Určování krevního systému AB0 stále patří k základním laboratorním úkolům nejen v tzv. forenzních případech. Pokud jsou však analyzované vzorky nějakým způsobem degradované, může při jejich zpracování docházet k nejrůznějším problémům. Od šesti dobrovolníků (třech žen a třech mužů) byly odebrány vzorky srážlivé krve, ze kterých byly následně na sterilní bavlněné čtverečky vytvořeny krevní skvrny. Krevní skvrny byly inkubovány při třech různých teplotách (22 °C, 37 °C, 56 °C) po různá časová období (1 den, 1 týden, 14 dní, 1 měsíc, 3 měsíce, 6 měsíců, 1 rok). Krevní skvrny degradované při 22 °C jsme analyzovali také po 3,5 hodinách inkubace. Pro doplnění jsme se pokoušeli určit krevní skupinu AB0 po tepelné degradaci při vysoké teplotě, a to při 200 °C po dobu 10 min. Pro určení krevního systému AB0 na molekulárně genetické úrovni byla použita polymerázová řetězová reakce k amplifikaci určitého úseku genu pro glykozyltransferázu a ze sérologických metod metoda smíšené aglutinace a vysycovací metoda dle Therkelsena. Vzhledem k pokroku v molekulárně genetických metodách se předpokládalo, že tyto metody vyřeší problém také s různě degradovanými vzorky. V této práci však bylo zjištěno, že klasické sérologické metody mohou být v některých případech úspěšnější.
The AB0 blood group system typing remains one of the basic laboratory tasks in a forensic practice. However, problems arise when the analysed samples are seriously degraded. We took blood samples from six volunteers (three men, three women) and made blood stains on pieces of sterile cotton cloth. Blood stains were incubated at three different temperatures (22 °C, 37 °C, 56 °C) for various periods of time (1 day, 1 week, 14 days, 1 month, 3 months, 6 months, 1 year). For blood stains degraded at 22 °C we also analysed the samples after 3.5 hours of incubation. Moreover, we tried to determine the AB0 blood group system after thermal degradation at high temperature, accurately at 200 °C for 10 min. For the AB0 blood group system typing a Polymerase Chain Reaction method was used to amplify glycosyltransferase gene, when DNA had been isolated from artificially created blood stains, followed by their subsequent artificial thermal degradation. For serological AB0 typing the mixed agglutination and the Therkelsen method were used. The DNA analysis seemed to solve problems with seriously degraded blood stains but we found out that classical serological methods were even better in some cases.
Určování krevního systému AB0 stále patří k základním laboratorním úkolům nejen v tzv. forenzních případech. Pokud jsou však analyzované vzorky nějakým způsobem degradované, může při jejich zpracování docházet k nejrůznějším problémům. Zdálo se, že analýzy DNA jsou schopné tyto problémy vyřešit, avšak i při použití těchto metod může někdy docházet ke komplikacím. Pro určení krevního systému AB0 na molekulárně genetické úrovni byla použita polymerázová řetězová reakce k amplifikaci určitého úseku genu pro glykosyltransferázu. DNA byla izolována z uměle vytvořených krevních stop, jež byly vystaveny umělé tepelné degradaci po různá časová období. U vzorků s genotypem B0 byl v některých případech překvapivě zjištěn aberantní genotyp B00, jehož struktura byla potvrzena sekvenční analýzou. Není nám známá skutečnost, že by byl tento jev již někdy pozorován a popsán. Příčina výskytu tohoto jevu tak zůstává nejasná.
The AB0 blood group system typing remains one of the basic laboratory tasks in a forensic practice. However, problems arise when the analysed samples are seriously degraded. The DNA analysis promised to solve this but an unexpected complication was encountered. For the AB0 blood group system typing a Polymerase Chain Reaction method was used to amplify glycosyltransferase gene, when DNA had been isolated from artificially created blood stains, followed by their subsequent artificial thermal degradation. In the B0 genotype an aberrant genotype was suprisingly found and its structure was confirmed by sequencing. This meant that a newly formed B00 (not the original BO) genotype was present. Such a finding, to our best knowledge, had not been observed yet and we were unable to find any references in the professional literature. The explanation of this result thus remains unclear.
- MeSH
- ABO systém krevních skupin analýza MeSH
- antigeny krevních skupin MeSH
- DNA analýza MeSH
- genotyp MeSH
- lidé MeSH
- polymerázová řetězová reakce metody využití MeSH
- sekvenční analýza využití MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- Publikační typ
- techniky in vitro MeSH
- Publikační typ
- abstrakt z konference MeSH
- MeSH
- geny neurofibromatózy 1 MeSH
- klonování DNA využití MeSH
- lidé MeSH
- neurofibromatóza 1 diagnóza genetika MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- Publikační typ
- srovnávací studie MeSH
- MeSH
- achondroplazie diagnóza genetika krev MeSH
- fibroblasty genetika MeSH
- lidé MeSH
- molekulární biologie MeSH
- mutace MeSH
- prenatální diagnóza MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- Publikační typ
- srovnávací studie MeSH
- MeSH
- achondroplazie diagnóza genetika MeSH
- lidé MeSH
- molekulární biologie MeSH
- prenatální diagnóza MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- MeSH
- DNA MeSH
- mrtvola MeSH
- soudní lékařství MeSH
- Publikační typ
- abstrakt z konference MeSH
