Cíl: Karcinom prostaty je nejčastější urologickou onkologickou příčinou úmrtí. Etiologie onemocnění zůstává neznámá. Byla identifikována řada genů náchylnosti ke karcinomu prostaty, u kterých byla prokázána asociace změny genové exprese s výskytem karcinomu. Adaptorový protein SHB je součástí systému regulace apoptózy angiogeneze a buněčného cyklu. Při jeho zvýšené expresi byla prokázána snížená proliferace prostatických nádorových buněk PC3. Cílem prezentované práce je stanovení genové exprese SHB v tkáni karcinomu prostaty, její porovnání s expresí v tkáni benigní hyperplazie a vyhodnoceni diagnostického a prognostického potenciálu SHB. Metody: V letech 2008-2010 byla provedena izolace mRNA z tkáně karcinomu prostaty u 53 pacientů. Jako kontrolní skupina byla použita tkáň prostaty u 24 pacientů s benigní hyperplazií. Izolace mRNA byla prováděna u všech pacientů identickým způsobem pomocí soupravy Oligotex Direct mRNA Midi/Maxi. Po RT-PCR byla exprese vybraného vzorku vizualizována pomocí elektroforézy Optická hustota byla měřena denzitometricky Pro výpočet relativní exprese genu byl zvolen provozní gen GAD kódující glyceraldehyd-3-fosfátdehydrogenázu. Dosažené výsledky byly statisticky vyhodnoceny. Výsledky: Získaná data prokázala nižší relativní expresi SHB v tkání karcinomu (p < 0, 001). Při rozdělení karcinomu na lokalizované (T2) a lokálně pokročilé (T3-T4) byl pozorován trend k nižší expresi u lokálně pokro čilých forem, který ale nedosáhl statistické významnosti (p < 0,0693). Při porovnání skupin dle Gleasonova skóre (GS < 7 a GS > 7) jsme nezaznamenali žádný rozdíl. Závěr: SHB je kandidátní gen náchylnosti k vzniku karcinomu prostaty. Jeho exprese je nižší v tkáni karcinomu ve srovnání s tkání benigní hyperplazie a klesá při lokálně pokročilých stadiích.
Aim: Among urological malignancies prostate cancer most frequently leads to death. The etiology of this disease remains unknown. Many analyses identified genes associated with increased susceptibility to prostate cancer, where changes in gene expression were associated with prostate cancer. Adaptor protein SHB is involved in apoptosis, angiogenesis and cell cycle regulation systems. A correlation between the expression of SHB, and reduced proliferation of prostate cancer PC3 cells was detected. The aim of this work was to compare SHB expression in prostate cancer to that in benign prostate hyperplasia and to evaluate its diagnostic and prognostic potential. Methods: In 2008-2010, isolation of mRNA from prostate cancer was performed in 53 patients. Twenty four patients with benign prostate hyperplasia were used as a control group. The identical procedure of mRNA isolation using Oligotex Direct mRNA Midi/Maxi was used. RTPCR, expression of specific sample was visualized by electrophoresis. Optical density was measured with densitometry For relative expression calculation, housekeeping gene GAD (glyceralde-hyde-3-phosphate dehydrogenase) was used. Results have been evaluated statistically. Results: Statistically significant decrease in relative expression of SHB in prostate cancer tissue was detected (p < 0.001). In a comparison of patients with localized (T2) and locally advanced tumor, we observed a trend of decreased expression in locally advanced disease which had not achieved statistic significance (p < 0.0693). A comparison between groups detected no differences in the Gleason score (GS < 7 and GS > 7). Conclusion: SHB is a candidate gene for prostate cancer development. Its expression is decreased in prostate cancer compared to benign prostate hyperplasia. Its levels are decreased in locally advanced stages.
- Klíčová slova
- genová exprese, radikální prostatektomie, SHB,
- MeSH
- adaptorové proteiny signální transdukční fyziologie genetika MeSH
- apoptóza fyziologie genetika MeSH
- exprese genu MeSH
- financování organizované MeSH
- incidence MeSH
- interpretace statistických dat MeSH
- lidé středního věku MeSH
- lidé MeSH
- nádorové biomarkery MeSH
- nádory prostaty diagnóza MeSH
- prostatektomie MeSH
- protoonkogenní proteiny fyziologie genetika MeSH
- senioři nad 80 let MeSH
- senioři MeSH
- statistika jako téma MeSH
- Check Tag
- lidé středního věku MeSH
- lidé MeSH
- mužské pohlaví MeSH
- senioři nad 80 let MeSH
- senioři MeSH
Cíl práce: Zhodnotit přítomnost exprese genů PAX5 a Shb ve tkáni povrchových uroteliálních karcinomů močového měchýře, posoudit její korelaci s patologií genu p53 a uvážit prognostický význam jednotlivých faktorů. Pacienti a metodika: Do studie bylo zahrnuto 61 pacientů s histologicky prokázaným povrchovým uroteliálním karcinomem močového měchýře. Exprese mRNA genů PAX5 a Shb ve tkáni nádoru byla detekována pomocí reverzní polymerázové řetězové reakce (RT-PCR) a výsledek byl vyjádřen semikvantitativně. Přítomnost mutací p53 byla zachycena pomocí SSCP (single strand conformation polymorphism) a potvrzena sekvenováním. K imunohistochemickému vyšetření p53 byla použita protilátka DO1, k vyjádření výsledku bylo použito semikvantitativní hodnocení pomocí HSCORE (HS). Kontrolní skupinu pro posouzení PAX5 a Shb exprese tvořilo 8 mužů, u kterých byl vzorek urotelu odebrán během operace pro benigní hyperplazií prostaty. Výsledky: Přítomnost exprese PAX5 a Shb byla prokázána u 50, respektive 52 pacientů s uroteliálním nádorem, ale u žádného z kontrolní skupiny. Mutace p53 byla zachycena u jediného pacienta s tumorem pTaG2 a byla lokalizována v exonu 5 (delece prolinu 128). Jaderná imunoreaktivita p53 byla přítomna u většiny pacientů, při použití prahové hodnoty HS 200 mělo 56,9 % nemocných pozitivní nález. Kvantita imunohistochemické pozitivity p53 nekorelovala s kvantitou exprese PAX5. Při použití prahových hodnot HS 200 pro p53 a 0,2 pro PAX5 mělo z 8 progredujících pacientů 7 nadprahovou hodnotu HS a 4 nadprahovou hodnotu PAX5. Závěr: Exprese genu PAX5 je častým nálezem u povrchových uroteliálních karcinomů močového měchýře.
The objective of the work: To evaluate the presence of the PAX5 and Shb genes expression in the tissue of superficial urotelial urinary bladder cancers, to judge its correlation with the p53 gene pathology and to consider the prognostic value of individual factors. Patients and Method: 61 patients with histologically proven superficial urotelial bladder cancer were included into the study. The mRNA expression of PAX5 and Shb genes in the cancer tissue was detected by the reverse polymerase chain reaction (RT- PCR) and the result was expressed semiquantitatively. The presence of p53 mutations was recorded by SSCP (single strand conformation polymorphism) and confirmed by sequening. The immunohistological examination of p53 was made by using DO1 antibody and the result was expressed using semiquantitative evaluation by HSCORE (HS). 8 men created the control group for PAX5 and Shb expression evaluation. Their urotel sample was withdrawn during the operation of benign prostate hyperplasia. Results: The presence of PAX5 and Shb expression was proven in 50, let us say in 52 patients with urotelial cancer, but it was not proven in anybody of the control group. p53 mutation was recorded in one patient with pTaG2 tumour and it was localised in 5 exon (proline 128 deletion). Nuclear immunoreactivity of p53 was present in the majority of patients, 56,9% of patients had positive finding using the threshold value HS 200. The quantity of p53 immunohistochemical positivity did not correlate with the quantity of PAX5 expression. Using the threshold values of HS 200 for p53 and 0,2 for PAX5 the 7 of 8 progressing patients had supra-threshold HS value and 4 of them had supra-threshold PAX5 value. Conclusion: The PAX5 gene expression is an often finding in superficial urotelial urinary bladder cancers.
Focal adhesion kinase (FAK) is essential for vascular endothelial growth factor-A (VEGFA)/VEGF receptor-2 (VEGFR2)-stimulated angiogenesis and vascular permeability. We have previously noted that presence of the Src homology-2 domain adapter protein B (SHB) is of relevance for VEGFA-stimulated angiogenesis in a FAK-dependent manner. The current study was conducted in order address the temporal dynamics of co-localization between these components in HEK293 and primary lung endothelial cells (EC) by total internal reflection fluorescence microscopy (TIRF). An early (<2.5 min) VEGFA-induced increase in VEGFR2 co-localization with SHB was dependent on tyrosine 1175 in VEGFR2. VEGFA also enhanced SHB co-localization with FAK. FAK co-localization with VEGFR2 was dependent on SHB since it was significantly lower in SHB deficient EC after VEGFA addition. Absence of SHB also resulted in a gradual decline of VEGFR2 co-localization with FAK under basal (prior to VEGFA addition) conditions. A similar basal response was observed with expression of the Y1175F-VEGFR2 mutant in wild type EC. The distribution of focal adhesions in SHB-deficient EC was altered with a primarily perinuclear location. These live cell data implicate SHB as a key component regulating FAK activity in response to VEGFA/VEGFR2.
- MeSH
- adaptorové proteiny signální transdukční metabolismus MeSH
- endoteliální buňky metabolismus MeSH
- fokální adhezní tyrosinkinasy genetika metabolismus MeSH
- fyziologická neovaskularizace fyziologie MeSH
- HEK293 buňky MeSH
- lidé MeSH
- myši inbrední BALB C MeSH
- myši knockoutované MeSH
- myši MeSH
- pohyb buněk fyziologie MeSH
- protoonkogenní proteiny metabolismus MeSH
- receptor 2 pro vaskulární endoteliální růstový faktor metabolismus MeSH
- vaskulární endoteliální růstový faktor A genetika metabolismus MeSH
- zvířata MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- mužské pohlaví MeSH
- myši MeSH
- ženské pohlaví MeSH
- zvířata MeSH
- Publikační typ
- časopisecké články MeSH
- práce podpořená grantem MeSH
- MeSH
- chování sebezraňující epidemiologie komplikace psychologie MeSH
- lidé MeSH
- poruchy příjmu potravy epidemiologie komplikace psychologie MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- Publikační typ
- abstrakt z konference MeSH
To identify serum-inducible genes in the insulin-producing cell line beta TC-1, a library subtraction screening procedure was performed on serum-deprived (G0) and serum-restimulated (G1) insulin-producing beta TC-1 cells. A cDNA containing a motif with strong homology to Src homology 2 (SH2) domains was found using this procedure and called Shb. The Shb cDNA contains two methionine codons in its N-terminus and thus may code for two proteins of 67 and 56 kDa, each with one SH2 domain in its C-terminus. No other structural similarity to proteins with catalytic activity could be detected, suggesting that Shb is a so called adaptor. Shb contains the proline-rich sequence PPPGPGR between the two proposed initiator methionines which resembles a sequence for binding to Src homology 3 (SH3) domains. A second proline-rich sequence was detected after the second methionine codon. The Shb cDNA hybridized to a similar or identical mRNA of 3.1 kb expressed in mouse brain, liver, kidney, heart, NIH3T3 fibroblasts and beta TC-1 cells. Western blot analysis of the same tissues using an antiserum directed against a synthetic peptide corresponding to a part of the SH2 domain of Shb, revealed reactivity with two proteins of 56 and 67 kDa. In addition, a third reactive component of 40 kDa was detected in most tissues. Transfection and transient expression of the Shb cDNA in COS-1 cells yielded increased expression of the 67, 56 and 40 kDa proteins. Transfection and stable expression of the Shb cDNA in pig aortic endothelial cells showed increased expression primarily of the 67 kDa protein. A fusion protein consisting of the SH2 domain of Shb linked to glutathione S-transferase showed increased binding to glycoproteins of cells stimulated with platelet-derived growth factor (PDGF-BB). Furthermore, the autophosphorylated PDGF beta-receptor but not the autophosphorylated epidermal growth factor (EGF) receptor bound specifically to immobilized fusion protein. It is concluded that Shb is a novel SH2-containing protein with proline-rich domains and therefore probably involved in the signal-transduction of some ligand-activated tyrosine kinase receptors.
- MeSH
- adaptorové proteiny signální transdukční * MeSH
- buněčné linie MeSH
- geny src * MeSH
- komplementární DNA chemie MeSH
- Langerhansovy ostrůvky metabolismus MeSH
- lidé MeSH
- molekulární sekvence - údaje MeSH
- myši MeSH
- protoonkogenní proteiny * analýza fyziologie MeSH
- regulace genové exprese MeSH
- sekvence aminokyselin MeSH
- sekvence nukleotidů MeSH
- sekvenční homologie aminokyselin MeSH
- signální transdukce MeSH
- tyrosinkinasy fyziologie MeSH
- zvířata MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- myši MeSH
- zvířata MeSH
- Publikační typ
- práce podpořená grantem MeSH
- MeSH
- chování mladistvých psychologie MeSH
- chování sebezraňující klasifikace terapie MeSH
- lidé MeSH
- neurotické poruchy farmakoterapie klasifikace terapie MeSH
- poruchy chování u dětí klasifikace psychologie terapie MeSH
- přehledová literatura jako téma MeSH
- sebepoškozování klasifikace psychologie terapie MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
