BACKGROUND: The determination of branched chain amino acids [BCAA; valine (Val), leucine (Leu), isoleucine (Ile)], alpha-keto acids derived from BCAA [BCKA; alpha-ketoisovaleric acid (KIV), alpha-ketoisocaproic acid (KIC), alpha-ketomethylvaleric acid (KMV)], methionine (Met), phenylalanine (Phe) and tyrosine (Tyr) is currently the most reliable approach for the diagnosis of maple syrup urine disease (MSUD), hypermethioninemia, phenylketonuria (PKU) and tyrosinemia. The aim of this study was to develop rapid and simple HPLC methods for measurement of BCAA, Met, Phe, Tyr and BCKA in plasma and dried blood samples. METHODS: Samples of peripheral venous blood with EDTA as anticoagulant were obtained from a group of healthy blood donors (n=70, 35 females, 27-41 years of age and 35 males, 28-43 years of age). Blood-spot samples from a group of newborns (n=80, 40 girls and 40 boys 3-5 days of age) were collected onto #903 Specimen Collection Paper and allowed to dry for at least 24 h before analysis. Prior to separation, the amino acids (AA) were derivatized with o-phthaldialdehyde (OPA) and BCKA with o-phenylenediamine (OPD). Reverse phase column chromatography (LiChroCart 125-4 Purospher RP-18e, 5 microm) was used for separation and fluorescence detection used to monitoring of effluent. For AA analysis, 25 mmol/L sodium hydrogenphosphate-methanol (90:10, v/v), pH 6.5+/-0.1 was used as mobile phase A and 100% methanol was used as mobile phase B. Measurement of BCKA used a mixture of methanol and deionized water (55:45, v/v) as mobile phase A and mobile phase B consisted of 100% methanol. RESULTS: Analytical performance of these methods was satisfactory for the determination of all AA and BCKA. The intra-assay and inter-assay coefficients of variation were below 10% and recovery ranged from 90%-110%. CONCLUSIONS: We have developed simple, rapid and selective HPLC methods with fluorescence detection for the determination of BCAA, Met, Phe, Tyr and BCKA in plasma and dried blood samples.
- MeSH
- dospělí MeSH
- fenylalanin krev MeSH
- fluorescence MeSH
- ketokyseliny krev MeSH
- krevní skvrny MeSH
- lidé MeSH
- methionin krev MeSH
- novorozenec MeSH
- referenční hodnoty MeSH
- tyrosin krev MeSH
- větvené aminokyseliny krev MeSH
- vrozené poruchy metabolismu aminokyselin krev MeSH
- vysokoúčinná kapalinová chromatografie metody MeSH
- Check Tag
- dospělí MeSH
- lidé MeSH
- mužské pohlaví MeSH
- novorozenec MeSH
- ženské pohlaví MeSH
Závěrečná zpráva o řešení grantu Interní grantové agentury MZ ČR
Přeruš. str. : il. ; 32 cm
Studium inhibičního účinku nových analogů nukleotidů na nádorové buňky. XXX XXX XXX
- Konspekt
- Patologie. Klinická medicína
- NLK Obory
- onkologie
- biochemie
- NLK Publikační typ
- závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR
- MeSH
- adenin * analogy a deriváty farmakologie MeSH
- homologní transplantace MeSH
- hybridizace genetická MeSH
- imunosupresiva * farmakologie MeSH
- krysa rodu rattus MeSH
- modely nemocí na zvířatech MeSH
- nemoc štěpu proti hostiteli * etiologie prevence a kontrola MeSH
- organofosfonáty * MeSH
- potkani inbrední BN MeSH
- potkani inbrední SHR MeSH
- transplantace kostní dřeně imunologie škodlivé účinky MeSH
- zvířata MeSH
- Check Tag
- krysa rodu rattus MeSH
- mužské pohlaví MeSH
- ženské pohlaví MeSH
- zvířata MeSH
- Publikační typ
- práce podpořená grantem MeSH
- MeSH
- genetické markery MeSH
- krysa rodu rattus genetika MeSH
- lidé MeSH
- lidské chromozomy MeSH
- mapování chromozomů MeSH
- myši genetika MeSH
- sekvenční homologie nukleových kyselin MeSH
- zvířata MeSH
- Check Tag
- krysa rodu rattus genetika MeSH
- lidé MeSH
- myši genetika MeSH
- zvířata MeSH
- Publikační typ
- srovnávací studie MeSH
