OBJECTIVES: To describe the prevalence and clinical associations of autoantibodies to a novel autoantigen, eukaryotic initiation factor 3 (eIF3), detected in idiopathic inflammatory myositis. METHODS: Sera or plasma from 678 PM patients were analysed for autoantigen specificity by radio-labelled protein immunoprecipitation (IPP). Samples immunoprecipitating the same novel autoantigens were further analysed by indirect immunofluorescence and IPP using pre-depleted cell extracts. The autoantigen was identified through a combination of IPP and MALDI-TOF mass spectrometry, and confirmed using commercial antibodies and IPP-western blots. Additional samples from patients with DM (668), DM-overlap (80), PM-overlap (191), systemic sclerosis (150), systemic lupus erythematosus (200), Sjogren's syndrome (40), rheumatoid arthritis (50) and healthy controls (150) were serotyped by IPP as disease or healthy controls. RESULTS: IPP revealed a novel pattern in three PM patients (0.44%) that was not found in disease-specific or healthy control sera. Indirect immunofluorescence demonstrated a fine cytoplasmic speckled pattern for all positive patients. Mass spectrometry analysis of the protein complex identified the target autoantigen as eIF3, a cytoplasmic complex with a role in the initiation of translation. Findings were confirmed by IPP-Western blotting. The three anti-eIF3-positive patients had no history of malignancy or interstitial lung disease, and had a favourable response to treatment. CONCLUSION: We report a novel autoantibody in 0.44% of PM patients directed against a cytoplasmic complex of proteins identified as eIF3. Although our findings need further confirmation, anti-eIF3 appears to correlate with a good prognosis and a favourable response to treatment.

• MeSH
• autoantigeny imunologie   MeSH
• autoprotilátky krev   MeSH
• biologické markery krev   MeSH
• dospělí MeSH
• eukaryotický iniciační faktor 3 krev   imunologie   MeSH
• hmotnostní spektrometrie metody   MeSH
• imunoprecipitace metody   MeSH
• imunosupresiva aplikace a dávkování   MeSH
• lidé středního věku MeSH
• lidé MeSH
• polymyozitida farmakoterapie   imunologie   patofyziologie   MeSH
• progrese nemoci * MeSH
• referenční hodnoty MeSH
• retrospektivní studie MeSH
• revmatická horečka imunologie   patofyziologie   MeSH
• senzitivita a specificita MeSH
• Sjögrenův syndrom imunologie   patofyziologie   MeSH
• studie případů a kontrol MeSH
• stupeň závažnosti nemoci MeSH
• systémový lupus erythematodes imunologie   patofyziologie   MeSH
• western blotting metody   MeSH
• Check Tag
• dospělí MeSH
• lidé středního věku MeSH
• lidé MeSH
• mužské pohlaví MeSH
• ženské pohlaví MeSH
• Publikační typ
• časopisecké články MeSH
• práce podpořená grantem MeSH
• srovnávací studie MeSH

BACKGROUND: Spinal muscular atrophy (SMA) is an inherited neuromuscular disease affecting 1 in 8,000 newborns. The majority of patients carry bi-allelic variants in the survival of motor neuron 1 gene (SMN1). SMN1 is located in a duplicated region on chromosome 5q13 that contains Alu elements and is predisposed to genomic rearrangements. Due to the genomic complexity of the SMN region and genetic heterogeneity, approximately 50% of SMA patients remain without genetic diagnosis that is a prerequisite for genetic treatments. In this work we describe the diagnostic odyssey of one SMA patient in whom routine diagnostics identified only a maternal heterozygous SMN1Δ(7-8) deletion. METHODS: We characterized SMN transcripts, assessed SMN protein content in peripheral blood mononuclear cells (PBMC), estimated SMN genes dosage, and mapped genomic rearrangement in the SMN region. RESULTS: We identified an Alu-mediated deletion encompassing exons 2a-5 of SMN1 on the paternal allele and a complete deletion of SMN1 on the maternal allele as the cause of SMA in this patient. CONCLUSION: Alu-mediated rearrangements in SMN1 can escape routine diagnostic testing. Parallel analysis of SMN gene dosage, SMN transcripts, and total SMN protein levels in PBMC can identify genomic rearrangements and should be considered in genetically undefined SMA cases.

• MeSH
• delece genu * MeSH
• elementy Alu MeSH
• genetické testování metody   MeSH
• leukocyty mononukleární metabolismus   MeSH
• lidé MeSH
• messenger RNA genetika   metabolismus   MeSH
• předškolní dítě MeSH
• protein přežití motorických neuronů 1 genetika   metabolismus   MeSH
• sekvenční analýza DNA metody   MeSH
• spinální svalová atrofie diagnóza   genetika   MeSH
• western blotting metody   MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• předškolní dítě MeSH
• ženské pohlaví MeSH
• Publikační typ
• časopisecké články MeSH
• kazuistiky MeSH
• práce podpořená grantem MeSH

BACKGROUND: Chorea-acanthocytosis (ChAc; OMIM #200150) is a rare autosomal recessive condition with onset in early adulthood that is caused by mutations in the vacuolar protein sorting 13A (VPS13A) gene encoding chorein. Several diagnostic genomic DNA (gDNA) sequencing approaches are widely used. However, their limitations appear not to be acknowledged thoroughly enough. METHODS: Clinically, we deployed magnetic resonance imaging, blood smear analysis, and clinical chemistry for the index patient's characterization. The molecular analysis of the index patient next to his parents covered genomic DNA (gDNA) sequencing approaches, RNA/cDNA sequencing, and chorein specific Western blot. RESULTS: We report a 33-year-old male patient without functional protein due to compound heterozygosity for two VPS13A large deletions of 1168 and 1823 base pairs (bp) affecting, respectively, exons 8 and 9, and exon 13. To our knowledge, this represents the first ChAc case with two compound heterozygous large deletions identified so far. Of note, standard genomic DNA (gDNA) Sanger sequencing approaches alone yielded false negative findings. CONCLUSION: Our case demonstrates the need to carry out detection of chorein in patients suspected of having ChAc as a helpful and potentially decisive tool to establish diagnosis. Furthermore, the course of the molecular analysis in this case discloses diagnostic pitfalls in detecting some variations, such as deletions, using only standard genomic DNA (gDNA) Sanger sequencing approaches and exemplifies alternative methods, such as RNA/cDNA sequencing or qRT-PCR analysis, necessary to avoid false negative results.

• MeSH
• choreoakantocytóza diagnóza   genetika   MeSH
• delece genu * MeSH
• dospělí MeSH
• genetické testování metody   MeSH
• heterozygot MeSH
• kvantitativní polymerázová řetězová reakce metody   MeSH
• lidé MeSH
• vezikulární transportní proteiny genetika   metabolismus   MeSH
• western blotting metody   MeSH
• Check Tag
• dospělí MeSH
• lidé MeSH
• mužské pohlaví MeSH
• Publikační typ
• časopisecké články MeSH
• kazuistiky MeSH
• práce podpořená grantem MeSH

Lymeská borrelióza je nejrozšířenější onemocnění přenášené vektory. Hlavním vektorem lymeské borreliózy v Evropě je klíště Ixodes ricinus. Patogenem způsobujícím toto onemocnění je komplex gram-negativních spirochét Borrelia burgdorferi sensu lato. Onemocnění postihuje mnoho orgánů a projevuje se rozmanitými klinickými symptomy od nespecifických chřipkových symptomů a nejčastější kožní manifestace, erythema migrans, po pozdní kožní manifestace, zánět kloubů, neurologické symptomy, meningopolyneuritidua postižení srdce či oka. Diagnostika lymeské borreliózy je založena na sérologickém průkazu protilátek. Molekulární metody jsou pomocné a doplňující. V současné době není vakcína pro humánní účely k dispozici. Jedinou účinnou prevencí je používání repelentů, vhodného oděvu a obuvi při pobytu v přírodě. Důležitá je i prohlídka těla a rychlé odstranění klíštěte a následná dezinfekce místa zákusu.

Lyme borreliosis is the most common vector-borne disease in Europe. The main vector of Lyme borreliosis in Europe is the Ixodes ricinus tick. The causative agent is a gram-negative spirochete of the Borrelia burgdorferi sensu lato complex. The disease affects multiple organs and has a variety of clinical symptoms, from non-specific flu-like symptoms and the most common skin manifestation, erythema migrans, to skin lesions, large joint inflammation, neurological symptoms, meningopolyneuritis, and cardiac and/or eye involvement in the later stages. The diagnosis of Lyme borreliosis is based on serological antibody testing. Molecular methods are complementary to serology. For humans, there is currently no vaccine available against Lyme borreliosis. The only effective prevention is to wear insect repellents and suitable clothing and shoes when being outside. It is also very important to check the entire body for ticks after ending outdoor activity, to remove ticks as soon as found, and to disinfect the bite site.

• MeSH
• Borrelia izolace a purifikace   MeSH
• diagnostické techniky molekulární metody   MeSH
• imunoanalýza metody   MeSH
• infekce bakteriemi rodu Borrelia * diagnóza   imunologie   MeSH
• klinické laboratorní techniky metody   MeSH
• lidé MeSH
• lymeská nemoc * diagnóza   imunologie   MeSH
• sérologické testy metody   MeSH
• western blotting metody   MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH

• MeSH
• biopsie metody   MeSH
• diagnostické techniky a postupy MeSH
• diagnostické techniky molekulární metody   MeSH
• dospělí MeSH
• doxycyklin terapeutické užití   MeSH
• ELISA metody   MeSH
• erytém etiologie   mikrobiologie   MeSH
• fluorescenční protilátková technika nepřímá metody   MeSH
• infekce bakteriemi rodu Borrelia diagnóza   mikrobiologie   MeSH
• kousnutí klíštětem ošetřování   MeSH
• kožní manifestace MeSH
• kultivační techniky metody   MeSH
• lidé MeSH
• lymeská nemoc * diagnóza   patofyziologie   přenos   MeSH
• sérologické testy metody   MeSH
• výsledek terapie MeSH
• western blotting metody   MeSH
• Check Tag
• dospělí MeSH
• lidé MeSH
• ženské pohlaví MeSH
• Publikační typ
• kazuistiky MeSH
• přehledy MeSH

• Klíčová slova
• multiplex, imuno-blot, Luminex,
• MeSH
• antibakteriální látky terapeutické užití   MeSH
• antigeny bakteriální imunologie   MeSH
• Borrelia imunologie   patogenita   MeSH
• dospělí MeSH
• ELISA MeSH
• fluoroimunoanalýza * metody   MeSH
• imunoblotting * MeSH
• imunoglobulin G MeSH
• imunoglobulin M MeSH
• lidé MeSH
• lymeská nemoc * diagnóza   patofyziologie   MeSH
• senioři MeSH
• western blotting * metody   MeSH
• Check Tag
• dospělí MeSH
• lidé MeSH
• mužské pohlaví MeSH
• senioři MeSH
• ženské pohlaví MeSH
• Publikační typ
• kazuistiky MeSH
• srovnávací studie MeSH

The expression on the surface of tumor cells of ligands for the PD-1 inhibitory receptor prevents the antitumor immune response and is considered to be a negative prognostic factor in a variety of solid tumors as well as in hematologic malignancies. To determine if it were possible to analyze PD-L1 with PCR-based methods, we assessed the expression of PD-L1 in primary samples from patients with acute myeloid leukemia, in healthy donors, and in a panel of cell lines, by means of flow cytometry, RT-PCR, and Western blotting. Although the surface density of the protein was not correlated with the amount of expressed full-length mRNA, we found a statistically significant positive correlation between PD-L1 surface density and the ratio of two transcript variants (variant 1/variant 2). Our PCR-based method allows for retrospective examination of PD-L1 surface expression from frozen cDNA samples, without the need for a reference gene. Our results also suggest that variant 2, which is produced by alternative splicing, negatively regulates PD-L1 protein expression on the cell surface. In addition, PD-L1 exposition on the cell surface is clearly associated with a shift of electrophoretic mobility, observed on Western blots. This finding can explain the relatively large variability in PD-L1 apparent molecular weight reported in the literature and offers an alternate means for the assessment of PD-L1 surface expression. Cancer Immunol Res; 4(10); 815-9. ©2016 AACR.

• MeSH
• akutní myeloidní leukemie genetika   imunologie   MeSH
• alternativní sestřih MeSH
• antigeny CD274 biosyntéza   krev   genetika   MeSH
• genetická variace MeSH
• lidé MeSH
• messenger RNA genetika   MeSH
• nádorové biomarkery biosyntéza   krev   genetika   MeSH
• nádorové buňky kultivované MeSH
• nádorové proteiny biosyntéza   krev   genetika   MeSH
• regulace genové exprese u nádorů imunologie   MeSH
• RNA nádorová genetika   MeSH
• western blotting metody   MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• Publikační typ
• časopisecké články MeSH

The study investigated comparatively the effects of active immunization of Cetrorelix and Triptorelin on the follicle development, histological structures, and expressions of FSHR and LHR proteins in the ovary. One hundred and five female mice, 35 days old, and body weight of 26.56 ± 2.89 g, were randomly assigned into Cetrorelix (CET), Triptorelin (TRI) and control groups (CG). Mice in CET-1, CET-2 and CET-3 (n = 15) were subcutaneously injected with 0.1, 0.2 and 0.4 mL Cetrorelix antigen (100 μg/mL) for seven days, respectively. Mice in TRI-1, TRI-2 and TRI-3 were injected with 0.1, 0.2 and 0.4 mL Triptorelin antigen (100 μg/mL) for seven days. Mice in CG (n = 15) were injected with 0.2 mL saline for seven days. Western blotting was utilized to determine the expressions of follicle stimulating hormone receptor (FSHR) and luteinizing hormone receptor (LHR) proteins. ELISA was used to measure the serum FSH and LH concentrations. The ovarian slices were observed under optical microscopy. The results showed that the ovarian weights of CET and TRI groups increased slightly with a maximum increment of 27.02% of CET-1 mice on day 35. Ovarian weights in TRI group increased dose-dependently with a maximum increment of 45.77% in TRI-3 on day 35. The numbers of the primordial follicle (POF), primary follicle (PF), secondary follicle (SF) and mature follicle (MF) of CET and TRI groups increased at different degrees when compared to CG. The granular layer in SF was arranged tightly and zona pellucida (ZP) was thickened. Follicles developed fully. Follicle longitudinal diameter (FLD), follicle transverse diameter (FTD) and follicle wall thickness (FWT) in CET and TRI groups increased as compared to CG. FLD, FTD and FWT of TRI-3 had a larger increment than CG and CET-1 on days 21 and 35. Expression levels of FSHR and LHR proteins in TRI group increased when compared to CG. Expression levels of FSHR and LHR proteins of CET group decreased. Serum FSH of TRI group was slightly higher than the CG and CET group on day 21. On day 35, serum FSH levels of CET-1 and TRI-1 were greater than CG and the rest of the subgroups. Serum FSH levels had no significant differences among all groups. Expression levels of LHR and FSHR proteins in CET group had obvious negative correlations to FLD, FTD and FWT. However, in the TRI group, these correlations were positive. In conclusion, Cetrorelix and Triptorelin immunization could improve ovarian growth, increase the follicle numbers, enhance dose-dependently the FLD, FTD and FWT, and eventually promote the ovary and follicle development. Cetrorelix decreased expression levels of FSHR and LHR proteins in the ovaries of mice. Triptorelin enhanced expression levels of FSHR and LHR proteins. Triptorelin treatment had more obvious effects than Cetrorelix treatment.

• MeSH
• ELISA metody   využití   MeSH
• experimenty na zvířatech MeSH
• financování organizované MeSH
• folikuly stimulující hormon MeSH
• hormon uvolňující gonadotropiny * antagonisté a inhibitory   terapeutické užití   MeSH
• imunizace * metody   trendy   využití   MeSH
• laboratorní zvířata MeSH
• luteinizační hormon genetika   účinky léků   MeSH
• myši MeSH
• ovariální folikul cytologie   imunologie   účinky léků   MeSH
• statistika jako téma MeSH
• studie případů a kontrol MeSH
• triptorelin-pamoát * aplikace a dávkování   terapeutické užití   MeSH
• western blotting metody   využití   MeSH
• Check Tag
• myši MeSH
• ženské pohlaví MeSH

Východiska: Nejčastější pánevní gynekologickou malignitou je endometriální karcinom, kterému obvykle předchází hyperplazie děložní sliznice. Hypoteticky estrogeny inhibují především apoptotické proteiny, zatímco progestiny inhibují silněji anti-apoptotické proteiny než apoptotické. Pod vlivem neoponovaných estrogenů převáží anti-apoptotické faktory, je stimulována endometriální proliferace, která je spojena s vyšším rizikem mutací a atypických změn vyúsťujících v rozvoj endometriálního karcinomu. Apoptóza jeden z nejdůležitějších a nezbytných mechanismů udržujících tkáňovou homeostázu. Apoptóza v endometriu kromě jiného zahrnuje tři skupiny proteinů rodiny Bcl-2: anti-apoptotické proteiny (např. Bcl-2, Bcl-xl), pro-apoptotické proteiny se třemi (např. Bax, Bak) nebo jednou Bcl-2 homologní (BH) doménou (např. Bad, Bid). Tzv. “BH3-only” proteiny, Bad a Bid spouštějí apoptotickou kaskádu oligomerizací proteinů Bak a Bax, které permeabilizují zevní mitochondriální membránu. Na rozdíl od Bidu, který je přímým spouštěčem apoptózy, Bad spouští apoptózu nepřímo. Bad vazbou na anti-apoptotické proteiny rodiny Bcl-2 snižuje práh, při kterém je apoptóza indukována. Jejich vzájemné protichůdné působení nebo synergismus v lidském endometriu však zatím nebyly popsány. Soubor a metoda: U 75 pacientek byly stanoveny hodnoty Bid a Bad pomocí SDS-PAGE a Western blotu se specifickými protilátkami s cílem analyzovat množství Bid a Bad v normálním (NE), hyperplastickém (HE) a kancerózním endometriu (CE). Výsledky: Hladina proteinu Bid v kancerózním endometriu dosahovala pouze 47 % hladiny pozorované v NE a 50 % hodnot v HE. Naopak hladina Bad proteinu v hyperplastickém endometriu dosahovala pouze 40 % hladiny detekované v NE, resp. 36 % hodnot v CE. Závěr: Trendy exprese proteinů Bid a Bad jsou zjevně opačné v HE a CE. Předpokládáme, že buňky hyperplastického endometria si uchovávají dostatečný apoptotický program. Naopak kancerózní buňky vykazují sníženou hladinu přímého apoptotického spouštěče Bid a porušenou apoptózu a endometrium postižené adenokarcinomem jeví snahu zachránit defektní apoptotický program alespoň nepřímo, snížením apoptotického prahu cestou vyšších hladin Bad, který vyvazuje anti-apoptotický protein Bcl-2.

Background: The most frequent pelvic gynaecological malignancy is endometrial cancer, who is commonly proceeded by endometrial hyperplasia. Hypothetically, estrogens inhibit predominantly apoptotic proteins, whilst progestins inhibit more strongly anti-apoptotic proteins than apoptotic ones. Under the influence of unopposed estrogenes, anti-apoptotic factors overbalance, endometrial proliferation is stimulated which is associated with higher risk of mutations and atypical changes resulting in development of endometrial cancer. Apoptosis is one of the most important and necessary mechanism maintaining tissue homeostasis. Endometrial apoptosis involves among others three groups of proteins of the Bcl-2 family: anti-apoptotic proteins (e. g. Bcl-2, Bcl-xL), pro-apoptotic proteins with three (e. g. Bax, Bak) or one (e. g. Bad, Bid) Bcl-2 homologous (BH) domains. So-called BH3-only proteins, Bad and Bid trigger the apoptotic cascade with the oligomerization of Bak and Bax protein, which permeabilize the outer mitochondrial membrane. Unlike Bid, which is the direct apoptotic trigger, Bad triggers apoptosis indirectly. Bad lowers the threshold at which apoptosis is induced, by binding anti-apoptotic Bcl-2 family proteins. However, their mutual counterbalance or synergism in the human endometrium have not been reported yet. Patients and Method: In total of 75 patients, the levels of Bid and Bad were assessed using SDS-PAGE and Western blotting with specific antibodies, with the aim to analyse amount of Bid and Bad proteins in normal (NE), hyperplastic (HE) and cancerous (CE) endometrium. Results: Bid level in CE reached only 47 % and 50 % of this observed in NE and HE. Conversely, Bad level in HE reached only 40 % and 36 % of this observed in NE and CE, respectively. Conclusion: Trends of Bid and Bad protein levels are obviously opposite in HE and CE. We suggest that cells in HE maintain sufficient apoptotic program. On the contrary, cancerous cells (CE) show decreased level of direct apoptotic trigger protein Bid and impaired apoptosis and endometrium affected with adenocarcinoma make efforts to save the disrupted apoptosis program at least indirectly, by lower apoptotic threshold via higher Bad levels sequestrating anti-apoptotic protein Bcl-2.

• MeSH
• apoptóza * fyziologie   genetika   MeSH
• časové faktory MeSH
• dospělí MeSH
• endometrium fyziologie   metabolismus   MeSH
• hyperplazie endometria * genetika   patologie   MeSH
• lidé středního věku MeSH
• lidé MeSH
• membránové proteiny fyziologie   genetika   metabolismus   MeSH
• nádory endometria * genetika   patologie   MeSH
• odběr biologického vzorku MeSH
• protein Bad genetika   metabolismus   MeSH
• protein Bid genetika   metabolismus   MeSH
• senioři MeSH
• western blotting metody   MeSH
• Check Tag
• dospělí MeSH
• lidé středního věku MeSH
• lidé MeSH
• senioři MeSH
• ženské pohlaví MeSH
• Publikační typ
• práce podpořená grantem MeSH

• MeSH
• extracelulárním signálem regulované MAP kinasy * analýza   MeSH
• histologické techniky MeSH
• homocystein * analýza   aplikace a dávkování   škodlivé účinky   MeSH
• hyperhomocysteinemie * chemicky indukované   patofyziologie   MeSH
• infarkt myokardu * etiologie   MeSH
• interpretace statistických dat MeSH
• kardiomyocyty * fyziologie   patologie   MeSH
• matematické výpočty počítačové MeSH
• mitogenem aktivované proteinkinasy kinas * analýza   MeSH
• potkani Wistar MeSH
• srdce fyziologie   patofyziologie   MeSH
• western blotting metody   využití   MeSH
• zvířata MeSH
• Check Tag
• mužské pohlaví MeSH
• zvířata MeSH
• Publikační typ
• práce podpořená grantem MeSH