Závěrečná zpráva o řešení grantu Agentury pro zdravotnický výzkum MZ ČR
Nestr.
Significant progress in the field of tumor immunotherapy has been recently shown to complement available treatment modalities of hematological malignancies. This novel treatment method is based on the use adoptively transferred T lymphocytes which were modified in vitro prior to transfer to express artificial signaling molecule designated Chimeric Antigen Receptor (CAR) which redirects the specificity of modified lymphocytes to surface antigens expressed by malignant cells. In this project we propose to develop methods for CAR-based therapy of lymphomas and leukemia. Next, we propose to develop methods for selective expansion of T cells specific for EBV, HCMV or adenovirus from donor lymphocytes for the use in patients who received allogeneic stem cell transplantation and as a result of immunosupresion developed acute viral infection. The goal of the project is the manufacture of GMP-grade cells and their pre-clinical testing. Proposed project meets criteria of national programme for the support of applied medical research in Aims 1.3.1., 1.6.1., 2.5.1. a 2.5.2.
Významné úspěchy v oblasti nádorové imunoterapie, kterých bylo dosaženo v nedávné době úspěšně doplňují zavedené léčebné metody hematologických malignit. Tyto nové metody jsou založené na použití modifikovaných T lymfocytů, které exprimují arteficielní signalizační molekulu označovanou jako Chimerický antigenní receptor (CAR), která přesměruje specifitu T lymfocytů na povrchové antigeny přítomné na nádorových buňkách. V tomto projektu navrhujeme vývoj metod léčby leukemií a lymfomů pomocí CAR-lymfocytů. Dále navrhujeme vývoj metody selektivní expanze T lymfocytů specifických na viry EBV, HCMV a adenoviry z dárcovských lymfocytů, které by bylo možné použít pro léčbu akutní infekce u pacientů po transplantaci kostní dřeně. Cílem projektu je příprava buněk v GMP-kvalitě a preklinická fáze jejich testování. Předkládaný projekt je plně v souladu s prioritami a cíli “Programu na podporu zdravotnického aplikovaného výzkumu a vývoje” v oblasti 1. Vznik a rozvoj chorob a oblasti 2. Nové diagnostické a terapeutické metody, kde plní dílčí cíle 1.3.1., 1.6.1., 2.5.1. a 2.5.2.
- MeSH
- buněčná a tkáňová terapie metody MeSH
- chimerické antigenní receptory terapeutické užití MeSH
- hematologické nádory genetika terapie MeSH
- imunoterapie metody MeSH
- lidé MeSH
- T-lymfocyty MeSH
- vyvíjení léků metody MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- Konspekt
- Patologie. Klinická medicína
- NLK Obory
- hematologie a transfuzní lékařství
- onkologie
- NLK Publikační typ
- závěrečné zprávy o řešení grantu AZV MZ ČR
Adoptivní imunoterapie pomocí antivirových T lymfocytů (AVT) získaných od zdravých dárců je jedním z moderních přístupů, považovaných za průlom v léčbě refrakterních a závažných virových infekcí, které často doprovázejí primární imunodeficity nebo alogenní transplantaci krvetvorných kmenových buněk. Souhrnné sdělení popisuje téměř 30letý vývoj AVT proti lidskému cytomegaloviru, viru Epsteina a Barrové, lidskému adenoviru a lidskému polyomaviru BK. V článku jsou, přiblíženy základní metodické přístupy k jejich výrobě a charakterizovány výsledky získané v klinických studiích, které ověřily bezpečnost a účinnost postupu. Současný vývoj naznačuje, že léčba virových infekcí pomocí zmrazených AVT uložených v bankách by se v budoucnu mohla stát běžně dostupnou terapeutickou modalitou.
Adoptive immunotherapy using antiviral T cells (AVT) obtained from healthy donors is one of the advanced approaches considered as a breakthrough in the treatment of refractory and severe viral infections that often accompany primary immunodeficiencies or allogeneic hematopoietic stem cell transplantations. The review describes nearly 30 years of the development of AVT to human cytomegalovirus, Epstein-Barr virus, human adenovirus, and human polyomavirus BK. The review introduces the basic methodological approaches to their production and summarizes the results from clinical studies that tested the safety and efficiency of the procedures used. Recent studies indicate that the treatment of viral infections by frozen AVT stored in banks could become a commonly available therapeutic modality.
Závěrečná zpráva o řešení grantu Interní grantové agentury MZ ČR
1 svazek : ilustrace, tabulky ; 30 cm
Recently, novel small DNA viruses (Human Polyomavirus HPyV6, HPyV7, HPyV9, Human Bocavirus HBoV1, Anelloviruses TTMV and TTMDV) have been discovered. Although these viruses belong to different family, they are widespread in population and they all presumably cause common lifelong infections. There is an increasing consideration that novel small DNA viruses play the key role as emerging opportunistic pathogens after reactivation in immunocompromised patients. The aim of the project is to gain knowledge of prevalence and biology of the newly discovered DNA viruses in healthy population and in immunocompromised individuals. The proposed study includes detection of viral DNA, determination of viral load, searching the persistence of the viruses and the presence of virus specific antibodies. In immunocompromised patient we will evaluate the possible clinical manifestation of viral infections.
Během posledních let byla objevena řada nových malých DNA virů (lidské polyomaviry HPyV6, HPyV7, HPyV9, lidský bocavirus HBoV1, anelloviry TTMV a TTMDV). Přestože tyto viry nepatří do jedné skupiny, všechny se pravděpodobně vyskytují běžně v lidské populaci, způsobují celoživotní perzistentní infekci organismu. K reaktivaci s možnými patologickými následky pak může docházet především u imunokompromitovaných jedinců. V tomto projektu se zaměříme na detekci a sledování perzistence nově objevených DNA virů u zdravých a imunokompromitovaných jedinců. Cílem studie je zjistit virovou nálož, variabilitu genomů a přítomnost virově specifických protilátek. U imunokompromitivaných jedinců budeme analyzovat klinické projevy, které mohou souviset s virovou infekcí.
- MeSH
- Anelloviridae MeSH
- DNA virů MeSH
- ELISA MeSH
- kvantitativní polymerázová řetězová reakce MeSH
- lidský bocavirus MeSH
- polyomavirové infekce MeSH
- protilátky virové MeSH
- transplantace hematopoetických kmenových buněk MeSH
- Konspekt
- Patologie. Klinická medicína
- NLK Obory
- hematologie a transfuzní lékařství
- virologie
- biologie
- NLK Publikační typ
- závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR
Human polyomaviruses HPyV6, HPyV7, TSPyV, HPyV9, MWPyV, and KIPyV have been discovered between 2007 and 2012. TSPyV causes a rare skin disease trichodysplasia spinulosa in immunocompromised patients, the role of remaining polyomaviruses in human pathology is not clear. In this study, we assessed the occurrence of serum antibodies against above polyomaviruses in healthy blood donors. Serum samples were examined by enzyme-linked immunoassay (ELISA), using virus-like particles (VLPs) based on the major VP1 capsid proteins of these viruses. Overall, serum antibodies against HPyV6, HPyV7, TSPyV, HPyV9, MWPyV, and KIPyV were found in 88.2%, 65.7%, 63.2%, 31.6%, 84.4%, and 58%, respectively, of this population. The seroprevalence generally increased with age, the highest rise we observed for HPyV9 and KIPyV specific antibodies. The levels of anti-HPyV antibodies remained stable across the age-groups, except for TSPyV and HPyV9, where we saw change with age. ELISAs based on VLP and GST-VP1 gave comparable seroprevalence for HPyV6 antibodies (88.2% vs.85.3%) but not for HPyV7 antibodies (65.7% vs. 77.2%), suggesting some degree of crossreactivity between HPyV6 and HPyV7 VP1 proteins. In conclusion, these results provide evidence that human polyomaviruses HPyV6, HPyV7, TSPyV, HPyV9, MwPyV, and KIPyV circulate widely in the Czech population and their seroprevalence is comparable to other countries.
- MeSH
- dárci krve * MeSH
- dospělí MeSH
- hostitel s imunodeficiencí MeSH
- lidé středního věku MeSH
- lidé MeSH
- mladiství MeSH
- mladý dospělý MeSH
- myši MeSH
- polyomavirové infekce epidemiologie imunologie virologie MeSH
- Polyomavirus klasifikace genetika imunologie MeSH
- protilátky virové krev MeSH
- senioři MeSH
- séroepidemiologické studie MeSH
- virion imunologie izolace a purifikace MeSH
- virové plášťové proteiny genetika imunologie MeSH
- zdraví dobrovolníci pro lékařské studie MeSH
- zkřížené reakce MeSH
- zvířata MeSH
- Check Tag
- dospělí MeSH
- lidé středního věku MeSH
- lidé MeSH
- mladiství MeSH
- mladý dospělý MeSH
- mužské pohlaví MeSH
- myši MeSH
- senioři MeSH
- ženské pohlaví MeSH
- zvířata MeSH
- Publikační typ
- časopisecké články MeSH
- práce podpořená grantem MeSH
- Geografické názvy
- Československo epidemiologie MeSH
BACKGROUND: The reactivation of human cytomegalovirus (HCMV) in immunosuppressed patients is associated with significant morbidity. Testing HCMV-specific T-cell responses can help determine which patients are at high risk of HCMV disease. We optimized selection of HCMV antigens for detection of T-cell response of patients after allogeneic hematopoietic stem cell transplantation (HSCT) with the aim of identifying patients with insufficient control of HCMV reactivation. METHODS: T-cell immune response to HCMV was monitored in 30 patients during the first year after HSCT. The HSCT recipients were classified according to their anti-HCMV T-cell response and the presence of HCMV DNA in the blood. RESULTS: We observed an inverse relationship between the magnitude of HCMV-specific T-cell responses against CMV lysate, phosphoprotein (pp) 65, immediate early-1 (IE-1), UL36, and UL55, but not to US3 and US29 detected by interferon-gamma (IFNγ)- ELISPOT and the level of HCMV DNA in the blood of patients during the 30 days following sampling. The study has revealed that patients who received a graft from a seronegative donor have a lower T-cell response against HCMV and increased probability of HCMV reactivation in comparison to the patients who had received their graft from a seropositive donor. CONCLUSION: The individual peptide pools and native HCMV antigens were useful for monitoring the time course of the anti-HCMV response by IFNγ-ELISPOT, which proved to have a prognostic value. Besides widely employed peptide pools of pp65 and IE-1, the use of antigens UL36 and UL55, but not US3 or US29, increased sensitivity of the test.
- MeSH
- antigeny virové genetika imunologie MeSH
- antivirové látky terapeutické užití MeSH
- CD8-pozitivní T-lymfocyty imunologie virologie MeSH
- cytomegalovirové infekce farmakoterapie imunologie virologie MeSH
- Cytomegalovirus genetika imunologie MeSH
- ELISPOT MeSH
- fosfoproteiny imunologie MeSH
- hostitel s imunodeficiencí MeSH
- interferon gama krev MeSH
- lidé středního věku MeSH
- lidé MeSH
- transplantace hematopoetických kmenových buněk škodlivé účinky MeSH
- virové proteiny genetika imunologie MeSH
- Check Tag
- lidé středního věku MeSH
- lidé MeSH
- mužské pohlaví MeSH
- ženské pohlaví MeSH
- Publikační typ
- časopisecké články MeSH
BACKGROUND: Human cytomegalovirus (HCMV) establishes lifelong latent infection that can result in severe life-threatening disease in immunosuppressed patients after hematopoietic stem cell transplantation (HSCT). An HCMV-seropositive transplant recipient who receives a graft from a seronegative donor (R+/D-) is at high risk of recurrent HCMV reactivation. METHODS: To assess the incidence of R+/D- combination, we retrospectively evaluated HCMV-seronegative donors for 746 allogeneic HSCT treatments carried out at our center during 1995-2014. In our cohort, 20% HCMV-seronegative HSCT recipients, 21% HCMV-seronegative related graft donors, and 52% HCMV-seronegative unrelated graft donors were included. RESULTS: Analyses of the HCMV serostatus of hematopoietic stem cell donors during 2 consecutive calendar periods (1995-2005 and 2006-2014) showed a significant increase in the proportion of seronegative donors (odds ratio [OR] = 1.947). In addition, the number of HSCT treatments using an unrelated donor increased (OR = 2.376). Finally, the use of grafts from countries with a very low HCMV prevalence increased. CONCLUSION: This increase in HCMV seronegativity in unrelated donors and the increased proportion of unrelated donors were responsible for the increased occurrence of the high-risk combination R+/D- (OR = 1.680). If the reduction in the rate of HCMV-seropositive graft donors continues, an increased frequency of HCMV reactivation events in our transplant recipients can be expected, because of the increasing occurrence of the high-risk R+/D- combination.
- MeSH
- aktivace viru imunologie MeSH
- cytomegalovirové infekce epidemiologie virologie MeSH
- Cytomegalovirus fyziologie MeSH
- dárci tkání MeSH
- hostitel s imunodeficiencí MeSH
- lidé MeSH
- retrospektivní studie MeSH
- transplantace hematopoetických kmenových buněk škodlivé účinky MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- Publikační typ
- časopisecké články MeSH
- práce podpořená grantem MeSH
- Geografické názvy
- Česká republika epidemiologie MeSH
Závěrečná zpráva o řešení grantu Interní grantové agentury MZ ČR
1 svazek : ilustrace ; 30 cm
Here, we propose to prepare mRNA vaccine against a number of candidate immunogenic CMV proteins. The vaccine will include antigen presenting cells electroporated mRNA coding for viral protective antigens and immunostimulatory molecules known to enhance activation of T-cells directed to Th1. To evaluate the protective potential of each CMV vaccine component the magnitude of CMV T-cell response of seropositive donors or patients after HSCT to each individual protein will be monitored and analyzed in the context of CMV DNA levels of HSCT patient. Tcell response will be characterized phenotypicaly and functionally by multiparametric flow cytometry. The result of the study will enable to elaborate immunotherapy protocol under good manufacturing practise conditions. mRNA vaccine will be also used for monitoring in CMV-specific T cell response of patients after HSCT.
Navrhujeme konstrukci mRNA vakcíny proti CMV, která bude sloužit ke stimulaci a namnožení T lymfocytů specifických pro hlavní protektivní virové antigeny a bude využitelná pro monitorování stavu imunity proti CMV u pacientů po transplantaci hematopoetických krevních buněk případně k expanzi T-buněk specifických pro CMV ex vivo pro terapeutické účely. Vakcína bude obsahovat antigen prezentující buňky do nichž se elektroporací vnese rekombinantní mRNA, kódující několik virových antigenů a imunostimulační molekuly usměrňující buněčnou imunitní odpověď k typu Th1. Budeme analyzovat odpověď dárců kmenových buněk, pacientů po HSCT včetně průběhu jejich hladiny DNA CMV, což povede k výběru virových antigenů, které přispívají k protektivitě alespoň u 70% osob bez ohledu na jejich HLA haplotyp. Nalezneme podmínky stimulace T lymfocytů touto vakcínou in vitro, což bude základem pro další vývoj léčivého přípravku v podmínkách správné laboratorní praxe.
