Cíl: Cílem práce bylo prokázat přítomnost solubilní formy CA IX proteinu (s-CA IX) v kultivačním médiu nádorových buněk in vitro a v tělních tekutinách in vivo u CA IX protein pozitivních nádorů. Následně přizpůsobit současné diagnostické metody ke stanovení s-CA IX a pokusit se zjistit jeho možný význam jako markeru u adenokarcinomu ledviny (RCC) a uroteliálních karcinomů (TCC). Materiál a metoda: Do studie jsme zahrnuli dvě skupiny: 1. nemocní s RCC, 2. nemocní s TTC vývodných močových cest. V první skupině bylo testováno 31 pacientů s RCC a 61 kontrol, ve druhé 32 pacientů s endoskopickým podezřením na TCC a 16 kontrol. K průkazu CA IX antigenu ve vzorcích nádorů jsme použili imunohistochemické barvení pomocí monoklonální protilátky M75. V extraktech z nádorů a v tělních tekutinách jsme přítomnost CA IX stanovovali metodou "Western blot" nebo ELISA. Výsledky: V 1. skupině jsme v séru přítomnost s-CA IX zjistili pouze v podskupině s prokázaným RCC. Z 31 vzorků jich bylo 13 (41,9%) pozitivních. V moči v podskupině s RCC byl s-CA IX protein prokázán u 19 (70 %) z 27 vzorků. V kontrolní skupině byly všechny vzorky s-CA IX negativní. Ve 2. skupině byl TCC histologicky prokázán u 23 nemocných. Pozitivní nález s-CA IX v moči byl u 16 z nich (69,6 %). Negativní nález s-CA IX byl u 7 (30, 4%) nemocných. U žádného z TCC pozitivních pacientů jsme v séru s-CA IX antigen neprokázali. Závěr: Naše práce prokázala uvolňování CA IX do tělních tekutin u nemocných s RCC a TCC a možnost jeho detekce. Western blot v kombinaci s použitím zvýšené chemiluminiscence je specifickou a vysoce citlivou metodou pro laboratorní hodnocení, avšak je to technika pracná a časově náročná. Současné výsledky ukazují, že by se dalo uvažovat o vyvinutí vhodné kvantitativní metody pro stanovení s-CA IX, jež by umožnila zpracování větších souborů nemocných ke zhodnocení klinického významu jeho exprese u nemocných s RCC a TCC.
Aim: The aim of our study was to investigate the presence of soluble CA IX protein (s-CA IX) in tumor culture media in vitro and body fluids of patients carrying CA IX protein positive tumors. The final purpose was to improve present diagnostic methods to s-CA IX detection and to determine its possible use as a marker of renal clear cell carcinoma (RCC) and transitional cell carcinoma (TCC). Material and methods: In the preliminary study were two groups of patients: 1. RCC patients, 2. TCC patients. In the first group were included 31 RCC patients and 61 controles, in the second group 32 patients with endoscopic suspicion for TCC and 16 controles. We used immunohistochemical staining employing MAb M75 for CA IX identification in tumor tissue. In tumor extracts and body fluids we used Western blotting and ELIS A for quantitation of the s-CA IX protein. Results: In the RCC group s-CA IX protein was detected only in patients with proven RCC. In the blood 13 (41,9%) from 31 were positive. In urine 19 (70%) from 27 were CA IX protein positive. Control specimens were all s-CA IX negative. In the TCC group the tumor was identified in 23 patients histologically Positive s-CA IX was in 16 (69,6%) of them. Negative finding of s-CA IX was in 7 (30,4%) patients. Serum from all TCC patients was s-CA IX negative, even the serum from patients with CA IX positive urine. Conclusion: We demonstrated shedding of CA IX into body fluids in patients with RCC and TCC, although in exremely low concentrations. Nevertheless, Western blotting combined with enhanced chemiluminiscence is specific and extremely sensitive method allowing s-CA IX detection in body fluids. Our present data suggest that suitable quantitave method for s-CA IX detection should be developed, which in turn will enable evaluation of clinical significance of CA IX expression in RCC and TCC patients.
- Klíčová slova
- uroteliální nádory vývodných močových cest,
- MeSH
- antigeny nádorové izolace a purifikace krev moč MeSH
- ELISA využití MeSH
- financování organizované MeSH
- karboanhydrasy izolace a purifikace krev moč MeSH
- karcinom z přechodných buněk diagnóza enzymologie etiologie MeSH
- karcinom z renálních buněk diagnóza MeSH
- lidé MeSH
- nádorové biomarkery izolace a purifikace krev moč MeSH
- nádorové proteiny izolace a purifikace krev moč MeSH
- nádory ledvin diagnóza MeSH
- nádory močového měchýře diagnóza MeSH
- studie případů a kontrol MeSH
- urotel patologie MeSH
- western blotting využití MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
We investigated the expression of cell-associated CAIX protein in histological sections of the transitional cell carcinoma (TCC) of the urinary tract and of the soluble form of CAIX (s-CAIX) shed by the tumor into the serum and urine of TCC patients. A total of 23 patients with histologically confirmed TCC or squamous cell carcinoma (SCC) were enrolled in the pilot study. Sixteen healthy individuals served as controls. Membrane-bound CAIX was present in the tumor cells near the endoluminal surface. Necrosis was observed in only 4 samples. Using Western blots, s-CAIX concentrated from urine was visualized as a double band at 50 and 54 kDa. In most cases, the presence of s-CAIX in the urine correlated with CAIX expression in the tumor. On the other hand, s-CAIX did not exceed the normal level in the serum of TCC patients. Urine from patients with TCC of the urinary bladder and renal pelvis contained s-CAIX, allowing the detection of tumors in approximately 70% of the patients. Moreover, two additional patients with suspected, but unconfirmed bladder tumor, with s-CAIX detected in urine, developed tumors identified as TCC within six months. We suggest that after a simple, rapid and sensitive test, monitoring s-CAIX levels in urine will be developed, it may be useful for early detection of relapse in patients following transurethral tumor resection.
- MeSH
- antigeny nádorové metabolismus MeSH
- buněčná membrána enzymologie patologie MeSH
- dospělí MeSH
- ELISA MeSH
- imunoenzymatické techniky MeSH
- karboanhydrasy metabolismus MeSH
- karcinom z přechodných buněk enzymologie krev moč MeSH
- ledvinná pánvička enzymologie patologie MeSH
- lidé středního věku MeSH
- lidé MeSH
- mladý dospělý MeSH
- močový měchýř enzymologie patologie MeSH
- nádorové biomarkery metabolismus MeSH
- pilotní projekty MeSH
- prognóza MeSH
- senioři nad 80 let MeSH
- senioři MeSH
- staging nádorů MeSH
- studie případů a kontrol MeSH
- urologické nádory enzymologie krev moč MeSH
- western blotting MeSH
- Check Tag
- dospělí MeSH
- lidé středního věku MeSH
- lidé MeSH
- mladý dospělý MeSH
- mužské pohlaví MeSH
- senioři nad 80 let MeSH
- senioři MeSH
- ženské pohlaví MeSH
- Publikační typ
- práce podpořená grantem MeSH
- srovnávací studie MeSH
- Publikační typ
- abstrakt z konference MeSH
- MeSH
- duktální karcinom prsu virologie MeSH
- nádorové buňky kultivované virologie MeSH
- Publikační typ
- kongresy MeSH
- MeSH
- antigeny virové analýza MeSH
- antisérum MeSH
- buněčné linie MeSH
- cytopatogenní efekt virový MeSH
- glykoproteiny analýza MeSH
- HeLa buňky MeSH
- křečci praví MeSH
- kultivované buňky MeSH
- kuřecí embryo MeSH
- ledviny MeSH
- lidé MeSH
- mutace MeSH
- neutralizační testy MeSH
- plakové testy MeSH
- replikace viru MeSH
- teplota MeSH
- virové proteiny analýza MeSH
- virus ptačí leukózy imunologie MeSH
- virus vezikulární stomatitidy, kmen Indiana imunologie patogenita růst a vývoj MeSH
- zvířata MeSH
- Check Tag
- křečci praví MeSH
- kuřecí embryo MeSH
- lidé MeSH
- zvířata MeSH
