- MeSH
- Y Chromosome genetics MeSH
- Cytogenetic Analysis methods standards MeSH
- Child MeSH
- Gonads surgery pathology MeSH
- Humans MeSH
- Mosaicism MeSH
- Growth Hormone therapeutic use MeSH
- Turner Syndrome diagnosis genetics complications MeSH
- Check Tag
- Child MeSH
- Humans MeSH
- Female MeSH
- Publication type
- Case Reports MeSH
Cíl práce: Detekce pohlaví fetu z koncentrované frakce jaderných erytrocytů (NRBC), cirkulují-cích v periferní krvi gravidních žen.Metodika: Z 13 - 28 ml periferní krve 32 gravidních žen v rozmezí 16. - 40. týdne gravidity bylykoncentrovány jaderné erytrocyty pomocí dvojité magnetické separace buněk (double MACS).NRBC byly koncentrovány pomocí anti-CD71 monoklonální protilátky, značené superparamagne-tickými částicemi (microbeads) po předchozím odstranění mateřských leukocytů pomocí anti-CD14 a anti-CD45 microbeads. Pohlaví fetu bylo určeno na frakci koncentrovaných NRBCmetodou dvoubarevné fluorescenční in situ hybridizace (FISH) s použitím X a Y specifickýchsond. Výsledky neinvazivního vyšetření byly konfirmovány s výsledky klasické cytogenetickéanalýzy.Výsledky: Metoda FISH prokázala přítomnost mužských fetálních buněk ve frakci jaderných eryt-rocytů koncentrovaných z periferní krve těhotných žen v 15/17 případech s potvrzeným mužskýmpohlavím fetu. U 15 testovaných těhotných žen s prokázaným ženským pohlavím fetu byly meto-dou FISH nalezeny ve frakci koncentrovaných jaderných erytrocytů pouze buňky se dvěma Xsignály.Závěr: Jaderné erytrocyty, cirkulující v krevním oběhu gravidních žen mohou být použity jakoalternativní neinvazivní zdroj detekce pohlaví fetu bez rizika falešných pozitivit, ale s rizikemfalešně negativních výsledků (2/17, 12 %). Problém falešné negativity je možno odstranit dokona-lejšími separačními technikami fetálních buněk a zdokonalením metod přípravy skel pro FISH.
Objective: Determination of the sex of the foetus from enriched nuclear red blood cells (NRBC)circulating in maternal blood during pregnancy.Methods: NRBC were enriched from 13 - 28 ml peripheral blood of 32 pregnant women usingdouble MACS procedure. NRBCs were enriched by magnetic activated cell sorting using anti-CD71 (transferrin receptor) monoclonal antibodies. Unwanted leukocytes were depleted usingmonoclonal antibodies against CD14 and CD45. The sex of the foetus was analysed by usingdual-colour FISH with X and Y specific probes. The experimental results obtained from the non-invasive procedure were compared to karyotype obtained from amniocentesis or chorionic villussampling.Results: In 15 out of 17 male foetuses we could identify one X and one Y signal. In another 15pregnant women carrying female foetuses two X signals were observed.Conclusion: NRBC circulating in blood of pregnant women can be used as an alternative sourcefor determination of the sex of the foetus with a risk of false negative results (2/17, 12 %). Theproblem of false negative results can be solved by using more sophisticated methods of enrich-ment and preparedness of the slides for FISH analysis.
Cíl studie: Koncentrace jaderných erytroblastů cirkulujících v periferní krvi gravidních žen proúčely neinvazivní prenatální diagnostiky.Typ studie: Pilotní studie.Název a sídlo pracoviště: II. dětská klinika 2. LF UK, Fakultní nemocnice Motol, Praha, Českárepublika.Metodika: Z 13 - 28 ml periferní krve 78 gravidních žen v rozmezí 13. - 37. týdnu gravidity bylyizolovány mononukleární buňky. Mateřské leukocyty byly odstraněny z frakce mononukleárníchbuněk pomocí anti-CD14 a anti-CD45 monoklonálních protilátek značených superparamagnetic-kými částicemi metodou magnetické separace buněk (MACS) na zařízení VarioMACS. Jadernéerytroblasty byly následně koncentrovány z CD14 - /CD45 - frakce pozitivní selekcí pomocí anti-CD71 monoklonální protilátky na zařízení MiniMACS. Jednotlivé frakce byly analyzovány tříba-revnou analýzou na průtokovém cytometru (FACS).Výsledky: U 68 těhotných žen z 78 testovaných (87 %) byly nalezeny po dvojité magnetické separa-ci buněk (doubleMACS) zahrnující depleci leukocytů a pozitivní selekci jaderné erytroblastyv rozmezí 2x10 5 - 1,02 x 10 6 . Faktor celkového zkoncentrování se pohyboval v rozmezí 4,2 - 526,0(Ć 138,4). Z našeho souboru vyšetřených je patrné, že počet CD71 + jaderných erytroblastů koncen-trovaných metodou doubleMACS je značně individuální. Jaderné erytroblasty cirkulující v krev-ním oběhu gravidních žen bylo možno zkoncentrovat již v 13. týdnu gravidity.Závěr: Naším cílem je vypracovat a standardizovat metodu koncentrace jaderných erytroblastůcirkulujících v periferii gravidních žen a ověřit možnost použití tohoto alternativního zdroje proúčely neinvazivní prenatální diagnostiky.
Objective: Enrichment of nucleated red blood cells (NRBCs) from maternal blood for non-invasiveprenatal diagnosis.Design: Pilot study.Setting: 2 nd Clinic of Paediatrics, University Hospital Motol, Prague, Czech Republic.Methods: Mononuclear cells were isolated from 13 - 28 ml of peripheral maternal blood between 13and 37 weeks of gestation. Leukocytes from maternal peripheral blood were depleted from mono-nuclear cells by treatment with anti-CD14 and anti-CD45 microbeads and high-gradient magneticcell separation (MACS) on VarioMACS. NRBCs were sorted from CD14 - /CD45 - fraction by positiveselection using anti-CD71 microbeads on MiniMACS. All sorting steps were analysed by three-co-lour cytometric analysis with FACScan flow cytometer.Results: In 68 out of 78 pregnant woman (87 %) NRBCs were found in range 2x10 5 - 1,02 x 10 6.NRBC were enriched with an average enrichment rate of 138-fold ranging from 4 - 526 fold. In ourcohort of pregnant woman the number of isolated NRBCs was individual. We identified NRBCsfrom the 13 th week of gestation.Conclusion: The aim of the study is to establish and standardise the method of enrichment ofNRBCs from maternal blood samples and verify the applicability of this alternative source fornon-invasive prenatal diagnosis.
- MeSH
- Biological Transport MeSH
- Adult MeSH
- Erythroblasts blood MeSH
- Humans MeSH
- Maternal-Fetal Exchange MeSH
- Antibodies, Monoclonal diagnostic use MeSH
- Prenatal Diagnosis MeSH
- Flow Cytometry methods instrumentation MeSH
- Pregnancy MeSH
- Check Tag
- Adult MeSH
- Humans MeSH
- Pregnancy MeSH
- Female MeSH
- Publication type
- Review MeSH
- MeSH
- Y Chromosome MeSH
- Diagnostic Techniques and Procedures methods MeSH
- Child MeSH
- Genetic Techniques methods MeSH
- Humans MeSH
- Turner Syndrome diagnosis genetics MeSH
- Check Tag
- Child MeSH
- Humans MeSH
- Female MeSH
- Publication type
- Case Reports MeSH
