- MeSH
- akutní lymfatická leukemie genetika metabolismus patologie MeSH
- imunogenetika * MeSH
- lidé MeSH
- nádorové biomarkery genetika MeSH
- prognóza MeSH
- reziduální nádor genetika metabolismus patologie MeSH
- sekvenování celého genomu normy MeSH
- sekvenování transkriptomu normy MeSH
- transkriptom * MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- Publikační typ
- dopisy MeSH
- práce podpořená grantem MeSH
BACKGROUND: Bone marrow (BM) samples obtained from minimal residual disease (MRD)-negative children with B-cell acute lymphoblastic leukemia (B-ALL) were used in our laboratory as negative biological controls for the development of a neuroblastoma (NBL) flow-cytometric (FC) protocol. The accidental, but systematic, identification of rare cell populations (RCP) mimicking NBL cells (CD45- /CD56+ ) in these samples indicated the need for their thorough immunophenotypic identification, in order to elucidate their possible interference in NBL-MRD assessment. PROCEDURE: RCP observed in BM samples from 14 children recovering from BM aplasia due to intensive chemotherapy for B-ALL were investigated with the following markers: CD81, CD200, CD24, GD2, CD73, CD13, CD90, CD146, CD9, CD117, CD10, CD99, and NG2. BM samples from six newly diagnosed patients with NBL and an NBL cell line were simultaneously investigated as positive controls. RESULTS: The frequency of RCP in B-ALL BM samples was < 1/1 × 104 cells (bulky lysis), and their immunophenotypic profile was indicative of CD56+ mesenchymal stromal cells (MSCs) (CD45- , CD90+ , CD146+ , CD73+ ). Also, RCP expressed CD81 and CD200, simulating NBL cells. The most useful discriminative markers for CD56+ MSCs were CD13 and CD73. An appropriate protocol consisting of two tubes with seven color combinations was further proposed: SYTO-16, GD2 (first tube) or CD73 (second tube)-PE, CD24-ECD, CD13-PC5.5, CD45-PC7, CD81-APC, and CD56-APC700. CONCLUSIONS: RCP that were immunophenotypically similar to NBL were identified as CD56+ MSCs. As these cells might pose an obstacle to accurate NBL disease assessment by FC, especially MRD, an enhanced NBL-FC protocol is proposed for prospective evaluation.
- MeSH
- antigen CD56 metabolismus MeSH
- antigeny CD45 metabolismus MeSH
- imunofenotypizace MeSH
- kostní dřeň metabolismus patologie MeSH
- lidé MeSH
- mezenchymální kmenové buňky metabolismus patologie MeSH
- následné studie MeSH
- neuroblastom diagnóza etiologie metabolismus MeSH
- pre-B-buněčná leukemie komplikace metabolismus MeSH
- předškolní dítě MeSH
- prognóza MeSH
- prospektivní studie MeSH
- průtoková cytometrie MeSH
- reziduální nádor etiologie metabolismus patologie MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- mužské pohlaví MeSH
- předškolní dítě MeSH
- ženské pohlaví MeSH
- Publikační typ
- časopisecké články MeSH
- práce podpořená grantem MeSH
BACKGROUND: Minimal residual disease (MRD) is an important prognostic maker in acute lymphoblastic leukemia (ALL). However, few data comparing the measurement of adult ALL MRD using different methods in daily practice are available. We conducted an analysis comparing the importance of flow cytometry (FCM) and real-time quantitative polymerase chain reaction (PCR) in the assessment of MRD in adult ALL. PATIENTS AND METHODS: Fifty-six consecutive adult patients with both Philadelphia-negative and -positive ALL treated according to an intensive protocol were enrolled in the study. Bone marrow samples were acquired on day 26 and during week 11 of treatment. MRD evaluation was performed using 8-color FCM and PCR of immunoglobulin or T-cell receptor gene clonal rearrangements and BCR-ABL1, KMT2A-AF4 and E2A-PBX1 fusion genes. RESULTS: On day 26, both FCM and PCR seemed to have good discrimination sensitivity for overall survival (P = .001 to .008) and progression-free survival (P = .03 to .04) prediction for both Philadelphia-positive and -negative cases. The most sensitive method in week 11 was PCR including all results > 0 considered to indicate MRD positivity (P = .002 for overall survival and P = .02 for progression-free survival). PCR with other cutoffs was not sufficiently sensitive in week 11. Moreover, no FCM+ samples were found in week 11. The subanalysis of the Philadelphia-negative patients showed similar results. CONCLUSION: Our analysis showed that both FCM and PCR MRD assessment methods are sensitive for survival prediction during induction. However, we believe FCM could not be sufficiently sensitive in later phases of treatment.
- MeSH
- akutní lymfatická leukemie terapie MeSH
- dospělí MeSH
- kostní dřeň MeSH
- kvantitativní polymerázová řetězová reakce metody MeSH
- lidé středního věku MeSH
- lidé MeSH
- míra přežití MeSH
- mladiství MeSH
- mladý dospělý MeSH
- následné studie MeSH
- prognóza MeSH
- průtoková cytometrie metody MeSH
- retrospektivní studie MeSH
- reziduální nádor diagnóza etiologie metabolismus MeSH
- senioři MeSH
- transplantace kmenových buněk škodlivé účinky MeSH
- Check Tag
- dospělí MeSH
- lidé středního věku MeSH
- lidé MeSH
- mladiství MeSH
- mladý dospělý MeSH
- mužské pohlaví MeSH
- senioři MeSH
- ženské pohlaví MeSH
- Publikační typ
- časopisecké články MeSH
- práce podpořená grantem MeSH
- srovnávací studie MeSH
In chronic lymphocytic leukemia (CLL) the level of minimal residual disease (MRD) after therapy is an independent predictor of outcome. Given the increasing number of new agents being explored for CLL therapy, using MRD as a surrogate could greatly reduce the time necessary to assess their efficacy. In this European Research Initiative on CLL (ERIC) project we have identified and validated a flow-cytometric approach to reliably quantitate CLL cells to the level of 0.0010% (10(-5)). The assay comprises a core panel of six markers (i.e. CD19, CD20, CD5, CD43, CD79b and CD81) with a component specification independent of instrument and reagents, which can be locally re-validated using normal peripheral blood. This method is directly comparable to previous ERIC-designed assays and also provides a backbone for investigation of new markers. A parallel analysis of high-throughput sequencing using the ClonoSEQ assay showed good concordance with flow cytometry results at the 0.010% (10(-4)) level, the MRD threshold defined in the 2008 International Workshop on CLL guidelines, but it also provides good linearity to a detection limit of 1 in a million (10(-6)). The combination of both technologies would permit a highly sensitive approach to MRD detection while providing a reproducible and broadly accessible method to quantify residual disease and optimize treatment in CLL.
- MeSH
- CD antigeny metabolismus MeSH
- chronická lymfatická leukemie patologie terapie MeSH
- dospělí MeSH
- imunofenotypizace MeSH
- kombinovaná terapie MeSH
- lidé MeSH
- mladiství MeSH
- mladý dospělý MeSH
- následné studie MeSH
- prognóza MeSH
- průtoková cytometrie normy MeSH
- reziduální nádor diagnóza genetika metabolismus MeSH
- staging nádorů MeSH
- vysoce účinné nukleotidové sekvenování metody MeSH
- Check Tag
- dospělí MeSH
- lidé MeSH
- mladiství MeSH
- mladý dospělý MeSH
- mužské pohlaví MeSH
- ženské pohlaví MeSH
- Publikační typ
- časopisecké články MeSH
- práce podpořená grantem MeSH
- Geografické názvy
- Evropa MeSH
Cíl: Objasnění patologicko-anatomického korelátu k intenzitě peroperačně zaznamenané fluorescence. Během fluorescencí navigované resekce glioblastomu mohou být v chirurgickém poli identifikovány tři různé intenzity fluorescence posuzované tkáně za použití kyseliny 5-aminolevulinové: 1. červená, silně intenzivní zóna fluorescence; 2. růžová, slabě intenzivní zóna fluorescence; 3. tkáň bez fluorescence. Soubor a metodika: Soubor 13 pacientů s multiformním glioblastomem, u kterých byly odebrány reprezentativní vzorky tkáně z příslušných zón intenzity fluorescence k histopatologickému hodnocení. Semikvantitativní metoda byla použita pro hodnocení podílu maligních buněk ve tkáni. Výsledky: Silně intenzivní zóna fluorescence vykazovala při histologickém hodnocení 75–100% podíl infiltrace nádorových buněk. V zóně se slabou intenzitou fluorescence dosahovala infiltrace 50–75 %, přičemž ve dvou případech byla zaznamenána koexistence glioblastomu a low grade gliomu. V zóně bez fluorescence byly v šesti případech vzorky negativní, v sedmi případech však dosahovalo proporcionální zastoupení maligních buněk kolem 25 % tkáně vzorku. Korelace mezi intenzitou fluorescence a relativním zastoupením maligních buněk ve tkáni dosáhla statistické významnosti (p < 0,001) a potvrdila se vysoká prediktivní hodnota fluorescence pro přítomnost nádorových buněk (PPV = 92 %). Závěr: Intenzita fluorescence během operace koreluje s proporcionálním zastoupením maligních buněk ve tkáni. Přítomnost maligních buněk byla prokázána i za hranicí pozitivity fluorescence ve více než polovině případů.
Aim: To ascertain correlation between histological findings and the intensity of intraoperative fluorescence. During 5-aminolevulinic acid fluorescence-guided glioblastoma resection, three different levels of fluorescence intensity of the examined tissue can be distinguished in the operative field: 1. red, highly intensive fluorescence zone; 2. pink, moderately intensive fluorescence zone; 3. none, tissue without fluorescence. Groups and methods: A prospective study of 13 patients who underwent fluorescence-guided glioblastoma surgery. Representative specimens of the corresponding levels of fluorescence intensity were collected for histological examination. The semi-quantitative method was used to evaluation relative proportion of malignant cells in the tissue. Results: The histological examination from the highly intensive fluorescence zone biopsy samples revealed 75–100% proportion of malignant cells in the tissue. The infiltration reached 50–75% of the examined tissue in the moderately intensive fluorescence zone, and co-existence of glioblastoma and low grade glioma was noted in two cases. In six cases, there were no malignant cells in the negative fluorescence zone. However, seven specimens were positive for malignant cells, with the infiltration rate around 25% of the tissue. The correlation between the fluorescence intensity and the relative proportion of malignant cells in the tissue was statistically significant (p value < 0.001), and high positive predictive value of the fluorescence for the presence of malignant cells (PPV = 92%) was observed. Conclusion: The intensity of intraoperative fluorescence correlates with the relative proportion of malignant cells in the tissue. The presence of malignant cells beyond observable fluorescence was confirmed in more than a half of the biopsy samples.
- Klíčová slova
- fluorescencí navigovaná resekce,
- MeSH
- falešně negativní reakce MeSH
- falešně pozitivní reakce MeSH
- fluorescence * MeSH
- fotosenzibilizující látky aplikace a dávkování MeSH
- glioblastom * chirurgie patologie MeSH
- imunohistochemie MeSH
- kyselina aminolevulová aplikace a dávkování MeSH
- lidé MeSH
- mikrochirurgie MeSH
- nádory mozku chirurgie patologie MeSH
- neurochirurgické výkony MeSH
- peroperační doba * MeSH
- prediktivní hodnota testů MeSH
- prospektivní studie MeSH
- reziduální nádor chirurgie metabolismus patologie MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
Overexpressed Wilms tumor gene 1 (WT1) has been found in a majority of patients with acute myeloid leukemia (AML). The aim of this study was to confirm the applicability of WT1 expression measurement as a marker of minimal residual disease (MRD). The expression of WT1 gene was measured by real-time polymerase chain reaction in peripheral blood (PB) according to European Leukemia Net (ELN) recommendations. The WT1 expression was related to the expression of a reference gene Abelson (ABL) and the results were calculated as a number of WT1 copies related to 104 copies of ABL gene. The upper normal limit of WT1 expression was set at 50 copies of WT1 to 104 copies of ABL. Morphological, flow cytometry and chimerism examinations were evaluated according to standard protocols.A total of 51 AML patients with overexpressed WT1 gene were analyzed. The median follow-up after transplantation was 14 (2-72) months. WT1 expression levels exceeding the upper normal limit were considered as a sign of impending hematological relapse, in accord with morphological, flow cytometry and chimerism data, as well as with the expression of the specific fusion genes. Moreover, in 7 patients the rise of WT1 expression preceded all other standard methods. Patients with high WT1 expression before allogeneic hematopoietic stem cell transplantation (allo-HSCT) had significantly worse outcome than patients with low WT1 level. Examination of WT1 expression in PB of patients with AML is a useful tool for MRD monitoring. Moreover, the WT1 gene expression before stem cell transplantation seems to be of prognostic significance.
- MeSH
- akutní myeloidní leukemie metabolismus mortalita terapie MeSH
- časná detekce nádoru MeSH
- dospělí MeSH
- homologní transplantace MeSH
- lidé středního věku MeSH
- lidé MeSH
- lokální recidiva nádoru diagnóza metabolismus mortalita MeSH
- míra přežití MeSH
- mladý dospělý MeSH
- následné studie MeSH
- prognóza MeSH
- proteiny WT1 genetika metabolismus MeSH
- reziduální nádor diagnóza metabolismus mortalita MeSH
- staging nádorů MeSH
- transplantace kmenových buněk * MeSH
- Check Tag
- dospělí MeSH
- lidé středního věku MeSH
- lidé MeSH
- mladý dospělý MeSH
- mužské pohlaví MeSH
- ženské pohlaví MeSH
- Publikační typ
- časopisecké články MeSH
- práce podpořená grantem MeSH
In mantle cell lymphoma (MCL), minimal residual disease (MRD) is an indicator of the disease outcome. Quantitative methods used so far do not provide a suitable molecular marker in 30-70% patients with MCL (depending on the technique used). We tested cyclin D1 as a marker for quantitative MRD monitoring. The real-time PCR of cyclin D1 mRNA was performed in 144 bone marrow (BM) specimens including 95 BMs from MCL patients, 39 BMs from patients with other B-cell non-Hodgkin's lymphomas and 10 BMs from healthy volunteer donors. In 73 BMs obtained from 20 MCL patients we examined the cyclin D1 level during the treatment and follow-up period. We detected a cyclin D1 overexpression exclusively in BMs infiltrated with MCL, including minimal residual infiltration. Dynamics of cyclin D1 correlated with the patient's clinical status in 69/73 BMs. Individual monitoring of patients during the disease course showed cyclin D1 quantitative changes accompanying either the disease relapse or a successful treatment response or the disease-free survival (remission) and it showed a predictive significance. Cyclin D1 detection is a promising approach for the quantitative MRD monitoring in MCL patients, and the individual monitoring of the cyclin D1 dynamics represents a suitable indicator of the disease course. (c) 2008 Wiley-Liss, Inc.
- MeSH
- cyklin D1 genetika metabolismus MeSH
- dospělí MeSH
- kostní dřeň metabolismus MeSH
- lidé středního věku MeSH
- lidé MeSH
- lymfom z plášťových buněk diagnóza metabolismus MeSH
- messenger RNA metabolismus MeSH
- nádorové biomarkery metabolismus MeSH
- polymerázová řetězová reakce MeSH
- prediktivní hodnota testů MeSH
- přežití bez známek nemoci MeSH
- prognóza MeSH
- regulace genové exprese u nádorů MeSH
- reziduální nádor diagnóza metabolismus MeSH
- senioři MeSH
- senzitivita a specificita MeSH
- studie případů a kontrol MeSH
- Check Tag
- dospělí MeSH
- lidé středního věku MeSH
- lidé MeSH
- mužské pohlaví MeSH
- senioři MeSH
- ženské pohlaví MeSH
- Publikační typ
- práce podpořená grantem MeSH
- MeSH
- akutní lymfatická leukemie farmakoterapie MeSH
- dítě MeSH
- fúzní onkogenní proteiny genetika MeSH
- lidé MeSH
- mladiství MeSH
- novorozenec MeSH
- přežití bez známek nemoci MeSH
- protinádorové látky terapeutické užití MeSH
- reziduální nádor metabolismus MeSH
- Check Tag
- dítě MeSH
- lidé MeSH
- mladiství MeSH
- novorozenec MeSH
