- MeSH
- fyziologický stres MeSH
- komplikace těhotenství * krev MeSH
- lidé MeSH
- messenger RNA * analýza krev MeSH
- proteiny tepelného šoku * analýza krev MeSH
- těhotenství MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- těhotenství MeSH
- ženské pohlaví MeSH
- Publikační typ
- abstrakt z konference MeSH
- Klíčová slova
- C19MC,
- MeSH
- biologické markery krev MeSH
- hodnocení rizik statistika a číselné údaje MeSH
- hypertenze indukovaná těhotenstvím * diagnóza patofyziologie MeSH
- lidé MeSH
- lidské chromozomy, pár 16 MeSH
- mikro RNA * krev MeSH
- první trimestr těhotenství krev MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- ženské pohlaví MeSH
- Publikační typ
- abstrakt z konference MeSH
- práce podpořená grantem MeSH
Cíl studie: Cílem této studie bylo zjistit, zda je možné detekovat v mateřské cirkulaci expresi genů přítomných na chromozomu 21, které kódují mikroRNA (miR-99a, let-7c, miR-125b-2, miR-155 a miR-802). Následně bylo cílem této studie zhodnotit, zda se budou plazmatické koncentrace a expresní profil chromozom 21 specifických mikroRNA lišit mezi těhotenstvím s euploidním a aneuploidním plodem (Downův syndrom). Typ studie: Pilotní studie. Název a sídlo pracoviště: Oddělení molekulární biologie a patologie buňky, Gynekologicko-porodnická klinika, 3. lékařská fakulta, Univerzita Karlova v Praze. Metodika: Celkem bylo retrospektivně testováno 12 těhotných žen s fyziologickým průběhem gravidity (průměr 16,4 týdne, medián 16. týden), 12 těhotných žen s potvrzeným Downovým syndromem u plodu (průměr 18,2 týdne, medián 18,5 týdne) a 6 zdravých žen bez známek těhotenství. Z 1 ml plazmy byla izolována RNA obohacená o frakci malých RNA (včetně mikroRNA). Následně byla příslušná mikroRNA přepsána do cDNA pomocí specifického stem-loop primeru a detekována pomocí PCR v reálném čase. Výsledky: Komerční systémy umožnily spolehlivě detekovat 4 z 5 extracelulárních chromozom 21 specifických mikroRNA (miR-99a, let-7c, miR-125b-2 a miR-155). Expresní profil extracelulárních miR-99a, miR-125b-2 a miR-155 se významně lišil mezi souborem těhotných a netěhotných žen. Také plazmatické hladiny miR-99a a miR-125b-2 byly významně vyšší u těhotných žen. Plazmatické koncentrace a genová exprese extracelulárních chromozom 21 specifických mikroRNA (miR-99a, let-7c, miR-125b-2 a miR-155) se nelišily mezi souborem těhotných žen s euploidním a aneuploidním plodem. Závěr: Analýza extracelulárních chromozom 21 specifických mikroRNA neumožňuje rozlišení mezi těhotenstvími s euploidním a aneuploidním plodem, a nemá tudíž žádný přínos pro screeningový program.
Objective: Initially, we focused on the detection of extracellular microRNAs in maternal circulation, whose genes are located on human chromosome 21 (miR-99a, let-7c, miR-125b-2, miR-155 and miR-802). Subsequently, we studied if plasmatic concentrations and/or expression profile of extracellular chromosome 21-derived microRNAs would distinguish between pregnancies bearing euploid foetuses and those affected with Down syndrome. Design: Pilot study. Setting: Division of Molecular Biology and Cell Pathology, Department of Gynaecology and Obstetrics, Third Faculty of Medicine, Charles University, Prague. Methods: 12 women with normal course of gestation (mean 16.4 weeks, median 16.0 weeks), 12 pregnancies bearing Down syndrome foetus (mean 18.2 weeks, median 18.5 weeks) and 6 non-pregnant individuals were involved in the retrospective study. RNA enriched for small RNAs (including microRNAs) was isolated from 1ml of plasma sample. Consequently relevant microRNA was transcribed into cDNA using specific stem-loop primer and detected by specific real-time PCR assay. Results: Commercial systems enabled reliable detection of 4 out of 5 extracellular chromosome 21-derived microRNAs (miR-99a, let-7c, miR-125b-2 and miR-155). Expression profile of extracellular miR-99a, miR-125b-2 and miR-155 was significantly higher in the cohort of pregnant women than in non-pregnant individuals. Also plasmatic levels of miR-99a and miR-125b-2 were significantly increased in pregnant women. Unfortunately, the concentrations and gene expression of extracellular chromosome 21-derived microRNAs (miR-99a, let-7c, miR-125b-2 and miR-155) did not differ between the cohorts of pregnancies bearing euploid foetuses and those affected with Down syndrome. Conclusion: Analysis of extracellular chromosome 21-derived microRNAs does not distinguish between pregnancies with euploid and aneuploid foetuses and has no benefit for screening programmes.
- Klíčová slova
- PCR v reálném čase,
- MeSH
- diferenciální diagnóza MeSH
- Downův syndrom * diagnóza genetika MeSH
- exprese genu MeSH
- financování organizované MeSH
- lidé MeSH
- lidské chromozomy, pár 21 * genetika MeSH
- mikro RNA * genetika izolace a purifikace krev MeSH
- nemoci plodu * diagnóza genetika MeSH
- pilotní projekty MeSH
- placenta MeSH
- plod * MeSH
- polymerázová řetězová reakce MeSH
- retrospektivní studie MeSH
- statistika jako téma MeSH
- těhotenství MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- těhotenství MeSH
- ženské pohlaví MeSH
- Publikační typ
- abstrakt z konference MeSH
- Publikační typ
- abstrakt z konference MeSH
Cíl studie: Zaměřili jsme se na detekci mikroRNA v mateřské cirkulaci v průběhu fyziologického těhotenství. Do studie jsme zahrnuli mikroRNA (miR-135b a miR-517a), jejichž přítomnost byla již dříve popsána v mateřské cirkulaci, mikroRNA (miR-518b, miR-517a) se zvýšenou expresí v placentách pacientek v době klinické manifestace preeklampsie a dále všechny mikroRNA, které byly dle databáze miRNAMap placentárně specifické (vykazovaly významnou expresi v placentě a nulovou nebo minimální expresi v ostatních tkáních). Typ studie: Pilotní studie. Název a sídlo pracoviště: Oddělení molekulární biologie a patologie buňky, Gynekologicko-porodnická klinika, 3. lékařská fakulta Univerzity Karlovy, Praha. Metodika: Z 1 ml mateřské plazmy získané ve 12., 16. a 36. gestačním týdnu a 200 µl periferní krve zdravých žen bez známek těhotenství byla izolována RNA obohacená o frakci malých RNA (včetně mikroRNA). Následně byla příslušná mikroRNA přepsána do cDNA pomocí specifického stem-loop primeru a detekována pomocí PCR v reálném čase. Výsledky: Ze souboru testovaných mikroRNA byly vyloučeny mikroRNA, které nebyly detekovány v mateřské cirkulaci v průběhu těhotenství (miR-136, miR-519a) a rovněž mikroRNA, které byly detekovány v periferní krvi zdravých žen bez známek těhotenství (miR-34c, miR-224, miR-512-5p, miR-515-5p, miR-516-5p, miR-518f*, miR-519d, miR-519e). Závěr: Pro další sledování přítomnosti placentárně specifických mikroRNA v mateřské cirkulaci v průběhu gravidity a pro diferenciaci mezi fyziologickým a patologickým průběhem gravidity (preeklampsie, IUGR) ve stejném gestačním stáří bylo na základě těchto výsledků vybráno 6 mikroRNA (miR-517*, miR-518b, miR-520a*, miR-520h, miR-525, miR-526a).
Objective: We focused on the detection of microRNAs in maternal circulation during the course of physiological pregnancy. We tested initially microRNAs (mir-135b and miR-517a) which presence in maternal circulation had been previously demonstrated and those microRNAs (miR-518b and miR-517a) with up-regulated expression profile in placentas derived from pregnancies during the onset of preeclampsia. Further we selected those microRNAs, which were reported to be placenta specific according to the miRNAMap database (these microRNAs were significantly expressed in the placenta and simultaneously showed no or minimal expression in other tissues). Setting: Division of Molecular Biology and Cell Pathology, Department of Gynaecology and Obstetrics, Third Faculty of Medicine, Charles University, Prague. Methods: RNA enriched for small RNAs (including microRNAs) was isolated from 1ml of maternal plasma during the 12th, 16th and 36th week of gestation and 200 µl of peripheral blood derived from healthy non-pregnant women. Consequently relevant microRNA was transcribed into cDNA using specific stem-loop primer and detected by specific real-time PCR assay. Results: From the cohort of tested microRNAs we excluded those ones, which were not detectable in maternal circulation during pregnancy (miR-136 and miR-519a) and/or were demonstrated in peripheral blood of healthy non-pregnant women (miR-34c, miR-224, miR-512-5p, miR-515-5p, miR-516-5p, miR-518f*, miR-519d, miR-519e). Conclusion: On the base of the current study results we finally selected 6 most suitable microRNAs (miR-517*, miR-518b, miR-520a*, miR-520h, miR-525 and miR-526a) for subsequent studies concerning the follow-up of placenta specific microRNAs in maternal circulation during pregnancy and the differentiation between normal and pathologic pregnancies (preeclampsia, IUGR) within the same gestational age.
- Klíčová slova
- real-time PCR, plasma,
- MeSH
- lidé MeSH
- mikro RNA krev MeSH
- placenta metabolismus MeSH
- polymerázová řetězová reakce MeSH
- těhotenství MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- těhotenství MeSH
- ženské pohlaví MeSH
The aims of our research involved to investigate DYS-14 copy number variations in healthy males, to quantify extracellular DNA in maternal circulation in normal versus complicated pregnancies, and to study variations in the DYS-14 copy number in extracellular male fetal DNA. Fifty-five healthy males, 43 uncomplicated male singleton pregnancies (23 sampled at the 16th week and 20 sampled at the 36th week), and 15 pregnancies with placental insufficiency (PI)-related complications (mean 34.1 weeks) were analyzed using real-time PCR with DYS-14 sequence, sex determining region Y (SRY), and beta-globin (GLO) genes used as markers. Increased levels of extracellular DNA were detected in PI-related complications relative to gestational age-matched controls (SRY, p < 0.001; DYS-14, p = 0.007; GLO, p < 0.001). When the mean + 2SD (standard deviation) of controls was used as a cutoff, SRY, DYS-14, and GLO achieved 91.7%, 68.8%, and 94.4% accuracy, respectively, for differentiation between normal and complicated pregnancies. Considerable variations in the DYS-14 copy number in healthy males (mean 52.6) and extracellular DNA were found. A lower DYS-14 copy number was observed in PI-related complications (mean 83.5) compared to uncomplicated pregnancies (16th week: mean 114.2, p = 0.02; 36th week: mean 142.8, p = 0.04). The DYS-14 copy number was higher in extracellular DNA throughout gestation relative to healthy males. We concluded that, regarding interindividual copy number variations, the DYS-14 sequence is not an optimal marker for extracellular fetal DNA quantification for differentiation between normal and complicated pregnancies.
- MeSH
- dítě MeSH
- DNA krev MeSH
- dospělí MeSH
- genová dávka MeSH
- gestační stáří MeSH
- kojenec MeSH
- lidé středního věku MeSH
- lidé MeSH
- lidský chromozom Y genetika MeSH
- matky MeSH
- mladiství MeSH
- mladý dospělý MeSH
- placentární insuficience diagnóza genetika MeSH
- plod MeSH
- předškolní dítě MeSH
- prenatální diagnóza MeSH
- protein oblasti určující pohlaví na chromozomu Y genetika MeSH
- proteiny buněčného cyklu MeSH
- studie případů a kontrol MeSH
- těhotenství MeSH
- výsledek těhotenství MeSH
- Check Tag
- dítě MeSH
- dospělí MeSH
- kojenec MeSH
- lidé středního věku MeSH
- lidé MeSH
- mladiství MeSH
- mladý dospělý MeSH
- mužské pohlaví MeSH
- předškolní dítě MeSH
- těhotenství MeSH
- ženské pohlaví MeSH
- Publikační typ
- práce podpořená grantem MeSH
- srovnávací studie MeSH
