The aim of the proposed project is to introduce a molecular-genetic diagnostics of the limb-girdle muscular dystrophy 2A, 2B, 1C and of facioscapulohumeral muscular dystrophy to a clinical practice in the Czech Republic. LGMD2A is associated with mutations of the gene coding for calpain3, LGMD2B with the dysferlin gene and LGMD1C with caveolin3 gene. The above genes will be analysed at mRNA level after preceding immunohistochemical detection of proteins in muscle tissue. FSHMD is associated with subtelomeric deletions at 4q35 locus. Diagnostics will be based on restriction enzyme DNA digestion, pulsed-field gel electrophoresis, Southern blotting and hybridisation with labeled probe. Besides the introduction of the above diagnostics and their application in a set of patients, the project will result in correlation of the result at the level of mRNA or DNA with the phenotypic outcome of the disease.

Cílem projektu je zavedení molekulárně-genetické diagnostiky pletencové svalové dystrofie typu 2A, 2B, 1C a facioskapulohumerální svalové dystrofie do klinické praxe v České republice. LGMD2A je spojena s mutacemi v genu pro kalpain3, LGMD2B s mutacemi vgenu pro dysferlin a LGMD1C s mutacemi v genu pro kaveolin3. Jmenované geny budou sledovány analýzou mRNA po předchozí imunohistochemické detekci proteinů ve svalové tkáni. FSHMD je spojena s delecemi v subtelomerní oblasti chromosomu 4q35. Diagnostikabude založena na restrikčním štěpení DNA, pulsní gelové elektroforéze, Southern blottingu a hybridizaci se značenou sondou. Výsledkem práce na projektu bude, kromě zavedení jmenovaných diagnóz a jejich testování na souboru pacientů, korelace zjištěného nálezu na úrovni mRNA resp. DNA s výsledným fenotypovým projevem onemocnění.

• MeSH
• fenotyp MeSH
• genotyp MeSH
• kalpain genetika   MeSH
• messenger RNA analýza   MeSH
• neurodegenerativní nemoci diagnóza   genetika   MeSH
• neuromuskulární nemoci diagnóza   genetika   MeSH
• svalové proteiny genetika   MeSH

• Konspekt
• Biochemie. Molekulární biologie. Biofyzika
• NLK Obory
• biologie
• neurologie
• ortopedie
• NLK Publikační typ
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR

Limb girdle muscular dystrophy type 2A (LGMD2A) is caused by single or small nucleotide changes widespread along the CAPN3 gene, which encodes the muscle-specific proteolytic enzyme calpain-3. About 356 unique allelic variants of CAPN3 have been identified to date. We performed analysis of the CAPN3 gene in LGMD2A patients at both the mRNA level using reverse transcription-PCR, and at the DNA level using PCR and denaturing high performance liquid chromatography. In four patients, we detected homozygous occurrence of a missense mutation or an in-frame deletion at the mRNA level although the DNA was heterozygous for this mutation in conjunction with a frame-shift mutation. The relationship observed in 12 patients between the quantity of CAPN3 mRNA, determined using real-time PCR, and the genotype leads us to propose that CAPN3 mRNAs which contain frame-shift mutations are degraded by nonsense-mediated mRNA decay. Our results illustrate the importance of DNA analysis for reliable establishment of mutation status, and provide a new insight into the process of mRNA decay in cells of LGMD2A patients.

• MeSH
• delece genu MeSH
• dítě MeSH
• DNA biosyntéza   genetika   MeSH
• dospělí MeSH
• financování organizované MeSH
• genotyp MeSH
• introny genetika   MeSH
• kalpain genetika   MeSH
• kojenec MeSH
• lidé MeSH
• messenger RNA genetika   MeSH
• mladiství MeSH
• nesmyslný kodon genetika   MeSH
• pletencové svalové dystrofie genetika   MeSH
• polymerázová řetězová reakce s reverzní transkripcí MeSH
• posunová mutace genetika   MeSH
• předškolní dítě MeSH
• svalové proteiny genetika   MeSH
• western blotting MeSH
• Check Tag
• dítě MeSH
• dospělí MeSH
• kojenec MeSH
• lidé MeSH
• mladiství MeSH
• mužské pohlaví MeSH
• předškolní dítě MeSH
• ženské pohlaví MeSH

Limb-girdle muscular dystrophy type 2A (LGMD2A) is an autosomal-recessive disorder characterized by selective atrophy and progressive weakness of proximal girdle muscles. LGMD2A, the most prevalent form of LGMD, is caused by mutations in the CAPN3 gene that encodes the skeletal muscle-specific member of the calpain family, calpain-3 (p 94). We examined the histopathologic and molecular pathologic findings in 14 Czech LGMD2A patients. Analysis of the CAPN3 gene was performed at the mRNA level, using reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) and sequencing, and/or DNA level, using PCR and denaturing high-performance liquid chromatography (DHPLC). Our results confirm that mutation 550 delA is the most frequent CAPN3 defect in Czech LGMD2A patients (9 alleles of 28). Furthermore, we established that, in a patient with the 550 delA/R490W genotype, mRNA carrying frameshift mutation 550 delA was not detected, probably due to its degradation by nonsense-mediated mRNA decay. In muscle biopsies of two LGMD2A patients, a neurogenic pattern simulating a neurogenic lesion was observed. Immunoblot analysis revealed the deficiency of p 94 in all genetically confirmed cases of LGMD2A, and secondary dysferlin deficiency was demonstrated on muscle membranes in 6 patients using immunofluorescence. Thus, we find a combination of DNA and mRNA mutational analysis to be useful in the diagnosis of LGMD2A. Moreover, our study expands the spectrum of calpainopathies to cases that simulate a neurogenic lesion in muscle biopsies, and the knowledge of possible secondary deficiencies of muscular proteins also contributes to a diagnosis of LGMD2A. Muscle Nerve, 2006.

• MeSH
• alely MeSH
• dítě MeSH
• dospělí MeSH
• financování organizované MeSH
• fluorescenční protilátková technika MeSH
• genotyp MeSH
• imunohistochemie MeSH
• izoenzymy metabolismus   MeSH
• kalpain metabolismus   MeSH
• kosterní svaly patologie   MeSH
• lidé středního věku MeSH
• lidé MeSH
• membránové proteiny imunologie   metabolismus   MeSH
• messenger RNA biosyntéza   genetika   MeSH
• mladiství MeSH
• mutační analýza DNA MeSH
• NAD metabolismus   MeSH
• pletencové svalové dystrofie genetika   patologie   MeSH
• polymerázová řetězová reakce s reverzní transkripcí MeSH
• předškolní dítě MeSH
• proteiny nervové tkáně metabolismus   MeSH
• svalové proteiny imunologie   metabolismus   MeSH
• vysokoúčinná kapalinová chromatografie MeSH
• Check Tag
• dítě MeSH
• dospělí MeSH
• lidé středního věku MeSH
• lidé MeSH
• mladiství MeSH
• mužské pohlaví MeSH
• předškolní dítě MeSH
• ženské pohlaví MeSH
• Geografické názvy
• Česká republika MeSH

Pletencové svalové dystrofie (limb girdle muscular dystrophy; LGMD) představují klinicky i geneticky heterogenní skupinu progresivních svalových dystrofií. Mezi nejčastěji se vyskytující autosomálně recesivně dědičné LGMD patří calpainopatie (LGMD2A) podmíněné mutacemi v genu, který kóduje svalově specifický proteolytický enzym calpain-3. Autoři prezentují soubor sedmi případů LGMD2A, u nichž byla na základě klinického a/nebo histopatologického vyšetření vyslovena suspekce na LGMD2A a mutační analýza genu pro calpain-3 odhalila zodpovědnou mutaci. Prokázáno bylo celkem osm mutací v genu pro calpain-3. U čtyř pacientů byl zjištěn sekundární deficit exprese dysferlinu. Sekundární deficity dysferrinu nebyly dosud u primárních calpainopatii popsány a pravděpodobně reprezentují dosud nepopsané a neznámé funkční interakce mezi těmito proteiny.

Limb girdle muscular dystrophies (LGMD) represent a clinically and genetically heterogeneous group of progressive muscular dystrophies. Calpainopathy (LGMD2A), the most prevalent type of autosomal recessive limb girdle dystrophies, is caused by mutations in the gene that encodes skeletal muscle specific proteolytic enzyme calpain-3. In this study, the authors present seven cases of LGMD2A. Mutational analysis of calpain-3 gene was performed in suspected cases based on the results of clinical and/or histopathologic examination. Eight different mutations in calpain-3 gene were identified. Secondary deficiency of dysferlin expression was revealed in four patients. Secondary dysferlin deficiencies in primary calpainopathies have not been demonstrated yet and seem to represent unknown and undescribed functional interactions between these proteins.

• MeSH
• biopsie MeSH
• diagnostické techniky molekulární metody   MeSH
• dítě MeSH
• dospělí MeSH
• exprese genu MeSH
• finanční podpora výzkumu jako téma MeSH
• lidé MeSH
• molekulární biologie MeSH
• mutační analýza DNA metody   MeSH
• svalové dystrofie diagnóza   genetika   patologie   MeSH
• western blotting metody   MeSH
• Check Tag
• dítě MeSH
• dospělí MeSH
• lidé MeSH
• Publikační typ
• kazuistiky MeSH

• MeSH
• dítě MeSH
• dospělí MeSH
• fenotyp MeSH
• finanční podpora výzkumu jako téma MeSH
• izoenzymy genetika   MeSH
• kalpain genetika   metabolismus   MeSH
• lidé MeSH
• mladiství MeSH
• mutace MeSH
• mutační analýza DNA MeSH
• svalové proteiny genetika   MeSH
• Check Tag
• dítě MeSH
• dospělí MeSH
• lidé MeSH
• mladiství MeSH