Nefrotický syndrom je velmi často přítomen u glomerulonefritid, u diabetické nefropatie a u obezitou indukované glomerulopatie. Všechny tyto stavy spojuje patologie na úrovni podocytu. Podocyt je ústřední buňkou renálního parenchymu a zajišťuje filtraci krve jak strukturálně, tak aktivně regulací vlastností filtrační membrány. V posledních letech je zkoumán stále intenzivněji. Kromě jeho patofyziologie se zkoumají i možnosti jeho diagnostického využití. Přítomnost podocytů v moči koreluje s aktivitou renálních nemocí ústících v nefrotický syndrom. Přitom nefrotický syndrom rezistentní na léčbu hrozí nejen postupnou progresí choroby do konečného selhání ledvin, ale sám o sobě může organizmus vážně poškodit metabolickým rozvratem. Nejvíce prostudované metabolické poruchy u nefrotického syndromu jsou změny v lipidovém spektru, v koagulačních faktorech a změny v renin-angiotenzin-aldosteronovém systému. Ve všech případech se jedná o kompenzační mechanizmy snažící se zajistit homeostázu, která je při protrahovaném průběhu nefrotického syndromu často fatální postižení na podkladě akcelerace rozvoje aterosklerotických změn a následných komplikací. Slibný terapeutický zásah do tohoto stavu představují statiny, především jejich pleiotropní účinky, které by bylo vhodné prozkoumat hlouběji a více využít terapeuticky.
Nephrotic syndrome frequently accompanies glomerulnephritides, including diabetic nephropathy and obestity-induced glomerulopathy, which are marked by pathology at the level of the podocyte. Podocytes are the main cellular component of renal parenchyme facilitating the filtration of blood not only through the inherent structural component they provide the glomerular filtration membrane itself, but also through their active role in regulating it. In the last few years, the pathophysiology of podocytes has been studied extensively as well as their role as a potential diagnostic tool. In light of this, it has been determined that the presence of podocytes in urine correlates to a state of active renal disease leading to nephrotic sydnrome, the consequences of which can be severe. That is to say, in the setting of nephrotic sydrom resistant to treatment, the threat of progressive disease culminating in in end-stage renal failure is high as well the damaging systemic effects of the resulting metabolic disruption. Dyslipidemia, coagulopathy and changes to the renin-angiotensin-aldosterone system are the most studied metabolic disturbances associated with nephrotic syndrome. In all of thesesituations, compensatory mechanisms to restore homeostasis are engaged, which can become dangerously damaged in wake of the accelerateddevelopment of atherosclerotic changes and their ensuing complications, due to a prolonged state of disease. Statins--especially their pleiotropic effects-offer promising therapeautic potential, which needs to be further explored and utilized more extensively in the clinical setting.
- Klíčová slova
- podokalyxin,
- MeSH
- arterioskleróza patologie MeSH
- dyslipidemie patologie MeSH
- lidé MeSH
- nefrotický syndrom * diagnóza patologie terapie MeSH
- podocyty MeSH
- statiny terapeutické užití MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
Abstract: Glomerulonephritides together create a heterogenic group of supposedly immunologically mediated diseases of glomeruli. They still belong among the most frequent causes of chronic renal failure. Detection of podocytes in urine might serve as an important marker of glomerulonephritides activity. The aim of this study was to develop a novel flow cytometric method for the detection of podocyte fragments and podocytes in urine and assess its possible use in clinical practice. We placed emphasis on the improvement of pre-analytic phase. To suppress the autofluorescence of the background, blocking solutions and magnetic separation were used. An additional surface marker CD10 (nephrilysin) was used together with routinely used podocalyxin (PCX) in order to achieve better identification of podocytes. Based on the surface marker expression, three different element types were identified in the urine samples: PCX+/CD10+ elements (EL) (supposedly podocytes), PCX-/CD10+ EL (supposedly parietal epithelial cells) and PCX+ EL. We examined a total of 36 patients who underwent renal biopsy (non-glomerular nephropathy, MGN, FSGS, IgAN, AAV and MPGN) and 27 healthy controls. Negative results were found in non-glomerular nephropathy and in MGN. In patients with FSGS and IgAN, the levels of urine elements were slightly increased. The highest levels of all elements were found in AAV and MPGN. Our first results suggest that flow cytometric detection may distinguish between glomerular and nonglomerular diseases and that the levels of urine elements might correlate with the degree of glomerular destruction.
- MeSH
- analýza moči MeSH
- biopsie MeSH
- chronické selhání ledvin moč MeSH
- dospělí MeSH
- glomerulonefritida moč MeSH
- lidé středního věku MeSH
- lidé MeSH
- nefrologie metody přístrojové vybavení MeSH
- neprilysin biosyntéza moč MeSH
- průtoková cytometrie MeSH
- regulace genové exprese MeSH
- sialoglykoproteiny biosyntéza moč MeSH
- studie případů a kontrol MeSH
- Check Tag
- dospělí MeSH
- lidé středního věku MeSH
- lidé MeSH
- mužské pohlaví MeSH
- ženské pohlaví MeSH
- Publikační typ
- práce podpořená grantem MeSH
Podocytes form an outer aspect of the glomerular capillary wall and play a decisive role in its permeability for macromolecules. The main podocyte surface antigen podocalyxin, a highly electronegative sialoglycoprotein, prevents the podocyte foot processes from collapsing. Podocyte damage in glomerular disease is supposed to be accompanied by podocyte detachment, and shed podocytes and their fragments (marked by podocalyxin) may be identified in the urine. Using anti-podocalyxin monoclonal antibody, PCX+EL were counted by FACS in 38 patients with various types of active glomerulonephritis, 15 patients with chronic glomerulonephritis in long-term remission and 44 healthy controls. Urinary levels of PCX+EL were significantly higher in patients with active glomerulonephritis compared to patients with chronic glomerulonephritis in longterm remission (93 +/- 100 vs. 6.3 +/- 3.2/microl of urine, P < 0.000001) and healthy controls (4.4 +/- 2.6/microl of urine, P < 0.000001 compared to active glomerulonephritis, n.s. compared to chronic glomerulonephritis in longterm remission). These preliminary data suggest the potential of this simple method to monitor the activity of glomerular disease. Further prospective studies of larger cohorts of patients with individual glomerular diseases are clearly warranted.
- MeSH
- analýza moči metody MeSH
- časové faktory MeSH
- dospělí MeSH
- glomerulonefritida moč patologie terapie MeSH
- indukce remise MeSH
- lidé středního věku MeSH
- lidé MeSH
- podocyty patologie MeSH
- průtoková cytometrie MeSH
- senioři MeSH
- sialoglykoproteiny MeSH
- studie případů a kontrol MeSH
- Check Tag
- dospělí MeSH
- lidé středního věku MeSH
- lidé MeSH
- mužské pohlaví MeSH
- senioři MeSH
- ženské pohlaví MeSH
Podocyty tvoří zevní vrstvu glomerulární kapilární stěny a rozhodujícím způsobem ovlivňují její permeabilitu pro bílkoviny. Poškození podocytů u glomerulárních nemocí - glomerulonefritid (GN) může být doprovázeno odloučením podocytů, jejich výběžků a fragmentů. ím anti-podocalyxinové monoklonální protilátky jsme stanovovali pomocí průtokové cytometrie všechny elementy derivované od podocytů v moči. Elementy jsme pojmenovali podocalyxin pozitivní elementy (PCX+el). Použití polystyrénových kalibračních kuliček nám umožnilo stanovovat i absolutní počty těchto elementů, ne pouze relativní zastoupení. Na vyšetření byla odebírána ranní moč, ke které se ihned přidával prezervační roztok, čímž jsme získali možnost analyzovat vzorek až s 72hod latencí místo běžné 1hod u čerstvé moči. Celkově jsme vyšetřili 38 pacientů s různě aktivní glomerulonefritidou, 15 v dlouhodobé remisi a 44 zdravých kontrol. Močové hodnoty PCX+el byly signifikantně vyšší u pacientů s aktivní glomerulonefritidou v porovnání s pacienty v dlouhodobé remisi a zdravou kontrolou (aktivní GN 93 ± 100 PCX+el/pl, remise 6,3 ± 32 PCX+el/pl, zdravá kontrola 4,4+2.6/ PCX+el/pl, p < 0,000001). Tato pilotní data ukazují, že tato relativně jednoduchá metoda může být potenciálně laboratorní alternativou k opakované renální biopsii k zjištění a monitoraci aktivity některých typů glomerulárního onemocnění.
Podocytes form an outer aspect of the glomerular capillary wall and play a decisive role in its permeability for macromolecules. Main podocyte surface antigen podocalyxin, a highly electronegative sialoglycoprotein, prevents the podocyte foot processes from collapsing. Podocyte damage in glomerular disease is supposed to be accompanied by podocyte detachment and shed podocytes and their fragments (marked by podocalyxin) may be identified in the urine. Using anti-podocalyxin monoclonal antibody podocalyxin positive elements (PCX+EL) were counted by flow cytometry (FACS) in 38 patients with various types of active glomerulonephritis, 15 patients with chronic glomerulonephritis in long-term remission and 44 healthy controls. Urinary levels of PCX+EL were significantly higher in patients with active glomerulonephritis compared to patients with chronic glomerulonephri - tis in long-term remission (93±100 vs. 6,3±3,2/ μ l of urine, p < 0.000001) and healthy controls (4,4±2,6/ μ l of urine, p < 0.000001 compared to active glomerulonephritis, n.s. compared to chronic glomerulonephritis in long-term remission). These preliminary data suggest the potential of this simple method to monitor the activity of glomerular disease. Further prospective studies of larger cohorts of patients with individual glomerular diseases are clearly warranted.
Našim cílem bylo vyvinout a zavést metodu stanovení podocytů do klinické praxe a využít ji pro monitoring aktivity poškození gl omerulů u různých glomerulopatií. Vycházeli jsme z publikovaných prací popisujících přítomnost živých podocytů a jejich fragmentů v moč i u různých forem postižení glomerulu. Předpokládali jsme, že jejich přítomno st bude přímo úměrná aktivitě procesu a nebude pouze korelátem proteinu- rie, která přetrvává u chronických forem i bez aktivity alteračn ího procesu. Podařilo se nám vyvinout vlastní metodu stanovován í podocalyxin pozitivních elementů v moči pomocí průtokové cytometrie a ověřit ji v pilotní studii. Celkem jsme prozatím vyšetřili 44 jedinců . Z nich 23 mělo aktivní onemocnění, 14 pacientů bylo v remisi a 7 bylo zdravých kontrol. Výsledek jsme přepočítávali na objem moči. Předběžné v ýsledky jsou v souladu s naším předpokladem, že množství podocytů a jejich frag mentů v moči odpovídá aktivitě procesu poškozování glomerulů.
The aim of our work was to develop a method for evaluation of the podocytes in urine, to put it into the clinical practice and to use it for moni- toring of the glomerular damage activity in various glomerulonephrities. We resulted from the published works describing a pres ence of vital podocytes and their fragments in urine of the patients suffering from some kind of glomerular disease. We supposed that the num ber of podocytal elements in urine was directly proportional to the activity of the disease and would not only correlate with the proteinuria le vel (which may persist in chronic form without activity of the alteration process). We have managed to develop our own method for the evaluation of th e podocalyxin positive elements in urine using flow cytometry and proved it in the pilot study. Up to now we examined urine samples from 44 p ts: 23 with active disease, 14 pts in remission and 7 healthy controls. The results were counted over the urine volume. The introductory re sults accord with our supposal that the number of podocytes and their fragments in urine correlate with the activity of the glomerular alteration process.
- MeSH
- antigeny povrchové izolace a purifikace moč MeSH
- biologické markery moč MeSH
- ELISA využití MeSH
- glomerulonefritida diagnóza mikrobiologie MeSH
- lidé MeSH
- pilotní projekty MeSH
- podocyty fyziologie imunologie MeSH
- průtoková cytometrie metody využití MeSH
- sialoglykoproteiny izolace a purifikace MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
