Cíl práce: U pacientů s klinickými symptomy suspektními pro ehrlichiózu byly prokazovány antiehrlichiové protilátky a sledována přítomnost ehrlichiové nukleové kyseliny v plazmě. Materiál a metody. Sledovaný soubor tvořilo 46 pacientů s anamnézou přisátí klíštěte a s klinickými příznaky kompatibilními s ehrlichiózou. AntiehrUchiové protilátky byly stanovovány nepřímým imunofluorescenčnim testem pomocí komerční soupravy firmy MRL Diagnostics. Ehrhchiová DNA byla detekována nested PCR, cílovou sekvencí byla část ank- genu Anapiasma phagocytophilum. Výsledky. Protilátky proti HGE agens byly prokázány u 28 % sledovaných; 10,5 % pacientů mělo v séru přítomny protilátky reagující s antigenem Ehrlichia chaffeensis. Nukleová kyselina A. phagocytophilum bvla detekována celkem u 11 % vyšetřených. Závěr. Naše populace je poměrně často exponována ehrlichiové infekci. Většina onemocnění probíhá asymptomaticky, je však třeba na tuto diagnózu myslet zejména u imunodeficitních pacientů, u kterých včasné nasazení léčby může zabránit komplikovanému průběhu nemoci.
Purpose of the study. In patients presenting symptoms with a suspicion of ehrlichiosis we determined antiehrlichia antibodies and investigated the presence of Ehrlichia nucleic acid in the plasma. Material and methods: In our group were 46 patients with tick sucks in their case history, who presented symptoms compatible with ehrlichiosis. Anti-Ehrlichia antibodies were determined by an indirect immunofluorescent test with a commercial kit from MRL Diagnostics. EhrUchia DNA was detected using a nested PCR - the target sequence was a part of the antigen Anaplasma phagocytophilum. Results: Antibodies against HGE agents were demonstrated in 28 % of the patients; 10.5 % of the patients had in their serum antibodies reacting to the Ehrlichia chaffeensis antigen. The nucleic acid of A. phagocytophilum was detected in 11 % of the patients. Conclusions: The Czech population is relatively often exposed to Ehrhchia infections. Although most cases are asymptomatic, we should bear in mind this diagnosis, especially in immunodeficient patients, where early treatment may prevent a complicated course of the disease.
- MeSH
- diferenciální diagnóza MeSH
- DNA bakterií analýza MeSH
- ehrlichióza diagnóza epidemiologie imunologie MeSH
- polymerázová řetězová reakce využití MeSH
- protilátky bakteriální analýza krev MeSH
- Publikační typ
- přehledy MeSH
- Geografické názvy
- Česká republika MeSH
- MeSH
- klíšťová encefalitida diagnóza etiologie farmakoterapie MeSH
- lymeská nemoc diagnóza etiologie farmakoterapie MeSH
- meningitida aseptická diagnóza etiologie farmakoterapie MeSH
- meningitida virová diagnóza etiologie farmakoterapie MeSH
- mozkomíšní mok cytologie virologie MeSH
- sérologické testy MeSH
- Publikační typ
- přehledy MeSH
V diagnostice lymeské boreliózy (LB) existuje i v současnosti řada problémů. Naše pracoviště vyvinulo vlastní metodiku přímého průkazu boreliové nukleové kyseliny PCR reakcí, která byla testována v prospektivní studii. Bylo vyšetřováno 32 pacientů s ověřenou diagnózou lymeské neuroboreliózy. Í^NA spirochét byla prokazována v moči a mozkomíšním moku. Moč byla odebírána před léčbou, po léčbě, 3 a 6 měsíců po ukončení hospitalizace, lumbální punkce byla provedena na začátku terapie. PCR reakce probíhala jako dvoustupňová amplifikace(„nesteď' PCR). Byly použity dvě sady primerů: pro chromozomální gen kódující 16S rDNA a pro plazmidový gen kódující protein OspC. Intratékální syntéza protilátek byla stanovována pomocí specifického protilátkového indexu (Alsb). 94 % pacientů mělo prokázanou autochtónni produkci specifických antiboreliových IgG protilátek v mozkoi ^míšním moku. Průkaz DNA spirochét u sledované skupiny v moči byl poměrně vysoký (72 % pozitivních alespoň v jednom vyšetření). Na začátku i na konci léčby byla boreliová nukleová kyselina v moči nalezena u poloviny nemocných, při tříměsíční kontrole byli PCR pozitivní pouze 4 (13 %) a při šestiměsíční již žádný pacient neměl toto vyšetření pozitivní. Z výsledků je zřejmý významný pokles pozitivity PCR během sledování, což může dokládat účinnost antibiotické léčby. Na začátku terapie byla DNA spirochét prokázána v mozkomíšním moku u 44 % pacientů a v moči u 50 %. Tyto výsledky naznačují, že u neuroboreliózy může být moč vhodným materiálem pro diagnostiku i vzhledem k její snadné dostupnosti.
In the diagnosis of Lymeborreliosis (LB) still some problems exist. The authors' department developed their own method of direct evidence of borrelia nucleic acid by the PCR reaction which was tested in a prospective study. 32 patients with a confirmed diagnosis of Lyme neuroborreliosis were examined. Spirochaetale DNA was proved in urine and cerebrospinal fiuid. Urine was collected before and after treatment, 3 and 6 months after termination of hospitalization, lumbar puncture was performed at the onset of therapy. The PCR reaction was implemented as a two-grade amplification („nested" PCR). Two sets of primers were used: For the chromosomal gene coding 16S rDN AN and for the plasmid gene coding protein OspC. Intrathecal synthesis of antibodies was assessed by means of a specific antibody index (Alsb). 94% patients had a confirmed autochthonous production of specific antiborrelia IgG antibodies in the cerebrospinal fluid. Evidence of spirochaetale DNA in the investigated group in urine was relatively high (72% positive in at least one examination). At the onset and at the end of treatment borrelia nuclear acid was found in the urine of half the patients, during the he 3-month check-up only 4 (13%) were PCR positive and during the 6-month check-up no patient was PCR positive. From the results a significant decline of PCR positivity during the investigation is apparent which may be evidence of the effectiveness of antibiotic treatment. At the onset of treatment spirochaetale DNA was detected in the cerebrospinal fluid in 44% patients and in the urine in 50%. These results indicate that in neuroborreliosis urine may be suitable material for the diagnosis, among others, also because it is readily available.
- MeSH
- analýza moči MeSH
- Borrelia burgdorferi patogenita MeSH
- finanční podpora výzkumu jako téma MeSH
- lidé MeSH
- lymská neuroborelióza diagnóza etiologie farmakoterapie MeSH
- nukleové kyseliny krev MeSH
- polymerázová řetězová reakce metody MeSH
- protilátky krev MeSH
- stupeň závažnosti nemoci MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- Publikační typ
- přehledy MeSH
- srovnávací studie MeSH
Cíl práce: Význam polymerázové řetězové reakce v diagnostice lymeské neuroboreliózy a srovnání s průkazem specifických antiboreliových protilátek. Metodika: Na izolaci DNA z moče a mozkomíšního moku byla použita suspenze pryskyřice Chelex 100. DNA z plazmy byla izolována pomocí komerčního setu QlAamp DNA Mini Kit. PCR probíhala jako dvoustupňová amplifikace („nested“ PCR). Byly použity tři sady primerů: pro plazmidový gen kódující OspC protein a pro chromozomální geny kódující 16S rDNA a flagelin. Výsledky: V prospektivní studii bylo vyšetřeno 25 pacientů s diagnózou lymeské neuroboreliózy. DNA spirochéty byla prokázána V mozkomíšním moku u 12 pacientů (48 %), v moči u 13 (52 %) nemocných a v plazmě u 6 (24 %). Specifické antiboreliové protilátky v séru byly detekovány u 20 (80 %) pacientů a autochtonní produkce antiboreliových IgG protilátek v mozkomíšním moku byla zjištěna u 22 vyšetřovaných. Závěr: Na základě získaných výsledků se domníváme, že PCR na průkaz borelií může vhodně doplňovat diagnostiku lymeské neuroboreliózy, ale nemůže nahradit „klasickou“ sérologii.
Aim: The signifikance of polymerase chain reaction in diagnostics of lyme's neuroborreliosis and comparison with the detection of specific anti-borrelia antibodies. Methods: The suspension of resin Chelex 100 was used for the DNA isolation from urine and cerebrospinal fluid. DNA from plasma was isolated by the QlAamp DNA Mini Kit. The nested PCR was used for DNA amplification. All together free sets of primers were used, one set for plasmid gene coding OspC protein, and two other sets for chromosomal genes coding 16S rDNA and flagelin. Results: Twenty-five patiens with the diagnosis of Lyme neuroborreliosis were evaluated in a prospective study. Spirochetal DNA was found in the CSF of 12 patients (48 %), in the urine of 13 pts. (53 %) and in six pts. In blood plasma (24 %). Specific anti-borrelia antibodies were detected in the serum of 20 pts (80 %) and 22 patients showed autochtonous production of antiborrelia IgG antibodies in thein CSF. Conclusion: Our results have shown that PCR detection of borrelia can serve as a useful addendum to diagnostics of lyme neuroborreliosis but cannot replace the „classic“ serology.
