Complete? (Techlab, USA) and Liaison? C. difficile GDH and Toxins AαB (DiaSorin, USA). From the stool samples, nucleic acids were also isolated using the UltraClean? Fecal DNA kit (MoBio Laboratories, USA). The commercially available C. difficile Elite MGB? kit (Nanogen, Italy) was used for the polymerase chain reaction (PCR). Anaerobic culture on C. difficile selective medium (Oxoid) was performed for all positive samples at least in one test. Pure isolates were characterized by PCR ribotyping. Results: Thirty-six (42%) samples were GDH negative and toxin A/B negative by both tests. Twenty (23%) samples were GDH positive and toxin A/B positive by both tests. Nine (10%) samples were GDH positive and toxin negative by both tests, but were positive by PCR. Eleven (13%) samples that were GDH positive and toxin negative by both tests remained negative by PCR. Six (7%) samples only were GDH positive and toxin positive by the Liaison? test alone. Four (5%) samples were GDH-positive by theLiaison? test alone. Culture failure was observed in 11 (13%) samples, of which seven were positive by PCR. PCR was inhibited in five (6%) samples. The following toxigenic ribotypes: AI-3, 001, 002, 012,014, 017, 020, 049, 054, 078, 176, 203, and 413 and non-toxigenic ribotypes: AI-34, AI-61, 010, 485, 495, and 596 were identified. Conclusion: The Liaison? test had seven percent higher sensitivity for the detection of toxins A/B. The two-step protocol of the tests is also cost-saving. The savings can be used e.g. for incorporating the PCR techniques into the diagnostic algorithm of the laboratory.

• MeSH
• antigeny bakteriální analýza   MeSH
• Clostridioides difficile * enzymologie   chemie   izolace a purifikace   MeSH
• feces mikrobiologie   MeSH
• glutamátdehydrogenasa imunologie   MeSH
• imunoenzymatické techniky metody   využití   MeSH
• klostridiové infekce * diagnóza   genetika   mikrobiologie   MeSH
• lidé MeSH
• polymerázová řetězová reakce MeSH
• senzitivita a specificita MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• Publikační typ
• práce podpořená grantem MeSH
• srovnávací studie MeSH