We have previously shown that suberoylanilide hydroxamic acid (SAHA) treatment increases the adhesivity of leukemic cells to fibronectin at clinically relevant concentrations. Now, we present the results of the proteomic analysis of SAHA effects on leukemic cell lines using 2-DE and ProteomLab PF2D system. Histone acetylation at all studied acetylation sites reached the maximal level after 5 to 10 h of SAHA treatment. No difference in histone acetylation between subtoxic and toxic SAHA doses was observed. SAHA treatment induced cofilin phosphorylation at Ser3, an increase in vimentin and paxillin expression and a decrease in stathmin expression as confirmed by western-blotting and immunofluorescence microscopy. The interaction of cofilin with 14-3-3 epsilon was documented using both Duolink system and coimmunoprecipitation. However, this interaction was independent of cofilin Ser3 phosphorylation and the amount of 14-3-3-ε-bound cofilin did not rise following SAHA treatment. SAHA-induced increase in the cell adhesivity was associated with an increase in PAK phosphorylation in CML-T1 cells and was abrogated by simultaneous treatment with IPA-3, a PAK inhibitor. The effects of SAHA on JURL-MK1 cells were similar to those of other histone deacetylase inhibitors, tubastatin A and sodium butyrate. The proteome analysis also revealed several potential non-histone targets of histone deacetylases.
- MeSH
- acetylace účinky léků MeSH
- antitumorózní látky farmakologie MeSH
- buněčná adheze účinky léků MeSH
- buňky K562 MeSH
- časové faktory MeSH
- fosforylace účinky léků MeSH
- HL-60 buňky MeSH
- kyseliny hydroxamové farmakologie MeSH
- leukemie farmakoterapie metabolismus patologie MeSH
- lidé MeSH
- nádorové proteiny metabolismus MeSH
- proteom metabolismus MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- Publikační typ
- časopisecké články MeSH
- práce podpořená grantem MeSH
Východisko. Trombotická trombocytopenická purpura je těžké multisystémové onemocnění charakterizované konzumpční trombocytopenií, mikroangiopatickou hemolýzou s mikrotromby v mikrocirkulaci, fluktujícím neurologickým nálezem, případně poruchou renálních funkcí. Podobně se projevuje i hemolyticko-uremický syndrom a jiná onemocnění. Nedávné studie prokázaly, že onemocnění způsobuje defekt metaloproteázy štěpící von Willebrandův faktor do menších multimerů. Jako člen ADAMTS rodiny metaloproteáz získala název ADAMTS13. Cílem naší práce bylo charakterizovat mutace v genu pro ADAMTS13 u vrozené formy trombotické trombocytopenické purpury. Metody a výsledky. Mutační analýzu jsme prováděli u 9 pacientů a jejich 12 rodinných příslušníků. Aktivita ADAMTS13 byla měřena modifikovanou metodou kvantitativního imunoblotingu degradovaných multimerů von Willebrandova faktoru. Mutační analýza byla prováděna sekvenováním všech 29 exonů a jejich přilehlých intronových oblastí. Nalezli jsme pět rozdílných mutací. Tři z nich dosud nebyly publikovány. Závěry. Mutační analýza odhalila zajímavý výsledek. Nalezli jsme inzertní mutaci 4143insA v 8 z 9 pacientů. Tato často se vyskytující mutace představuje výhodu pro diferenciální diagnózu vrozené formy trombotické trombocytopenické purpury, protože klinická manifestace u dětí je velmi heterogenní a rychlá detekce mutace je přínosem v prevenci léčby rekurencí.
Background. Thrombotic thrombocytopenic purpura is characterized by microvascular platelet clumping resulting in thrombocytopenia, microangiopathic hemolysis, neurological abnormality, and renal dysfunction. Similar manifestations also occur in patients with the hemolytic uremic syndrome or other types of disorders. Recent studies demonstrate that severe deficiency of the von Willebrand factor cleaving metalloprotease, ADAMTS13, causes thrombotic thrombocytopenic purpura. Aim of our study was to characterize gene defects causing inherited type of disease. Methods and Results. We investigated nine patients with recurrent type of disease with familiar origin and twelve relatives. Samples were taken in a remission of disease. We measured activity of ADAMTS13 (vWF-CP) with modified method of the quantitative immunoblotting of degraded vWF multimers. Mutation screening was carried out by sequencing all 29 exons and flanking intron regions of the ADAMTS13 gene. Five distinct mutations were found. Three of them are novel. Conclusions. Mutation analysis of the ADAMTS13 gene brought interesting results in eight patients. We found a one single base frameshift insertion, 4143insA in 8 of 9 unrelated individuals. This investigation represents an advantage in the differential diagnosis of disease since the thrombotic thrombocytopenic purpura phenotype in childhood can be variable and rapid detection of mutation is helpful for the recurrence prevention.
- MeSH
- diagnostické techniky molekulární metody využití MeSH
- finanční podpora výzkumu jako téma MeSH
- kohortové studie MeSH
- lidé MeSH
- tkáňové inhibitory metaloproteinas genetika MeSH
- trombotická trombocytopenická purpura epidemiologie patofyziologie vrozené MeSH
- von Willebrandův faktor fyziologie MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- MeSH
- chromatografie kapalinová metody přístrojové vybavení MeSH
- finanční podpora výzkumu jako téma MeSH
- geny MeSH
- hemofilie A diagnóza MeSH
- lidé MeSH
- mutace MeSH
- mutační analýza DNA MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- Publikační typ
- kongresy MeSH
- srovnávací studie MeSH
Heparinem indukovaná trombocytopenie patří k hlavním nežádoucím účinkům léčby heparinem,objevuje se přibližně u 3 %nemocných,kterým je podáván nefrakciovaný heparin.Projevuje se kombinací trombocytopenie a trombotických příhod.Příčinou je aktivace destiček imunokomplexem,složeným z komplexu destičkového faktoru 4 s heparinem a specifické protilátky,namířené protitomuto komplexu.V laboratorní diagnostice jsou k dispozici dva typy testů:1.imunohematologickétesty,založené na detekci specifické protilátky.2.funkční testy,detekující aktivaci nebo agregacidestiček.V současnosti je za nejlepší dostupný laboratorní test považováno měření uvolněného serotoninu v přítomnosti heparinu.Test je prováděn zpravidla jen ke konfirmaci,neboť je technicky i časověnáročný.Další nevýhodou je použití 14C radioaktivně značeného serotoninu.Autoři ověřili možnostchromatografického stanovení uvolněného serotoninu a dosažené výsledky porovnali s ostatními metodikami.
Heparin-induced thrombocytopenia is one of the major complications of heparin therapy,which occursapproximately in 3%of patients receiving unfractionated heparin.It is manifested by a combination ofthrombocytopenia with thrombotic events.Heparinnduced thrombocytopenia is caused by specificantibodies that recognise complexes of heparin and platelet factor 4,leading to platelet activation.Twotypes of diagnostic assays are available:1.Antigen assays are based on detection of the specificantibody.2.Functional assays rely upon platelet aggregation or activation.Among tests in this group,the serotonin release assay has been reported to be the best,but it is time consuming and the onlymethod where serotonin labelled by radioactive 14C is used.The authors developed a method tomeasure serotonin release by high performance liquid chromatography (HPLC)–fluorimetric detection.The test results were compared with other methods.
HLA (hlavní histokompatibilitní systém člověka) je řazen mezi hlavní faktory determinující genetickou vnímavost k autoimunitním a některým dalším onemocněním. Hemolyticko-uremický syndrom (HUS) je heterogenní klinickou jednotkou s multifaktoriální etiopatogenezí, přičemž se jedná o jednu z nejčastějších příčin akutního selhání ledvin u dětí. Některé publikovanné údaje ukazují na možnost imunogenetické predispozice k tomuto onemocnění. Cílem předložené studie bylo určení případných HLA asociací s HUS u dětských nemocných české populace, vztah HLA znaků ke klinické formě HUS, k věku a/nebo dlouhodobé prognóze těchto pacientů. Retrospektivně byla vyšetřena skupina 70 nemocných (33 chlapců, 37 dívek) s D+ HUS (D=diarrhea, HUS provázený průjmem) v období 1–26 let (medián 7 let) od začátku akutního onemocnění. Enterohemorhagický kmen E. coli produkující verocytotoxin byl přítomen u 75 % nemocných v průběhu akutní fáze nemoci. Analyzovali jsme výsledky sérotypizace znaků HLA I. a II. třídy na lymfocytech periferní krve. Při srovnání s kontrolní skupinou dárců krve (139 osob) jsme u nemocných nalezli signifikantní zvýšení frekvence HLA-DR9, který v kavkazské populaci náleží mezi vzácné antigeny. Negativní asociace s HLA-DQ1 znakem byla zjištěna ve skupině se závažným průběhem onemocnění (chronická renální insuficience a/nebo chronické renální postižení). U těchto nemocných bylo zaznamenáno též výrazné zvýšení frekvence HLA-DR7 znaku, a to zejména ve skupině dětí starších 2 let. HLA-DR7 antigen bývá poměrně často asociován s autoimunitními chorobami jako je lupus erythematodes, psoriasis vulgaris, celiakie, idiopatický nefrotický syndrom dětí a další. Zvýšená frekvence HLA-DR7 by mohla svědčit pro společnou imunopatogenetickou komponentu těchto onemocnění. Určování HLA antigenů u dětí s HUS by mohlo pomoci v predikci nepříznivého průběhu onemocnění s možným dopadem na způsob léčby.
- MeSH
- dítě MeSH
- hemolyticko-uremický syndrom diagnóza genetika MeSH
- HLA antigeny genetika MeSH
- HLA-DR7 antigen diagnostické užití MeSH
- lidé MeSH
- polymorfismus genetický genetika MeSH
- Check Tag
- dítě MeSH
- lidé MeSH
- Publikační typ
- kongresy MeSH
