With the goal to investigate biological phenomena at a single-cell level, we designed, synthesized and tested a molecular probe based on Förster resonance energy transfer (FRET) between a highly luminescent quantum dot (QD) as a donor and a fluorophore or fluorescence quencher as an acceptor linked by a specific peptide. In principle, QD luminescence, effectively dissipated in the probe, is switched on after the cleavage of the peptide by a protease and the release of the quencher. We proposed a novel synthesis strategy of a probe. A two-step synthesis consists of: (i) Conjugation of CdTe QDs functionalized by -COOH groups of succinic acid on the nanoparticle surface with the designed specific peptide (GTADVEDTSC) using a ligand-exchange approach; (ii) A fast, high-yield reaction of amine-reactive succinimidyl group on the BHQ-2 quencher with N-terminal of the peptide. This way, any crosslinking between individual nanoparticles and any nonspecific conjugation bonds are excluded. The analysis of the product after the first step proved a high reaction yield and nearly no occurrence of unreacted QDs, a prerequisite of the specificity of our luminescent probe. Its parameters evaluated as Michaelis-Menten description of enzymatic kinetics are similar to products published by other groups. Our research is focused on the fluorescence microscopy analyses of biologically active molecules, such as proteolytic active caspases, playing important roles in cell signaling regulations in normal and diseased states. Consequently, they are attractive targets for clinical diagnosis and medical therapy. The ultimate goal of our work was to synthesize a new QD luminescent probe for a long-time quantitative monitoring of active caspase-3/7 distribution in apoptotic osteoblastic MC3T3-E1 cells treated with camptothecin. As a result of comparison, our synthetized luminescent probe provides longer imaging times of caspases than commercial products. The probe proved the stability of the luminescence signal inside cells for more than 14 days.
Correct determination of the instantaneous level and changes of relevant proteins inside individual cells is essential for correct interpretation and understanding of physiological, diagnostic, and therapeutic events. Thus, single-cell analyses are important for quantification of natural cellular heterogeneity, which cannot be evaluated from averaged data of a cell population measurements. Here, we developed an original highly sensitive and selective instrumentation and methodology based on homogeneous single-step bioluminescence assay to quantify caspases and evaluate their heterogeneity in individual cells. Individual suspended cells are selected under microscope and reliably transferred into the 7 μl detection vials by a micromanipulator. The sensitivity of the method is given by implementation of photomultiplying tube with a cooled photocathode working in the photon counting mode. By optimization of our device and methodology, the limits of detection and quantitation were decreased down to 2.1 and 7.0 fg of recombinant caspase-3, respectively. These masses are lower than average amounts of caspase-3/7 in individual apoptotic and even non-apoptotic cells. As a proof of concept, the content of caspase-3/7 in single treated and untreated HeLa cells was determined to be 154 and 25 fg, respectively. Based on these results, we aim to use the technology for investigations of non-apoptotic functions of caspases.
- MeSH
- apoptóza * MeSH
- HeLa buňky MeSH
- kaspasa 3 MeSH
- kaspasy * MeSH
- lidé MeSH
- technologie MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- Publikační typ
- časopisecké články MeSH
The protein heterogeneity at the single-cell level has been recognized to be vital for an understanding of various life processes during animal development. In addition, the knowledge of accurate quantity of relevant proteins at cellular level is essential for appropriate interpretation of diagnostic and therapeutic results. Some low-copy-number proteins are known to play a crucial role during cell proliferation, differentiation, and also in apoptosis. The fate decision is often based on the concentration of these proteins in the individual cells. This is likely to apply also for caspases, cysteine proteases traditionally associated with cell death via apoptosis but recently being discovered also as important factors in cell proliferation and differentiation. The hypothesis was tested in bone-related cells, where modulation of fate from apoptosis to proliferation/differentiation and vice versa is particularly challenging, e.g., towards anti-osteoporotic treatments and anti-cancer strategies. An ultrasensitive and highly selective method based on bioluminescence photon counting was used to quantify activated caspase-3/7 in order to demonstrate protein-level heterogeneity in individual cells within one population and to associate quantitative measurements with different cell fates (proliferation, differentiation, apoptosis). The results indicate a gradual increase of caspase-3/7 activation from the proliferative status to differentiation (more than three times) and towards apoptosis (more than six times). The findings clearly support one of the putative key mechanisms of non-apoptotic functions of pro-apoptotic caspases based on fine-tuning of their activation levels.
- MeSH
- aktivace enzymů MeSH
- apoptóza MeSH
- buněčná diferenciace MeSH
- buněčné linie MeSH
- kaspasa 3 chemie genetika metabolismus MeSH
- kaspasa 7 chemie genetika metabolismus MeSH
- myši MeSH
- osteoblasty cytologie fyziologie MeSH
- proliferace buněk MeSH
- zvířata MeSH
- Check Tag
- myši MeSH
- zvířata MeSH
- Publikační typ
- časopisecké články MeSH
Ballet training has been reported to positively influence balance ability. It is not entirely clear how improved balance ability manifests under standing conditions with different demands on postural control. The aim of the study was to compare balance of ballet dancers and non-dancers in a unipedal stance under different conditions. Twenty-five professional ballet dancers and twenty-five controls completed four unipedal standing balance tests: firm surface with eyes open and closed; foam mat surface with eyes open; and firm surface with eyes open immediately after performing ten 360° whole-body turns. The centre of pressure (COP) data were obtained with a force platform and the direction-specific standard deviations, velocities, and sample entropy of the COP displacement were computed. A three-way analysis of variance was used to compare groups, genders, and conditions. For standing immediately after performing ten turns, the postural sway parameters were significantly larger in the control group compared to the ballet dancers in both men and women. In this stance condition the values of postural sway and COP velocities in the control group were larger in the men compared to the women. For both genders in the control group all postural sway and COP velocity parameters were larger in standing with eyes closed and standing after performing 10 turns compared to standing with eyes open on both firm and foam surface. In the ballet dancers all COP velocity parameters were larger in standing with eyes closed compared to all other conditions. The results from the present study indicate that professional ballet dancers do not have a better general balance ability than untrained subjects.
- MeSH
- dospělí MeSH
- funkční lateralita fyziologie MeSH
- lidé MeSH
- mladý dospělý MeSH
- postura těla fyziologie MeSH
- posturální rovnováha fyziologie MeSH
- tanec fyziologie MeSH
- Check Tag
- dospělí MeSH
- lidé MeSH
- mladý dospělý MeSH
- mužské pohlaví MeSH
- ženské pohlaví MeSH
- Publikační typ
- časopisecké články MeSH
- práce podpořená grantem MeSH
- srovnávací studie MeSH
Cílem našeho sdělení je doporučení jak vést dokumentaci vyšetření kojenců a batolat a efektu průběhu jejich rehabilitace, které může sloužit nejen pro ošetřujícího fyzioterapeuta, ale také pro jeho kolegy, ošetřujícího pediatra a v neposlední řadě pro rodiče dítěte. Zaměřujeme se na odchylky v motorickém vývoji, jež nás vedou k odhalení příčiny, která je důvodem, proč motorický vývoj dítěte nepostupuje dle očekávání. V textu jsou přehledně uvedeny všechny kategorie vyšetření. Popisujeme jak vyšetřit globální vzory, které jsou nejdůležitější pro posouzení úspěchu terapie. Pro komplexnost vyšetření doporučujeme provádět polohové testy a reflexy. Pro názornost je text doplněn příkladem záznamu vyšetření. V závěru předkládaného textu uvádíme krátkou zmínku o doporučené frekvenci, délce stimulace a obsahu terapie Vojtovou metodou v domácím prostředí.
The aim of our report is to provide guidance on how to manage the infant and toddler examination reports and the effect of their rehabilitation, which can be used not only by the physiotherapist, but also by his/her colleagues, the paediatrician and the parents of the child, too. We focus on variations in motor development that lead us to reveal the cause, which is why the motor development of the child is not progressing as expected. All categories of examination are clearly listed in the text. It is also described in this report how to examine global patterns that are the most important for assessing the success of therapy. For the complexity of examinations, we recommend performing postural responses and reflexes. For clarity, the text is supplemented with some examples of examination records. At the end of the presented text, we briefly mention the frequency, duration of stimulation and content of Vojta therapy in the home environment.
- Klíčová slova
- polohové reakce, Vojtova metoda, vývojová kineziologie,
- MeSH
- fyzikální vyšetření * metody MeSH
- kineziologie aplikovaná MeSH
- kojenec MeSH
- lidé MeSH
- novorozenec MeSH
- reflex MeSH
- reflexní terapie MeSH
- Check Tag
- kojenec MeSH
- lidé MeSH
- novorozenec MeSH
- Publikační typ
- směrnice pro lékařskou praxi MeSH
Vydání první 167 stran : ilustrace ; 23 cm
Kniha se zabývá fungováním trávicího systému, příčinami problémů s trávením a obsahuje rady, jak se vyhnout operacím a užívání drahých léků.; Dr. McDougall svým otevřeným a humorným pohledem na funkce trávicí soustavy člověka láme nejedno kulturní tabu. Vstupte do ordinace dr. McDougalla, když radí dvěma postarším pacientům, jaká opatření ve své životosprávě učinit, aby se jim vrátilo plné zdraví. Dozvíte se, jak nízkotučná rostlinná strava neobsahující cholesterol léčí zácpu, hemoroidy, syndrom podrážděného tračníku a další chronická onemocnění trávicího traktu. John A. McDougall hází rukavici zdravotnictví i farmaceutickému průmyslu, kde zájem o zisk často převažuje nad péčí o zdraví pacienta. Dr. Mc Dougall se již po více než tři desetiletí snaží zveřejňováním těch nejlepších a podložených dat z oblasti výživy a zdraví rozptylovat dezinformace, kterým jsou dnes pacienti i lékaři vystavováni.
- MeSH
- flatulence MeSH
- gastroenterologie MeSH
- halitóza MeSH
- kolitida MeSH
- polypy tlustého střeva MeSH
- trávicí systém MeSH
- Publikační typ
- populární práce MeSH
- příručky MeSH
- Konspekt
- Patologie. Klinická medicína
- NLK Obory
- gastroenterologie
- MeSH
- dítě MeSH
- kojenec MeSH
- lidé MeSH
- neurovývojové poruchy etiologie rehabilitace MeSH
- poruchy motorických dovedností etiologie rehabilitace MeSH
- reflexní terapie * dějiny metody MeSH
- techniky fyzikální terapie dějiny organizace a řízení MeSH
- Check Tag
- dítě MeSH
- kojenec MeSH
- lidé MeSH
- Publikační typ
- biografie MeSH
- historické články MeSH
Dechové obtíže mohou vznikat z různých důvodů. Jednou z možných příčin je změna dechového vzoru způsobená funkčními poruchami muskuloskeletálního systému. Z tohoto důvodu je důležité při onemocněních s přítomností respirační komponenty obtíží vyšetřit vždy i pohybovou složku dýchání. Je-li přítomna její dysfunkce, je nezbytné do komplexní terapie zařadit také techniky respirační fyzioterapie a ostatní fyzioterapeutické koncepty, které mohou napomoci tuto dysfunkci minimalizovat či zcela eliminovat. Nezbytné je vyšetřit pohyblivost hrudního koše během dýchání, posoudit dechový vzor a zhodnotit všechny funkce dýchacích svalů. I porušení pouze jedné z jejich funkcí může způsobit dechové obtíže, které nejsou způsobeny žádným strukturálním onemocněním. U těchto pacientů je pak rehabilitační léčba jedním z klíčových typů terapie.
Breathing disorders such as breathing difficulties, dyspnoea can be caused by various reasons. One possible reason is a change in breathing pattern caused by functional disorders of the musculoskeletal system. For this reason it is important to assess a breathing pattern. If there is a dysfunction of this pattern, it is necessary to include respiratory physiotherapy and other physiotherapeutic concepts in comprehensive treatment to minimize or eliminate these breathing difficulties. It is important to evaluate the mobility of the rib cage during breathing, to assess breathing pattern and to evaluate all functions of the respiratory muscles. Disorder only in one of these functions can lead to respiratory problems, which are not caused by any structural diseases. Rehabilitation treatment is one of the most important types of therapy in these patients.
- Klíčová slova
- dechový vzor, plicní rehabilitace,
- MeSH
- dechová cvičení metody MeSH
- dospělí MeSH
- dýchací svaly * fyziologie MeSH
- dyspnoe * diagnóza etiologie rehabilitace MeSH
- lidé středního věku MeSH
- lidé MeSH
- mechanika dýchání fyziologie MeSH
- plicní ventilace fyziologie MeSH
- postura těla fyziologie MeSH
- spirometrie MeSH
- techniky fyzikální terapie MeSH
- terapie cvičením * metody MeSH
- Check Tag
- dospělí MeSH
- lidé středního věku MeSH
- lidé MeSH
- ženské pohlaví MeSH
- Publikační typ
- kazuistiky MeSH
- práce podpořená grantem MeSH
