Cílem práce bylo porovnání dosažených výsledků molekulárních metod využívaných v Oddělení bakteriálních vzdušných nákaz (OBVN) CEM SZÚ pro účely detekce, identifikace a typizace bakterií Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae a Haemophilus influenzae v klinických (kultivačně negativních) vzorcích při podezření na uvedená invazivní bakteriální onemocnění. OBVN nabízí využití molekulární diagnostiky uvedených bakteriálních původců menigitid a sepsí z klinických vzorků již řadu let. Spektrum metod se však změnilo. Z původní polymerázové řetězové reakce s elektroforetickým vyhodnocením (seminested PCR) k real-time polymerázové řetězové reakci (rt-PCR). Bylo provedeno souběžné srovnání obou metodik na 56 klinických vzorcích, které ukazuje lepší výsledky rt-PCR oproti seminested PCR.

The aim was to compare the outcomes of molecular methods used in the Unit for Airborne Bacterial Infections (UABI) for the detection, identification, and typing of the bacteria Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae, and Haemophilus influenzae from clinical culture-negative specimens of patients with suspected invasive bacterial infection. The UABI has been providing molecular diagnosis of the above-mentioned bacterial pathogens from clinical specimens of patients with meningitis or sepsis for years. However, the range of the methods used has changed: the UABI switched from the polymerase chain reaction (PCR) with reading of the results by elecrophoresis (seminested PCR) to the real-time polymerase chain reaction (rt-PCR). The outcomes of the two methods were compared using 56 clinical specimens, with rt-PCR proving superior to seminested PCR

• Klíčová slova
• seminested PCR, rt-PCR,
• MeSH
• diagnostické techniky molekulární metody   statistika a číselné údaje   MeSH
• Haemophilus influenzae izolace a purifikace   MeSH
• kvantitativní polymerázová řetězová reakce statistika a číselné údaje   MeSH
• Neisseria meningitidis izolace a purifikace   MeSH
• polymerázová řetězová reakce * metody   statistika a číselné údaje   MeSH
• Streptococcus pneumoniae izolace a purifikace   MeSH
• techniky typizace bakterií metody   statistika a číselné údaje   MeSH
• Publikační typ
• srovnávací studie MeSH

x

• MeSH
• časové faktory MeSH
• exprese genu MeSH
• fraktury femuru farmakoterapie   radiografie   MeSH
• hojení fraktur * účinky léků   MeSH
• kostní morfogenetické proteiny genetika   terapeutické užití   MeSH
• kostní morfogenetický protein 2 * aplikace a dávkování   genetika   MeSH
• kostní morfogenetický protein 4 genetika   MeSH
• kostní morfogenetický protein 6 genetika   MeSH
• kostní morfogenetický protein 7 genetika   MeSH
• kostní svalek MeSH
• krysa rodu rattus MeSH
• kvantitativní polymerázová řetězová reakce statistika a číselné údaje   MeSH
• messenger RNA MeSH
• mezibuněčné signální peptidy a proteiny genetika   MeSH
• osteogeneze účinky léků   MeSH
• potkani Sprague-Dawley MeSH
• regenerace kostí genetika   účinky léků   MeSH
• rekombinantní proteiny MeSH
• stanovení celkové genové exprese MeSH
• TNF-alfa genetika   MeSH
• uzavřené fraktury MeSH
• výzkum MeSH
• zvířata MeSH
• Check Tag
• krysa rodu rattus MeSH
• ženské pohlaví MeSH
• zvířata MeSH

Cíle: Porovnat čtyři postpandemické chřipkové sezony 2009–2013 ve Fakultní nemocnici Hradec Králové a porovnat používané rychlé testy detekce antigenů (RAT) s výsledky z real time RT-PCR. Materiál a metody: V období mezi listopadem 2009 a červnem 2013 bylo vyšetřeno celkem 3845 vzorků od pacientů s respiračními obtížemi za použití rychlých testů detekce antigenů (Influenza A/B 2 Panel Test (GECKO? Pharma, Germany), Rapid VIDITEST Influenza A + B Card (VIDIA?, Czech Republic) a BinaxNOW Influenza A&B Test (ALERE?, USA) nebo za použití real time RT-PCR (RTR InfA/H1N1 Detection Set (Roche?), RealStar? Influenza S a T RT-PCR Kit 3.0 (Altona?, Germany). Výsledky: Celkem 1059 vzorků bylo současně vyšetřeno metodou RAT a real time RT-PCR. Celková senzitivita a specificita použitých RAT v porovnání s PCR byla 32,2 % a 98,1 % pro chřipku A a 17,6 % a 99,4 % pro chřipku B. Vyšší senzitivita RAT byla zaznamenána u dětí (66,6 %) než u dospělých (14,3–40,0 %). V prvních třech postpandemických sezonách byl zaznamenán pozvolný pokles pozitivních vzorků z 23,5 % v sezoně 2009–2010 k 3,3 % v sezoně 2011–2012. Ale v poslední chřipkové sezoně 2012–2013 došlo k rapidnímu nárůstu pozitivních záchytů na 31,5 %, navíc s vysokým procentem podílu pandemického kmene chřipky A/H1N1/2009 (79,6 %). Závěr: Naše výsledky potvrdily nedostatečnou senzitivitu všech používaných testů rychlé detekce antigen, a potvrdily tak nezbytnost rutinního používání konfirmačních metod, jako např. real time RT-PCR. Taktéž byl v naší studii zaznamenán rapidní nárůst případů chřipky v poslední sezoně, který nebyl doposud nijak vysvětlen.

Purpose: The evaluation of four post-pandemic influenza seasons 2009–2013 in the Faculty hospital Hradec Králové and comparison of used rapid antigen tests (RATs) with real time RT-PCR. Material and methods: Between November 2009 and June 2013 were examined 3845 samples from patients with respiratory tract infections by RATs (Influenza A/B 2 Panel Test (GECKO? Pharma, Germany), Rapid VIDITEST Influenza A+B Card (VIDIA?, Czech Republic) and BinaxNOW Influenza A&B Test (ALERE?, USA) or real time RT-PCR (RTR InfA/H1N1 Detection Set (Roche?), RealStar? Influenza S and T RT-PCR Kit 3.0 (Altona ?, Germany). Results: A totally 1059 samples were examined simultaneously by RAT and real time RT-PCR. The overall sensitivity and specificity of RATs compared with real time RT-PCR were 32,2 % and 98,1 % for influenza A and 17,6 % and 99,4 % for influenza B. Higher sensitivity of RATs were in children (66,6 %) compared with adults (14,3 – 40,0 %). In the first three post-pandemic seasons were continuously decrease of positive samples from 23,5 % in season 2009–2010 to 3,3% in season 2011–2012, but in season 2012–2013 were rapidly in­crease of positive results, to 31,5%, with high share of influenza ­A/H1N1/2009 (79,6%). Conclusion: Our results shown insufficient sensitivity of all used RATs and necessity of having other confirmatory test, like RT-PCR. It was also shown unexplained increase of case and influenza severity in season 2012–2013.

• Klíčová slova
• immunochromatografická assays,
• MeSH
• chřipka lidská * diagnóza   virologie   MeSH
• chromatografie afinitní * metody   statistika a číselné údaje   MeSH
• dítě MeSH
• dospělí MeSH
• infekce dýchací soustavy diagnóza   etiologie   MeSH
• kojenec MeSH
• kvantitativní polymerázová řetězová reakce * metody   statistika a číselné údaje   MeSH
• lidé středního věku MeSH
• lidé MeSH
• mladiství MeSH
• mladý dospělý MeSH
• předškolní dítě MeSH
• retrospektivní studie MeSH
• roční období MeSH
• senioři nad 80 let MeSH
• senioři MeSH
• senzitivita a specificita MeSH
• věkové faktory MeSH
• věkové rozložení MeSH
• virus chřipky A, podtyp H1N1 imunologie   izolace a purifikace   MeSH
• virus chřipky A imunologie   izolace a purifikace   MeSH
• virus chřipky B imunologie   izolace a purifikace   MeSH
• Check Tag
• dítě MeSH
• dospělí MeSH
• kojenec MeSH
• lidé středního věku MeSH
• lidé MeSH
• mladiství MeSH
• mladý dospělý MeSH
• mužské pohlaví MeSH
• předškolní dítě MeSH
• senioři nad 80 let MeSH
• senioři MeSH
• ženské pohlaví MeSH
• Publikační typ
• srovnávací studie MeSH

Cílem předkládané práce je shrnutí výsledků průkazu Bordetella pertussis (BP) a Bordetella parapertussis (BPP) metodou real-time PCR a sérologickými testy. V letech 2008–2010 bylo vyšetřeno na možnou přítomnost onemocnění pertusí 73 pacientů Oddělení klinické imunologie a alergologie Centra imunologie a mikrobiologie ZÚ Ústí nad Labem, vybraných podle kritérií WHO a ECDC, tj. s perzistencí kašle déle než 2 týdny. Přímý průkaz DNA BP a BPP byl proveden soupravou pro real-time PCR z výplachu nosohltanu. Sérologická odpověď byla sledována metodou přímé aglutinace celkových protilátek a stanovením protilátek proti pertusovému toxinu ve třídách IgG, IgA a IgM metodou ELISA. Do souboru pacientů s prokázanou infekcí BP a/nebo BPP bylo zařazeno 42 jedinců rozdělených do dvou skupin: průkaz onemocnění metodou PCR (skupina A, n = 19), průkaz onemocnění pouze sérologickými metodami (skupina B, n = 23), přičemž pacienti ze skupiny A v 10 případech (52,6 %) vykazovali rovněž pozitivitu protilátkové odpovědi. Z našich výsledků je zřejmé, že pertuse by neměla být opomíjenou infekcí. Věříme, že zvýšená informovanost zdravotnické veřejnosti spolu se zkvalitněním laboratorních postupů pomohou v budoucnu odhalit vyšší procento případů nakažených touto, pro řadu lékařů stále ještě vnímanou jako „dětskou“, infekcí.

The goal of this study is to summarize the results of the detection of Bordetella pertussis (BP) and Bordetella parapertussis (BPP) by a real-time polymerase chain reaction (RT-PCR) assay and serological methods. In 2008–2010, 73 patients of the Department of Clinical Immunology and Allergology of the Centre for Immunology and Microbiology, Public Health Institute in Ústí nad Labem were screened for pertussis. They were selected according to the WHO and ECDC criteria, i. e. they presented with a persistent cough lasting more than two weeks. Direct detection of BP and BPP DNA from nasopharyngeal wash specimens was performed using a RT PCR assay. The serological responses were evaluated by a direct agglutination test for the detection of total antibodies and by enzyme-linked immunosobent assay (ELISA) for the detection of IgG, IgA, and IgM antibodies against pertussis toxin. Forty-two patients were positive for BP and/or BPP, 19 of them by RT-PCR (group A) and 23 by serology (group B). Ten group A patients (52.6%) were also positive by serology. Our results show that pertussis needs to be a consideration in persistent cough. We believe that increased awareness of the medical community, along with improved laboratory tests will result in increased detection of pertussis that is still considered by many physicians as a childhood infection.

• Klíčová slova
• černý kašel, perzistující kašel,
• MeSH
• aglutinační testy * statistika a číselné údaje   MeSH
• Bordetella parapertussis imunologie   izolace a purifikace   MeSH
• Bordetella pertussis imunologie   izolace a purifikace   MeSH
• dítě MeSH
• dospělí MeSH
• ELISA statistika a číselné údaje   MeSH
• kašel etiologie   MeSH
• kvantitativní polymerázová řetězová reakce * statistika a číselné údaje   MeSH
• lidé středního věku MeSH
• lidé MeSH
• mladiství MeSH
• následné studie MeSH
• pertuse * diagnóza   epidemiologie   imunologie   MeSH
• pertusový toxin imunologie   MeSH
• předškolní dítě MeSH
• reagenční diagnostické soupravy MeSH
• rodina MeSH
• senioři MeSH
• senzitivita a specificita MeSH
• zdraví rodiny MeSH
• Check Tag
• dítě MeSH
• dospělí MeSH
• lidé středního věku MeSH
• lidé MeSH
• mladiství MeSH
• mužské pohlaví MeSH
• předškolní dítě MeSH
• senioři MeSH
• ženské pohlaví MeSH