Axon guidance relies on precise translation of extracellular signal gradients into local changes in cytoskeletal dynamics, but the molecular mechanisms regulating dose-dependent responses of growth cones are still poorly understood. Here, we show that during embryonic development in growing axons, a low level of Semaphorin3A stimulation is buffered by the prolyl isomerase Pin1. We demonstrate that Pin1 stabilizes CDK5-phosphorylated CRMP2A, the major isoform of CRMP2 in distal axons. Consequently, Pin1 knockdown or knockout reduces CRMP2A levels specifically in distal axons and inhibits axon growth, which can be fully rescued by Pin1 or CRMP2A expression. Moreover, Pin1 knockdown or knockout increases sensitivity to Sema3A-induced growth cone collapse in vitro and in vivo, leading to developmental abnormalities in axon guidance. These results identify an important isoform-specific function and regulation of CRMP2A in controlling axon growth and uncover Pin1-catalyzed prolyl isomerization as a regulatory mechanism in axon guidance.

• MeSH
• axony metabolismus   MeSH
• dánio pruhované MeSH
• fosforylace MeSH
• imunohistochemie MeSH
• imunoprecipitace MeSH
• lidé MeSH
• nádorové buněčné linie MeSH
• peptidylprolylisomerasa genetika   metabolismus   MeSH
• proteiny dánia pruhovaného genetika   metabolismus   MeSH
• proteiny nervové tkáně genetika   metabolismus   MeSH
• signální transdukce MeSH
• zvířata MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• mužské pohlaví MeSH
• ženské pohlaví MeSH
• zvířata MeSH
• Publikační typ
• časopisecké články MeSH
• práce podpořená grantem MeSH
• Research Support, N.I.H., Extramural MeSH

• Publikační typ
• abstrakt z konference MeSH

Using skeletal muscle homogenates for respirometry has many advantages, but the main challenge is avoiding the damage to outer mitochondrial membrane (OMM) and complex I. By optimising the amount of muscle and careful titration of substrates and inhibitors we developed a new protocol and compared it to isolated mitochondria. We found acceptable damage to OMM (~10-15% increment of oxygen flux after addition of cytochrome c) and to complex I (~70% of electron flux). Homogenate retained ~90% of phosphorylation capacity of isolated mitochondria. The use of fresh homogenate was crucial as mitochondrial function declined rapidly after 2-3h of cold storage.

• MeSH
• buněčné dýchání * MeSH
• buněčné extrakty MeSH
• cytologické techniky metody   MeSH
• dospělí MeSH
• jehlová biopsie MeSH
• kosterní svaly fyziologie   MeSH
• lidé středního věku MeSH
• lidé MeSH
• mitochondriální nemoci diagnóza   MeSH
• mitochondrie fyziologie   MeSH
• odběr biologického vzorku metody   MeSH
• senioři nad 80 let MeSH
• senioři MeSH
• Check Tag
• dospělí MeSH
• lidé středního věku MeSH
• lidé MeSH
• mužské pohlaví MeSH
• senioři nad 80 let MeSH
• senioři MeSH
• ženské pohlaví MeSH
• Publikační typ
• časopisecké články MeSH
• práce podpořená grantem MeSH

• Klíčová slova
• metody stanovení množství a ukládání intramyocelulárních lipidů, diabetologický výzkum, perkutánní biopsie kosterního svalu,
• MeSH
• biomedicínský výzkum metody   trendy   MeSH
• diabetes mellitus 2. typu * diagnóza   etiologie   terapie   MeSH
• financování organizované MeSH
• genomika metody   trendy   MeSH
• imunohistochemie metody   trendy   MeSH
• inzulinová rezistence genetika   imunologie   MeSH
• jehlová biopsie * metody   trendy   využití   MeSH
• kosterní svaly * enzymologie   metabolismus   patofyziologie   MeSH
• lidé MeSH
• proteomika metody   trendy   MeSH
• satelitní buňky kosterního svalu cytologie   imunologie   metabolismus   MeSH
• statistika jako téma MeSH
• svalové mitochondrie metabolismus   mikrobiologie   MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• Publikační typ
• přehledy MeSH

• Publikační typ
• abstrakty MeSH

• Publikační typ
• abstrakty MeSH