Molekulární analýza zařazená po bok morfologickým vyšetřením plní v moderní onkopatologii 3 hlavní úlohy – diferenciálně diagnostickou, v molekulárním sledování chování nemoci a při stanovení prognostických faktorů. V této práci shrnujeme využití molekulární analýzy u pacientů s lymfomem z buněk pláště (mantle cell lymphoma, MCL). Prokazujeme, že hladina mRNA cyklinu D1 slouží jako spolehlivý molekulární marker pro 98 % pacientů s MCL. Kvantitativní analýza cyklinu D1 je specifickým a citlivým molekulárním nástrojem pro diferenciální diagnózu i pro molekulární sledování onemocnění v kostní dřeni. Sledování dynamiky cyklinu D1 v kostní dřeni navíc odráží dynamiku onemocnění a předpovídá následný klinický průběh nemoci. Molekulární analýzu jsme rovněž využili pro kvantitativní stanovení proliferačních markerů, Ki-67, topoisomerázy II? a TPX2, jako prognosticky významných molekul. S využitím molekulární analýzy lze reprodukovatelně měřit proliferační aktivitu a techniku lze standardizovat napříč pracovišti. Možnost standardizace a reprodukovatelnost vyšetření je nutnou podmínkou pro využití proliferační aktivity v klinických studiích. Ve srovnání s imunofenotypizací lze shrnout, že kvantitativní PCR je spolehlivý, rychlý, reprodukovatelný, citlivý a specifický přístup, který rozšiřuje diagnostické možnosti hematopatologie. Ve srovnání s interfázní FISH je kvantitativní PCR méně technicky a časově náročná a navíc poskytuje přesnou a reprodukovatelnou informaci o hladině exprese vybraných molekul. Kvantitativní PCR je citlivější a lze ji využít i pro detekci malých změn hladiny mRNA. Kvantitativní PCR tak může sloužit pro sledování úbytku nebo nárůstu sledovaného nádorového znaku ve srovnání s předchozím odběrem a stává se tak účinným nástrojem sledování průběhu onemocnění v korelaci s klinickými informacemi.
A molecular analysis has three major roles in modern oncopathology – as an aid in the differential diagnosis, in molecular monitoring of diseases, and in estimation of the potential prognosis. In this report we review the application of the molecular analysis in a group of patients with mantle cell lymphoma (MCL). We demonstrate that detection of the cyclin D1 mRNA level is a molecular marker in 98 % of patients with MCL. Cyclin D1 quantitative monitoring is specific and sensitive for the differential diagnosis and for the molecular monitoring of the disease in the bone marrow. Moreover, the dynamics of cyclin D1 in bone marrow reflects the disease development and it predicts the clinical course. We employed the molecular analysis for a precise quantitative detection of proliferation markers, Ki-67, topoisomerase II?, and TPX2, that are described as effective prognostic factors. Using the molecular approach it is possible to measure the proliferation rate in a reproducible, standard way which is an essential prerequisite for using the proliferation activity as a routine clinical tool. Comparing with immunophenotyping we may conclude that the quantitative PCR-based analysis is a useful, reliable, rapid, reproducible, sensitive and specific method broadening our diagnostic tools in hematopathology. In comparison to interphase FISH in paraffin sections quantitative PCR is less technically demanding and less time-consuming and furthermore it is more sensitive in detecting small changes in the mRNA level. Moreover, quantitative PCR is the only technology which provides precise and reproducible quantitative information about the expression level. Therefore it may be used to demonstrate the decrease or increase of a tumor-specific marker in bone marrow in comparison with a previously aspirated specimen. Thus, it has a powerful potential to monitor the course of the disease in correlation with clinical data.
- Klíčová slova
- kvantitativní PCR, minimální residuální choroba, proliferační markery,
- MeSH
- B-buněčný lymfom diagnóza MeSH
- cyklin D1 diagnostické užití izolace a purifikace MeSH
- diagnostické techniky molekulární metody využití MeSH
- financování organizované MeSH
- lidé MeSH
- lymfom z plášťových buněk diagnóza MeSH
- nádorové biomarkery MeSH
- nehodgkinský lymfom diagnóza MeSH
- polymerázová řetězová reakce s reverzní transkripcí metody využití MeSH
- proliferace buněk MeSH
- reziduální nádor MeSH
- statistika jako téma MeSH
- vyšetřování kostní dřeně MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- Publikační typ
- přehledy MeSH
- Publikační typ
- abstrakt z konference MeSH
- Publikační typ
- abstrakt z konference MeSH
- Publikační typ
- abstrakt z konference MeSH
- Publikační typ
- abstrakt z konference MeSH
- Publikační typ
- abstrakt z konference MeSH
- Publikační typ
- abstrakt z konference MeSH
A clinical course of patients with mantle cell lymphoma (MCL) is aggressive, and the disease is rarely curable. Proliferation rate is the most important prognostic factor. We developed a novel, reliable, rapid, and routinely applicable approach allowing a precise quantitative assessment of three proliferation markers, Ki-67, topoisomerase IIalpha, and TPX2. A total of 95 lymphoma specimens were measured in the study by real-time reverse transcription PCR (RQ-RT-PCR). We tested the reproducibility and accuracy of the assay and correlated the results with the immunohistochemical staining of the corresponding proteins. The results obtained indicated individual variability of the mRNA expression levels, reflecting heterogeneity of the proliferation rate in individual patients. In general, we observed the highest mRNA expression in the group of Burkitt lymphomas and the lowest in patients with reactive lymphadenopathies. We found increased proliferation rate in MCLs with high cyclin D1 mRNA, indicating a quantitative control of the cell cycle. We observed a correlation between mRNA expression level and the immunohistochemical staining of corresponding proteins, which significantly argues for the prognostic significance of the mRNA expression measuring. We confirmed the accuracy of the current assay for a precise quantitative examination of the proliferation activity. Real-time RT-PCR provides a novel approach applicable for clinical trials, and it represents a potent approach allowing to stratify MCL patients for entry into clinical trials according to the expression of the proliferation signature genes in their tumors. This approach may contribute to improved and individualized therapeutic options respecting the individual progression risk of patients with MCL.
- MeSH
- antigen Ki-67 analýza genetika MeSH
- antigeny nádorové analýza genetika MeSH
- cyklin D1 analýza genetika MeSH
- DNA vazebné proteiny analýza genetika MeSH
- DNA-topoisomerasy typu II analýza genetika MeSH
- imunohistochemie MeSH
- jaderné proteiny analýza genetika MeSH
- lidé MeSH
- lymfom z plášťových buněk chemie patologie MeSH
- polymerázová řetězová reakce metody MeSH
- proliferace buněk MeSH
- proteiny asociované s mikrotubuly analýza genetika MeSH
- proteiny buněčného cyklu analýza genetika MeSH
- reprodukovatelnost výsledků MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- Publikační typ
- časopisecké články MeSH
- práce podpořená grantem MeSH
