Cíl práce: Detekce pohlaví fetu z koncentrované frakce jaderných erytrocytů (NRBC), cirkulují-cích v periferní krvi gravidních žen.Metodika: Z 13 - 28 ml periferní krve 32 gravidních žen v rozmezí 16. - 40. týdne gravidity bylykoncentrovány jaderné erytrocyty pomocí dvojité magnetické separace buněk (double MACS).NRBC byly koncentrovány pomocí anti-CD71 monoklonální protilátky, značené superparamagne-tickými částicemi (microbeads) po předchozím odstranění mateřských leukocytů pomocí anti-CD14 a anti-CD45 microbeads. Pohlaví fetu bylo určeno na frakci koncentrovaných NRBCmetodou dvoubarevné fluorescenční in situ hybridizace (FISH) s použitím X a Y specifickýchsond. Výsledky neinvazivního vyšetření byly konfirmovány s výsledky klasické cytogenetickéanalýzy.Výsledky: Metoda FISH prokázala přítomnost mužských fetálních buněk ve frakci jaderných eryt-rocytů koncentrovaných z periferní krve těhotných žen v 15/17 případech s potvrzeným mužskýmpohlavím fetu. U 15 testovaných těhotných žen s prokázaným ženským pohlavím fetu byly meto-dou FISH nalezeny ve frakci koncentrovaných jaderných erytrocytů pouze buňky se dvěma Xsignály.Závěr: Jaderné erytrocyty, cirkulující v krevním oběhu gravidních žen mohou být použity jakoalternativní neinvazivní zdroj detekce pohlaví fetu bez rizika falešných pozitivit, ale s rizikemfalešně negativních výsledků (2/17, 12 %). Problém falešné negativity je možno odstranit dokona-lejšími separačními technikami fetálních buněk a zdokonalením metod přípravy skel pro FISH.
Objective: Determination of the sex of the foetus from enriched nuclear red blood cells (NRBC)circulating in maternal blood during pregnancy.Methods: NRBC were enriched from 13 - 28 ml peripheral blood of 32 pregnant women usingdouble MACS procedure. NRBCs were enriched by magnetic activated cell sorting using anti-CD71 (transferrin receptor) monoclonal antibodies. Unwanted leukocytes were depleted usingmonoclonal antibodies against CD14 and CD45. The sex of the foetus was analysed by usingdual-colour FISH with X and Y specific probes. The experimental results obtained from the non-invasive procedure were compared to karyotype obtained from amniocentesis or chorionic villussampling.Results: In 15 out of 17 male foetuses we could identify one X and one Y signal. In another 15pregnant women carrying female foetuses two X signals were observed.Conclusion: NRBC circulating in blood of pregnant women can be used as an alternative sourcefor determination of the sex of the foetus with a risk of false negative results (2/17, 12 %). Theproblem of false negative results can be solved by using more sophisticated methods of enrich-ment and preparedness of the slides for FISH analysis.
- MeSH
- dospělí MeSH
- erytrocyty analýza MeSH
- hybridizace in situ fluorescenční MeSH
- lidé MeSH
- plod MeSH
- prenatální diagnóza MeSH
- separace buněk MeSH
- těhotenství MeSH
- Check Tag
- dospělí MeSH
- lidé MeSH
- těhotenství MeSH
- ženské pohlaví MeSH
- Publikační typ
- přehledy MeSH
- srovnávací studie MeSH
- MeSH
- anemie z nedostatku železa patofyziologie MeSH
- dítě MeSH
- dospělí MeSH
- erytrocyty analýza MeSH
- fluorometrie MeSH
- lidé MeSH
- novorozenec MeSH
- odběr fetální krve MeSH
- protoporfyriny analýza MeSH
- těhotenství MeSH
- zinek analýza MeSH
- Check Tag
- dítě MeSH
- dospělí MeSH
- lidé MeSH
- novorozenec MeSH
- těhotenství MeSH
- ženské pohlaví MeSH
- MeSH
- dárci krve MeSH
- erytrocyty analýza MeSH
- ferritin krev MeSH
- hemoglobiny analýza MeSH
- lidé MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- mužské pohlaví MeSH
- ženské pohlaví MeSH
- MeSH
- biomedicínský výzkum MeSH
- erytrocyty analýza MeSH
- lidé středního věku MeSH
- lidé MeSH
- nedostatek hořčíku MeSH
- osteoporóza etiologie farmakoterapie MeSH
- senioři MeSH
- spektrofotometrie metody MeSH
- Check Tag
- lidé středního věku MeSH
- lidé MeSH
- mužské pohlaví MeSH
- senioři MeSH
- ženské pohlaví MeSH
- Publikační typ
- přehledy MeSH
- MeSH
- diuretika MeSH
- draslík krev MeSH
- erytrocyty analýza účinky léků MeSH
- hypertenze farmakoterapie metabolismus MeSH
- lidé MeSH
- sodík krev MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- MeSH
- anemie diagnóza enzymologie krev MeSH
- dítě MeSH
- erytrocyty analýza enzymologie MeSH
- hemolytické anemie diagnóza enzymologie krev MeSH
- lidé MeSH
- nukleosiddeaminasy analýza krev MeSH
- plynová chromatografie s hmotnostně spektrometrickou detekcí MeSH
- předškolní dítě MeSH
- Check Tag
- dítě MeSH
- lidé MeSH
- předškolní dítě MeSH
- MeSH
- aminokyseliny krev metabolismus MeSH
- antropometrie MeSH
- dítě MeSH
- erytrocyty analýza MeSH
- krev analýza MeSH
- lidé MeSH
- mladiství MeSH
- obezita dietoterapie terapie MeSH
- tělesná hmotnost MeSH
- Check Tag
- dítě MeSH
- lidé MeSH
- mladiství MeSH
- Publikační typ
- srovnávací studie MeSH
