Immunophenotypingof acute leukemias (AL) is an important part of their diagnostics. This projekct will be a continuation of a complex research of childhood AL, which combines the analysis of immunophenotype with molecular-genetic and other studies. We will test molecules that have been identified in microchip studies to correlate with molecular genetics and risk of relapse or secondary malignancy. Furthermore, we will study the regulation of CEA family molecule expression, expecially of CD66c. We will provide reference immunophenotyping in all Czech children with AL. Simultaneously, we will study the suppression of non-malignit hematopoiesis during chemothetapy. We will study the importance of minimal residual disease by 4color cytometry and we will compare the results in 2 international studies. One of these studies will be coordinated by our lab.

Imunofenotypizace leukemií je důležitou součástí jejich diagnostiky. Projekt je pokračováním komplexního výzkumu dětskéleukémie, který kombinuje analýzu imunofenotypu se studiemi molekulárně geneckými a dalšími. Testovat molekuly, u nichž mikročipové studie nalezly korelaci s genetickými změnami nebo s rizikem relapsu. Dále budeme studovat regulaci exprese rodiny molekul CEA, zejména CCD66c, která významně koreluje s molekulárně genetickými změnami. Budeme provádět referenční imunofenotypová vyšetření všech dětí s akutní leukémií v ČR. Současně budeme studovat supresi nemaligní krvetvorby během léčby. Budeme studovat význam minimální reziduální nemoc pomocí čtyřbarevné cytometrie a výsledky budeme porovnávat v rámci mezinárodních studií, z nichž jednubudeme koordinovat (http://clip.webpark.cz/minimini.html).

• MeSH
• akcelerovaná fáze myeloidní leukemie MeSH
• akutní lymfatická leukemie MeSH
• cytologické techniky MeSH
• diagnostické techniky molekulární MeSH
• dítě MeSH
• genetické techniky MeSH
• genomika MeSH
• imunofenotypizace MeSH
• reziduální nádor MeSH
• Check Tag
• dítě MeSH

• Konspekt
• Biochemie. Molekulární biologie. Biofyzika
• NLK Obory
• onkologie
• hematologie a transfuzní lékařství
• alergologie a imunologie
• biologie
• pediatrie
• radiologie, nukleární medicína a zobrazovací metody
• NLK Publikační typ
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR

Imunofenotypizace je již dnes standardní metodou v diagnostice hemato-onkologických onemocnění. V současné době zažíváme rozvoj mnohobarevné průtokové cytometrie, jak ve výzkumu, tak i v klinické diagnostice. Práce shrnuje diagnostiku a sledování akutní lymfoblastické leukemie pomocí průtokové cytometrie.

Immunophenotyping is a standard method used in diagnostics of hematological malignancies. Progress in number of multicolour cytometry as well as new targets identified by genomics bring new possibilities in research and diagnostics. These aspects are summarized in the article.

• MeSH
• akutní lymfatická leukemie diagnóza   klasifikace   terapie   MeSH
• antigeny diferenciační B-lymfocytární klasifikace   MeSH
• diferenciační antigeny T-lymfocytů klasifikace   MeSH
• dítě MeSH
• finanční podpora výzkumu jako téma MeSH
• imunofenotypizace metody   využití   MeSH
• lidé MeSH
• pre-B-buněčná leukemie diagnóza   patofyziologie   MeSH
• průtoková cytometrie metody   MeSH
• reziduální nádor MeSH
• Check Tag
• dítě MeSH
• lidé MeSH

• MeSH
• akutní lymfatická leukemie diagnóza   epidemiologie   terapie   MeSH
• antigen CD33 MeSH
• antigeny diferenciační myelomonocytární * imunologie   metabolismus   MeSH
• CD antigeny * imunologie   metabolismus   MeSH
• dítě MeSH
• imunofenotypizace MeSH
• incidence MeSH
• lidé MeSH
• monoklonální protilátky * terapeutické užití   MeSH
• prognóza MeSH
• Check Tag
• dítě MeSH
• lidé MeSH
• Publikační typ
• dopisy MeSH
• práce podpořená grantem MeSH

BACKGROUND: Aberrant expression of myeloid antigens (MyAgs) on acute lymphoblastic leukemia (ALL) cells is a well-documented phenomenon, although its regulating mechanisms are unclear. MyAgs in ALL are interpreted e.g. as hallmarks of early differentiation stage and/or lineage indecisiveness. Granulocytic marker CD66c -- Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 6 (CEACAM6) is aberrantly expressed on ALL with strong correlation to genotype (negative in TEL/AML1 and MLL/AF4, positive in BCR/ABL and hyperdiploid cases). METHODS: In a cohort of 365 consecutively diagnosed Czech B-precursor ALL patients, we analyze distribution of MyAg+ cases and mutual relationship among CD13, CD15, CD33, CD65 and CD66c. The most frequent MyAg (CD66c) is studied further regarding its stability from diagnosis to relapse, prognostic significance and regulation of surface expression. For the latter, flow cytometry, Western blot and quantitative RT-PCR on sorted cells is used. RESULTS: We show CD66c is expressed in 43% patients, which is more frequent than other MyAgs studied. In addition, CD66c expression negatively correlates with CD13 (p < 0.0001), CD33 (p = 0.002) and/or CD65 (p = 0.029). Our data show that different myeloid antigens often differ in biological importance, which may be obscured by combining them into "MyAg positive ALL". We show that unlike other MyAgs, CD66c expression is not shifted from the onset of ALL to relapse (n = 39, time to relapse 0.3-5.3 years). Although opposite has previously been suggested, we show that CEACAM6 transcription is invariably followed by surface expression (by quantitative RT-PCR on sorted cells) and that malignant cells containing CD66c in cytoplasm without surface expression are not found by flow cytometry nor by Western blot in vivo. We report no prognostic significance of CD66c, globally or separately in genotype subsets of B-precursor ALL, nor an association with known risk factors (n = 254). CONCLUSION: In contrast to general notion we show that different MyAgs in lymphoblastic leukemia represent different biological circumstances. We chose the most frequent and tightly genotype-associated MyAg CD66c to show its stabile expression in patients from diagnosis to relapse, which differs from what is known on the other MyAgs. Surface expression of CD66c is regulated at the gene transcription level, in contrast to previous reports.

• MeSH
• akutní lymfatická leukemie metabolismus   MeSH
• antigen Lewis X biosyntéza   MeSH
• antigeny CD13 biosyntéza   MeSH
• antigeny diferenciační myelomonocytární biosyntéza   MeSH
• buněčná membrána metabolismus   MeSH
• časové faktory MeSH
• CD antigeny biosyntéza   MeSH
• cytoplazma metabolismus   MeSH
• dítě MeSH
• financování organizované MeSH
• genetická transkripce MeSH
• genotyp MeSH
• glykosylace MeSH
• imunofenotypizace MeSH
• kohortové studie MeSH
• kojenec MeSH
• lidé MeSH
• mladiství MeSH
• molekuly buněčné adheze biosyntéza   MeSH
• polymerázová řetězová reakce s reverzní transkripcí MeSH
• předškolní dítě MeSH
• přežití bez známek nemoci MeSH
• prognóza MeSH
• průtoková cytometrie MeSH
• recidiva MeSH
• regulace genové exprese u nádorů MeSH
• RNA metabolismus   MeSH
• western blotting MeSH
• Check Tag
• dítě MeSH
• kojenec MeSH
• lidé MeSH
• mladiství MeSH
• předškolní dítě MeSH
• Geografické názvy
• Česká republika MeSH

• MeSH
• akutní lymfatická leukemie diagnóza   genetika   MeSH
• finanční podpora výzkumu jako téma MeSH
• fúzní onkogenní proteiny genetika   MeSH
• lidé MeSH
• onkogenní proteiny MeSH
• receptory imunologické analýza   genetika   MeSH
• recidiva MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• Publikační typ
• srovnávací studie MeSH

• MeSH
• akutní lymfatická leukemie diagnóza   MeSH
• dítě MeSH
• finanční podpora výzkumu jako téma MeSH
• lidé MeSH
• polymerázová řetězová reakce s reverzní transkripcí metody   využití   MeSH
• reziduální nádor diagnóza   komplikace   MeSH
• Check Tag
• dítě MeSH
• lidé MeSH
• Publikační typ
• kongresy MeSH

• MeSH
• akutní lymfatická leukemie diagnóza   terapie   MeSH
• dítě MeSH
• finanční podpora výzkumu jako téma MeSH
• lidé MeSH
• mezinárodní spolupráce MeSH
• průtoková cytometrie využití   MeSH
• reziduální nádor diagnóza   MeSH
• Check Tag
• dítě MeSH
• lidé MeSH
• Publikační typ
• kongresy MeSH

• MeSH
• akutní lymfatická leukemie diagnóza   genetika   imunologie   MeSH
• antigeny CD27 analýza   biosyntéza   genetika   MeSH
• antigeny CD44 analýza   biosyntéza   genetika   MeSH
• genotyp MeSH
• imunofenotypizace MeSH
• kohortové studie MeSH
• lidé MeSH
• prognóza MeSH
• průtoková cytometrie * metody   MeSH
• stanovení celkové genové exprese * MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• Publikační typ
• dopisy MeSH
• práce podpořená grantem MeSH

TCR gene rearrangement generates diversity of T lymphocytes by V(D)J recombination. Ig genes are rearranged in B cells using the same enzyme machinery. TCRD (TCR delta) genes are frequently incompletely rearranged in B precursor leukemias and recently were found in a significant portion of physiological B lymphocytes. Incomplete TCRD rearrangements (V-D) thus serve as natural indicators of previous V(D)J recombinase activity. Functional V(D)J recombinase has recently been found in murine NK precursors. We tested whether physiological NK cells and other leukocyte subpopulations contained TCR rearrangements in humans. This would provide evidence that V(D)J recombinase was active in the ancestry cells and suggest common pathways among the positive cell types. TCRD were rearranged in 3.2-36% of NK cells but not in nonlymphoid leukocytes. The previously known phenomenon of TCRD transcription in NK cells is a possible mechanism that maintains the chromatin open at the TCRD locus. In comparison, TCRG rearrangements were frequent in T cells, low to negative in B and NK cells, and negative in nonlymphoid cells, suggesting a tighter control of TCRG. Levels of TCRD rearrangements were similar among the B lymphocyte subsets (B1-B2, naive-memory). In conclusion, human NK cells pass through a differentiation step with active V(D)J recombinase similar to T and B lymphocytes and unlike nonlymphoid leukocytes. This contradicts recent challenges to the concept of separate lymphoid and myeloid differentiation.

• MeSH
• buněčná diferenciace genetika   imunologie   MeSH
• buňky HT-29 MeSH
• buňky NK MeSH
• finanční podpora výzkumu jako téma MeSH
• genetické markery MeSH
• genová přestavba - delta řetězec receptoru antigenů T-buněk fyziologie   MeSH
• HeLa buňky MeSH
• lidé MeSH
• nádorové buněčné linie MeSH
• podskupiny B-lymfocytů MeSH
• podskupiny lymfocytů cytologie   imunologie   metabolismus   MeSH
• VDJ-rekombinasy metabolismus   MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• Publikační typ
• srovnávací studie MeSH

• MeSH
• finanční podpora výzkumu jako téma MeSH
• genetické markery imunologie   MeSH
• genová přestavba - delta řetězec receptoru antigenů T-buněk MeSH
• HeLa buňky MeSH
• klonování DNA MeSH
• lidé MeSH
• podskupiny B-lymfocytů imunologie   metabolismus   MeSH
• polymerázová řetězová reakce MeSH
• receptory antigenů T-buněk gama-delta analýza   genetika   krevní zásobení   MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH