The aim of project is to evaluate effectivity of sperm separation technique based on negative selection of dead spermatozoa (and eventually subsequent selection of ubiquitinated spermatozoa using MACS technique. This technique will be applied on sperm samples of males from infertile couples. In suspensions of non-separated and separated spermatozoa, chosen biomarkers will be compared: ubiquitination (SUTI assay), DNA fragmentation (SCSA assay), free radicals production (EPR method); sperm viability (based on mitochondrial membrane potential). In the case of significant improvement of chosen biomarkers in sperm samples after separation, this technique could be implemented into routine protocol for sperm preparation for the purpose of assisted reproduction.

Předmětem řešení projektu je vyhodnocení efektivity metodiky separace mrtvých (a případně i ubikvitinovaných) spermií u mužů z neplodných párů pomocí MACS na základě porovnání vyšetřovaných biomarkerů spermií v ejakulátu a následně ve spermiích separovaných technikou MACS. Porovnávány budou tyto markery: ubikvitinace (metodou SUTI); fragmentace DNA (metodou SCSA); úroveň OS (metodou EPR); viabilita (na základě funkčnosti mitochondrií). Budou-li spermie po selekci vykazovat signifikantně lepší parametrynež celkový ejakulát, bude dalším krokem zavedení metody separace spermií pomocí MACS do rutinní diagnostiky a léčby andrologického faktoru neplodnosti.

• MeSH
• biologické markery MeSH
• elektronová paramagnetická rezonance MeSH
• fragmentace DNA MeSH
• mužská infertilita diagnóza   patofyziologie   terapie   MeSH
• oxidační stres MeSH
• průtoková cytometrie MeSH
• spermie MeSH
• ubikvitinace MeSH

• Konspekt
• Patologie. Klinická medicína
• NLK Obory
• andrologie
• NLK Publikační typ
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR

• MeSH
• adaptorové proteiny signální transdukční antagonisté a inhibitory   MeSH
• chronická myeloidní leukemie farmakoterapie   metabolismus   MeSH
• fosforylace účinky léků   MeSH
• inhibitory proteinkinas farmakologie   terapeutické užití   MeSH
• jaderné proteiny antagonisté a inhibitory   MeSH
• lidé MeSH
• protinádorové látky farmakologie   terapeutické užití   MeSH
• průtoková cytometrie MeSH
• skupina kinas odvozených od src-genu antagonisté a inhibitory   MeSH
• techniky in vitro MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• Publikační typ
• dopisy MeSH
• práce podpořená grantem MeSH

AIMS: Male infertility has been associated with imbalance in the polyunsaturated fatty acids arachidonic acid/docosahexaenoic acid (AA/DHA) ratio. This studyAIMed to assess whether use of the potent antioxidant, lycopene, would affect this imbalance in seminal plasma and to test whether modulation of the AA/DHA ratio correlates with male fertility. METHODS: The study included 44 males from infertile couples who were treated with lycopene for three months before scheduled IVF treatment. The control group was 13 fertile males who were also treated with lycopene for three months. AA and DHA levels were measured in seminal plasma before and after treatment. The outcome of IVF treatment after lycopene use in of males from infertile couples was recorded. RESULTS: The subjects were subdivided into 21 normozoospermic males from couples with idiopathic infertility and 23 males with semen abnormalities. Prior to the treatment with lycopene, the AA/DHA ratios in both subgroups of patients were significantly higher than in fertile controls and improved following treatment with lycopene. Improvement was more marked in the normospermic males. Seven spontaneous pregnancies (16%) occurred before the scheduled IVF treatment and 15 couples (42%) achieved pregnancy after IVF. CONCLUSIONS: Three months of treatment with lycopene led to a significant improvement in the AA/DHA ratio in seminal plasma of males from infertile couples and facilitated the spontaneous as well as IVF conception.

• MeSH
• dospělí MeSH
• karotenoidy terapeutické užití   MeSH
• kyselina arachidonová metabolismus   MeSH
• kyseliny dokosahexaenové metabolismus   MeSH
• lidé MeSH
• mužská infertilita farmakoterapie   metabolismus   MeSH
• oxidační stres účinky léků   MeSH
• protozoální proteiny metabolismus   MeSH
• sperma účinky léků   metabolismus   MeSH
• těhotenství MeSH
• transkripční faktory metabolismus   MeSH
• výsledek terapie MeSH
• Check Tag
• dospělí MeSH
• lidé MeSH
• mužské pohlaví MeSH
• těhotenství MeSH
• ženské pohlaví MeSH
• Publikační typ
• časopisecké články MeSH
• práce podpořená grantem MeSH

AIM: The aim of this prospective study was to find possible relationship between ROS production measured by chemiluminescence and flow cytometry in human semen and sperm DNA damage estimated by Sperm Chromatin Structure Assay. METHODS: Study included 39 men from infertile couples and 23 fertile volunteers who served as a control group. Aliquot of neat semen was used for ROS detection by chemiluminescence. Aliquot of sperm suspension in phosphate buffered saline was used for the detection of ROS by flow cytometry. Another aliquot of sperm suspension was used for SCSA to measure DNA fragmentation index and High DNA stainability. RESULTS: DNA fragmentation index correlated negatively with sperm morphology and motility. High DNA stainability correlated positively with ROS production and negatively with sperm morphology and concentration. Although there were similar trends of rising DNA fragmentation index and ROS production among the three groups of men, the relationship did not reach statistical significance. CONCLUSIONS: Higher values of DNA fragmentation index and high DNA stainability may also reflect developmental and/or environmental problems and not only oxidative stress.

• MeSH
• chromatin MeSH
• dospělí MeSH
• genetické techniky MeSH
• lidé MeSH
• poškození DNA * MeSH
• prospektivní studie MeSH
• reaktivní formy kyslíku metabolismus   MeSH
• sperma metabolismus   MeSH
• spermie * MeSH
• Check Tag
• dospělí MeSH
• lidé MeSH
• mužské pohlaví MeSH
• Publikační typ
• časopisecké články MeSH
• práce podpořená grantem MeSH

• Publikační typ
• abstrakt z konference MeSH

PROBLEM: The aim of present study was to investigate the effects of antioxidant lycopene on soluble receptor for advanced glycation end products (sRAGE) levels in blood and seminal plasma in normospermic males. METHODS: Study included 15 fertile volunteers and 13 normospermic male partners from infertile relationships. The treatment was 12-week administration of 20 mg of lycopene or placebo followed by crossover and treatment for a further 12 weeks. The ELISA kit Quantikine(®) was used to determine sRAGE levels. RESULTS: Lycopene administration decreased sRAGE levels in seminal plasma in fertile volunteers (controls) as well as in male partners in the infertile relationships group (P=0.008 and P=0.012, respectively). No significant effect of lycopene on sRAGE in blood plasma was found in either group, but seminal plasma sRAGE was significantly suppressed. CONCLUSION: Lycopene decreased sRAGE in seminal, but not in blood plasma. This may be because of selective local uptake of lycopene in the male reproductive tract, namely in prostate. Decreased sRAGE may be caused by lycopene suppression of oxidative stressors and explain in part the putative improvement in fertility reported after lycopene treatment.

• MeSH
• biologické markery analýza   MeSH
• karotenoidy farmakologie   MeSH
• lidé MeSH
• prostata chemie   účinky léků   MeSH
• receptory imunologické analýza   MeSH
• sperma chemie   účinky léků   MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• mužské pohlaví MeSH
• Publikační typ
• časopisecké články MeSH
• práce podpořená grantem MeSH
• randomizované kontrolované studie MeSH

Jednou z možností dynamické stabilizace je implantace interspinózních rozpěrek mezi spinózní výběžky bederní páteře. Cílem naší studie bylo ověřit, zda po implantaci interspinózní rozpěrky DIAM (Medtronic, USA) dochází k distrakci prostoru, zda se změní sagitální úhel bederní páteře a zda zůstane zachován pohyb v operovaném segmentu. K operaci byli indikováni nemocní s degenerativním onemocněním lumbosakrální páteře, které se projevovalo axiální bolestí a kořenovými příznaky a příčinou byla hernie disku nebo foraminostenóza. Soubor tvořilo 17 pacientů ve věku 23-66 let (průměrný věk 45,58 let), z toho bylo 7 žen a 10 mužů. Před operací a jeden měsíc po operaci nemocní hodnotili VAS pro axiální a kořenové bolesti, současně byly provedeny dynamické skiagramy lumbosakrální páteře, před operací a jeden týden po operaci statické skiagramy lumbosakrální páteře a CT vyšetření se změřením výšky obou foramen intervertebrale a zadní a přední výšky disku. Implantace rozpěrky DIAM způsobila distrakci operovaného segmentu bederní páteře v řádu desetin milimetru, lordotizaci bederní páteře v průměru o 1,65o a zachovala mobilitu operovaného segmentu s průměrným rozsahem 11,38o. Průměrný VAS pro axiální bolest se zlepšil z 5,7 na 0,47 bodů a pro kořenovou bolest z 5,9 na 0,41 bodů. Byla prokázána nízká ?intra-observer? a "inter-observer" variabilita opakovaných měření výšek pomocí CT. Závěrem autoři konstatují, že rozpěrka DIAM způsobí v průměru jen mírnou distrakci celého operovaného segmentu bederní páteře, a nelze proto spoléhat na efekt nepřímé dekomprese na vystupující nervové kořeny. Implantát může způsobit kyfotizaci páteře, a proto v případech již předoperačně zjevného kyfotického postavení operovaného segmentu je potřeba implantaci interspinózní rozpěrky bedlivě zvážit.

One dynamic stabilization technique is the implantation of an "interspinous spacer" between the spinous processes of the lumbar spine. The objective of this study was to verify whether, following implantation of the DIAM interspinous spacer (Medtronic, USA), there was any space distraction, whether the sagittal angle of the lumbar spine had changed and whether mobility of the operated segment was maintained. Patients suffering from degenerative lumbosacral spine disease due to a hernia of the disc or foraminostenosis and accompanied by axial pain and radicular symptoms, were indicated for the operation. The patient group consisted of 17 patients (7 women and 10 men) in the age range of 23 to 66 (the average age was 45.58). Prior to the operation and one month following the operation the patients assessed VAS for axial and radicular pain and simultaneously underwent a dynamic skiagram of the lumbosacral spine, a static skiagram of the lumbosacral spinal cord prior to the operation and one week after, as well as undergoing a CT examination measuring the height of both intervertebral foramen and the back and front heights of the disc. Implantation of the DIAM spacer caused distraction of the operated segment of the lumbar spine in the order of tenths of a millimeter, caused lordotization of the lumbar spinal cord by 1.65o on average and maintained the mobility of the operated segment with an average range of 11.38 o. The average VAS for axial pain improved from 5.7 to 0.47 points and from 5.9 to 0.41 for radicular pain. The low "intra-observer" and "inter-observer" variability of repeated measurements of the heights was demonstrated by way of a CT. In conclusion, the authors state that the DIAM spacer causes only slight distraction of the entire operated segment of the lumbar spine on average; for this reason it is impossible to rely on the effect of indirect decompression of exiting nerve roots. The implant can cause kyphotization of the spine and therefore, the use of interspinous spacers in those patients demonstrating pre-operative signs of kyphosis of the operated segment must be seriously considered beforehand.

• MeSH
• bolesti zad komplikace   terapie   MeSH
• diagnostické techniky neurologické využití   MeSH
• financování organizované MeSH
• implantace protézy metody   využití   MeSH
• lidé MeSH
• lumbalgie chirurgie   MeSH
• nemoci páteře chirurgie   MeSH
• neurochirurgické výkony metody   využití   MeSH
• počítačová rentgenová tomografie využití   MeSH
• prospektivní studie MeSH
• statistika jako téma metody   MeSH
• zakřivení páteře diagnóza   chirurgie   komplikace   MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH

AIMS: Excessive production of reactive oxygen species (ROS) in semen has been linked to male infertility. Main sources of ROS in male genital tract are immature and/or damaged spermatozoa and a subpopulation of leukocytes known as polymorphonuclear neutrophils (PMN). METHODS: Study group included male partners of infertile couples, 67 normospermic males (group B) and 98 males with sperm abnormalities in one or more parameters (group C), 36 fertile volunteers (group A) served as controls. Sperm parameters were determined according to WHO guidelines. The ROS production was measured by chemiluminiscence in sperm suspension in phosphate buffered saline. RESULTS: All fertile volunteers in the control group had seminal PMN concentrations below 0.5x10(6)/ml. Therefore study subjects, 67 normospermic and 98 men with sperm abnormalities, were further subdivided into two subgroups of PMN concentrations: (1) < 0.5x10(6)/ml and (2) 0.5 to 1.0x10(6)/ml. The ROS production in individuals varied greatly from 1.0x10(2) to 1.7 x10(7) RLU/min per 20x10(6) spermatozoa. The ROS production in both subgroups of normospermic men and the subgroup (1) of men with sperm abnormalities was not different from the ROS production in fertile controls. The ROS production in the subgroup (2) with sperm abnormalities was significantly higher than in controls (P = 0.00004). CONCLUSIONS: Our findings suggest that the contribution of PMN to the ROS production in semen is negligible only up to a concentration of 0.5x10(6)/ml. This suggests that the current WHO Guidelines threshold of 1.0x10(6) PMN per ml of semen is too high and might be re-evaluated.

• MeSH
• financování organizované MeSH
• lidé MeSH
• mužská infertilita patofyziologie   MeSH
• neutrofily metabolismus   MeSH
• reaktivní formy kyslíku analýza   MeSH
• sperma cytologie   chemie   MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• mužské pohlaví MeSH

Cíl práce: Chemiluminiscenční metodou s luminolem vyhodnotit produkci reaktivních kyslíkových částic (ROS) v nativním ejakulátu a v suspenzi spermií a posoudit korelaci těchto dvou metod. Typ studie: Prospektivní laboratorní studie. Název a sídlo pracoviště: Porodnicko-gynekologická klinika LF UP a FN Olomouc. Metodika: Soubor tvořilo 17 fertilních dobrovolníků, 19 normospermiků z infertilních párů, kde byl prokázán ženský faktor neplodnosti a 15 normospermiků s idiopatickou neplodností páru. Produkce ROS byla vyšetřena stejnou chemiluminiscenční metodou s luminolem současně ve vzorcích nativního ejakulátu i vzorcích suspenze promytých spermií. Výsledky: Hodnoty ROS v nativním ejakulátu byly řádově nižší než v suspenzi spermií. Nebyly zjištěny statisticky významné rozdíly mezi produkcí ROS u fertilních dobrovolníků a mužů z neplodných párů. Byla potvrzena korelace mezi log ROS v nativním ejakulátu a v suspenzi promytých spermií v PBS u všech tří skupin (FV r=0,85, p=1,5×10-5; NM r=0,76, p<2×10-4; NMI r=0,75, p<1,5×10-3). Závěr: Měření ROS v nativním ejakulátu je jednodušší, rychlejší a lépe odráží aktuální úroveň oxidačního stresu než měření v suspenzi spermií. Zavedení této metody měření ROS může doplnit algoritmus diagnostiky i léčby mužské neplodnosti a být vodítkem pro antioxidační či antibiotickou léčbu.

Objective: To determine Reactive Oxygen Species (ROS) production in neat semen and spermatozoa suspension using chemiluminescence and to examine correlation between both methods. Subject: Prospective laboratory study. Setting: Department of Obstetric and Gynecology, University Hospital, Olomouc. Methods: The study included fertile volunteers (FV, n = 17), men from infertile couples (NM, n = 19) and men with idiopathic infertility (NMI, n = 15). ROS levels were determined by the same method in neat and washed semen samples. Results: The ROS production in neat semen was lower than that in spermatozoa suspension. There was no significant diference in ROS production between volunteers and males from infertile couples. There was a significant correlation between log ROS in neat semen and in spermatozoa suspension in studied groups (FV r=0.85, p=1.5×10-5; NM r=0.76, p<2×10-4; NMI r=0.75, p<1.5×10-3). Conclusions: Measurement of ROS in neat semen is simpler, faster and better reflecting the actual level of oxidative stress than the same measurement in spermatozoa suspension. The implementation of this method can complement the algorithm of diagnostics and treatment of male infertility and be helpful in selection of patients for antioxidant or antibiotic treatment.

• Klíčová slova
• reaktivní kyslíkové částice, nativní ejakulát, chemiluminescence,
• MeSH
• analýza spermatu MeSH
• financování organizované MeSH
• lidé MeSH
• luminiscenční měření MeSH
• mužská infertilita diagnóza   MeSH
• oxidační stres MeSH
• prospektivní studie MeSH
• spermie sekrece   MeSH
• statistika jako téma MeSH
• suspenze MeSH
• volné radikály analýza   MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• mužské pohlaví MeSH

Cíl: Sledování incidence bakteriospermie, rodového a druhového zastoupení mikroorganizmů a produkce reaktivních kyslíkových částic (ROS) v ejakulátu mužů z neplodných párů v porovnání s fertilními dobrovolníky. Soubor pacientů a metody. Muži z párů léčených pro neplodnost byli rozděleni podle WHO parametrů spermiogramu na normospermiky (skupina A, n = 65) a muže s abnormálním spermiogramem (skupina B, n = 116). Kontrolní skupinu tvořilo 44 dobrovolníků s prokázanou fertilitou (skupina C). Aerobní kultivací bylo prokázáno rodové a druhové zastoupení přítomných mikroorganizmů. Produkce ROS byla vyšetřována chemiluminiscenční metodou. Statistické hodnocení bylo provedeno pomocí Mann -Whitneyova testu. Výsledky. Incidence bakteriospermie mezi skupinami A, B a C (69 %, 74 % a 66 % ) nebyla statisticky významná, převládaly kmeny StaphyJococcus species a Streptococcus species. Signifikantní rozdíl však jsme pozorovali mezi výskytem kmenů Escheríchia coli mezi muži z neplodných párů (skupina A = 11,1 %, B = 9,3 %) a muži fertilními (skupina C = 3,2 %). Neprokázali jsme statisticky signifikantní rozdíly mezi produkcí ROS v kultivačně pozitivních a kultivačně negativních ejakulátech v žádné ze sledovaných skupin. Závěr. Ve všech sledovaných skupinách byla incidence bakteriospermie stejně jako produkce ROS v ejakulátu obdobná. V druhovém zastoupení převažovaly kmeny Staphylococcus species a Streptococcus species ve všech skupinách. Ve vzorcích z neplodných párů bya prokázána signifikantně vyšší přítomnost kmenů Escheríchia coh oproti kontrolní skupině. V produkci ROS nebyly prokázány rozdíly mezi kultivačně pozitivními a negativními vzorky v jednodivých skupinách.

Objective: To estimate the incidence of bacteriospermia, the representation of specific micro-organisms and the generation of reactive oxygen species (ROS) in the semen of males from infertile couples in comparison with the semen of fertile volunteers. Material and Methods: Males from infertile couples were divided according to WHO criteria of their spermiogram results into those with normospermia (Group A, n = 65) and those with semen abnormalities (Group B, n = 116). The control group consisted of 44 fertile volunteers (Group C, n = 44). Aerobic culture was performed to ascertain the genus and species of the present microorganisms. ROS production was estimated by the chemiluminescence method. Statistical analysis was performed using the Mann-Whitney test. Results: The incidence of positive cultures in the semen between Groups A, B and C (69 %, 74 % and 66 %, respectively) did not differ significantly, with Staphylococcus and Streptococcus species being most frequently identified. A significant difference was found only between the occurence of microorganism Escherichia coU in the groups A, B and C (11.1 %, 9.3 % and 3.2 %). There were no statistically significant differences between ROS production in semen with positive or negative culture in any of the studied groups. Conclusions: In all the studied groups, the incidence of bacteriospermia as well as ROS production in the semen were similar. Staphylococcus and Streptococcus species were found in all groups. A significantly higher frequency of Escherichia coh in the semen samples of males from infertile couples in comparison with those from fertile volunteers was observed. No differences in ROS production in semen samples with positive and negative culture results were found in any of the studied groups.

• MeSH
• aerobní bakterie izolace a purifikace   klasifikace   MeSH
• analýza spermatu klasifikace   MeSH
• C-reaktivní protein analýza   MeSH
• financování organizované MeSH
• incidence MeSH
• lidé MeSH
• mužská infertilita diagnóza   etiologie   mikrobiologie   MeSH
• reaktivní formy kyslíku analýza   MeSH
• sperma chemie   mikrobiologie   MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• mužské pohlaví MeSH