• MeSH
• dítě MeSH
• geny Wilmsova nádoru MeSH
• kojenec MeSH
• nádory ledvin MeSH
• Wilmsův nádor MeSH
• Check Tag
• dítě MeSH
• kojenec MeSH

• Konspekt
• Patologie. Klinická medicína
• NLK Obory
• onkologie
• biochemie
• nefrologie
• urologie

Molekulárně genetická charakterizace Wilmsova tumoru hraje důležitou roli v osvětlení genetických aspektů nádorového onemocnění obecně. Na rozdíl od geneze retinoblastomu, kde je při dvou zásazích inaktivován jediný gen, jsou biologické signalizační dráhy podmiňující vznik Wilmsova tumoru je ztráta heterozygozity na krátkém raménku chromozómu 11 nejčastější genetickou alterací, což svědčí o vyřazení jednoho nebo několika nádorových supresorových genů, které jsou lokalizovány v oblasti 11p. Nejlépe prostudovaným genem Wilmsova tumoru je gen WT1, který byl klonován a sekvenován. Biologická funkce proteinu WT1 je komplexní a pravděpodobně vyžaduje interakci s jinými proteiny, DNA, ale i RNA. Do rozvoje nádorů jsou zahrnuty nejen změny genetické, nýbrž i epigenetické, např. hypermetylace promotoru a genomový imprinting.

Molecular genetics of the Wilms' tumor plays an important role in the elucidation of the genetic etiology of the tumor disease generally. Contrary to the genesis of retinoblastoma, where a single gene is inactivated by two hits, the biological signalling pathways determining the origin of the Wilms' tumor are more complex and several genes in several loci may participate. Formation of the Wilms' tumor is accompanied with the most frequent genetic alteration, which is the loss of heterozygosity on the short arm of chromosome 11. It indicates inactivation of one or several tumor suppressor genes located at 11p region. The most studied gene of the Wilms' tumor is WT1 gene, which has been cloned and sequenced. Biological function of WT1 protein is complex one and it requires probably an interaction with other proteins, DNA and also RNA. The development of the tumor determines not only the genetic changes, but also epigenetic changes, e.g., hypermethylation of promoter and genome imprinting.

• MeSH
• chromozomální aberace MeSH
• finanční podpora výzkumu jako téma MeSH
• genomový imprinting MeSH
• regulační oblast lokusu (genu) MeSH
• Wilmsův nádor genetika   MeSH
• Publikační typ
• přehledy MeSH

• MeSH
• genom lidský MeSH
• geny Wilmsova nádoru MeSH
• mapování chromozomů MeSH

PURPOSE: Wilms tumor gene 1 (WT1), a zinc-finger transcription factor essential for testis development and function, along with other genes, was investigated for their role in the pathogenesis of testicular germ cell tumors (TGCT). METHODS: In total, 284 TGCT and 100 control samples were investigated, including qPCR for WT1 expression and BRAF mutation, p53 immunohistochemistry detection, and massively parallel amplicon sequencing. RESULTS: WT1 was significantly (p < 0.0001) under-expressed in TGCT, with an increased ratio of exon 5-lacking isoforms, reaching low levels in chemo-naïve relapsed TGCT patients vs. high levels in chemotherapy-pretreated relapsed patients. BRAF V600E mutation was identified in 1% of patients only. p53 protein was lowly expressed in TGCT metastases compared to the matched primary tumors. Of 9 selected TGCT-linked genes, RAS/BRAF and WT1 mutations were frequent while significant TP53 and KIT variants were not detected (p = 0.0003). CONCLUSIONS: WT1 has been identified as a novel factor involved in TGCT pathogenesis, with a potential prognostic impact. Distinct biologic nature of the two types of relapses occurring in TGCT has been demonstrated. Differential mutation rate of the key TGCT-related genes has been documented.

• MeSH
• down regulace MeSH
• fenotyp MeSH
• genetická predispozice k nemoci MeSH
• geny ras * MeSH
• germinální a embryonální nádory enzymologie   genetika   patologie   MeSH
• imunohistochemie MeSH
• kvantitativní polymerázová řetězová reakce MeSH
• lidé MeSH
• mutace * MeSH
• mutační analýza DNA metody   MeSH
• nádorové biomarkery genetika   MeSH
• nádorové buněčné linie MeSH
• nádorový supresorový protein p53 genetika   MeSH
• prospektivní studie MeSH
• proteiny WT1 genetika   MeSH
• protoonkogenní proteiny B-raf genetika   MeSH
• protoonkogenní proteiny c-kit genetika   MeSH
• retrospektivní studie MeSH
• studie proveditelnosti MeSH
• testikulární nádory enzymologie   genetika   patologie   MeSH
• vysoce účinné nukleotidové sekvenování MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• mužské pohlaví MeSH
• Publikační typ
• časopisecké články MeSH
• práce podpořená grantem MeSH

• MeSH
• diferenciální diagnóza MeSH
• dítě MeSH
• geny Wilmsova nádoru MeSH
• kojenec MeSH
• nádory ledvin MeSH
• novorozenec MeSH
• Wilmsův nádor diagnóza   patologie   terapie   MeSH
• Check Tag
• dítě MeSH
• kojenec MeSH
• novorozenec MeSH
• Publikační typ
• monografie MeSH

• Konspekt
• Pediatrie
• NLK Obory
• nefrologie
• onkologie
• pediatrie

Wilms' tumor gene 1 (WT1) is overexpressed in the majority (70-90%) of acute leukemias and has been identified as an independent adverse prognostic factor, a convenient minimal residual disease (MRD) marker and potential therapeutic target in acute leukemia. We examined WT1 expression patterns in childhood acute lymphoblastic leukemia (ALL), where its clinical implication remains unclear. Using a real-time quantitative PCR designed according to Europe Against Cancer Program recommendations, we evaluated WT1 expression in 125 consecutively enrolled patients with childhood ALL (106 BCP-ALL, 19 T-ALL) and compared it with physiologic WT1 expression in normal and regenerating bone marrow (BM). In childhood B-cell precursor (BCP)-ALL, we detected a wide range of WT1 levels (5 logs) with a median WT1 expression close to that of normal BM. WT1 expression in childhood T-ALL was significantly higher than in BCP-ALL (P<0.001). Patients with MLL-AF4 translocation showed high WT1 overexpression (P<0.01) compared to patients with other or no chromosomal aberrations. Older children (> or =10 years) expressed higher WT1 levels than children under 10 years of age (P<0.001), while there was no difference in WT1 expression in patients with peripheral blood leukocyte count (WBC) > or =50 x 10(9)/l and lower. Analysis of relapsed cases (14/125) indicated that an abnormal increase or decrease in WT1 expression was associated with a significantly increased risk of relapse (P=0.0006), and this prognostic impact of WT1 was independent of other main risk factors (P=0.0012). In summary, our study suggests that WT1 expression in childhood ALL is very variable and much lower than in AML or adult ALL. WT1, thus, will not be a useful marker for MRD detection in childhood ALL, however, it does represent a potential independent risk factor in childhood ALL. Interestingly, a proportion of childhood ALL patients express WT1 at levels below the normal physiological BM WT1 expression, and this reduced WT1 expression appears to be associated with a higher risk of relapse.

• MeSH
• akutní lymfatická leukemie diagnóza   genetika   krev   MeSH
• analýza přežití MeSH
• chromozomální aberace MeSH
• diagnostické techniky molekulární * metody   MeSH
• dítě MeSH
• kojenec MeSH
• kostní dřeň metabolismus   MeSH
• lidé MeSH
• mladiství MeSH
• následné studie MeSH
• novorozenec MeSH
• polymerázová řetězová reakce s reverzní transkripcí metody   MeSH
• předškolní dítě MeSH
• prognóza MeSH
• proteiny WT1 * genetika   MeSH
• recidiva MeSH
• regulace genové exprese u leukemie * MeSH
• reziduální nádor * diagnóza   genetika   MeSH
• rizikové faktory MeSH
• věkové faktory MeSH
• Check Tag
• dítě MeSH
• kojenec MeSH
• lidé MeSH
• mladiství MeSH
• mužské pohlaví MeSH
• novorozenec MeSH
• předškolní dítě MeSH
• ženské pohlaví MeSH
• Publikační typ
• práce podpořená grantem MeSH

• MeSH
• finanční podpora výzkumu jako téma MeSH
• geny Wilmsova nádoru fyziologie   MeSH
• glomerulus anatomie a histologie   fyziologie   MeSH
• krysa rodu rattus MeSH
• proliferace buněk MeSH
• techniky in vitro MeSH
• Check Tag
• krysa rodu rattus MeSH

Approximately one third of children with steroid-resistant nephrotic syndrome (SRNS) carry pathogenic variants in one of the many associated genes. The WT1 gene coding for the WT1 transcription factor is among the most frequently affected genes. Cases from the Czech national SRNS database were sequenced for exons 8 and 9 of the WT1 gene. Eight distinct exonic WT1 variants in nine children were found. Three children presented with isolated SRNS, while the other six manifested with additional features. To analyze the impact of WT1 genetic variants, wild type and mutant WT1 proteins were prepared and the DNA-binding affinity of these proteins to the target EGR1 sequence was measured by microscale thermophoresis. Three WT1 mutants showed significantly decreased DNA-binding affinity (p.Arg439Pro, p.His450Arg and p.Arg463Ter), another three mutants showed significantly increased binding affinity (p.Gln447Pro, p.Asp469Asn and p.His474Arg), and the two remaining mutants (p.Cys433Tyr and p.Arg467Trp) showed no change of DNA-binding affinity. The protein products of WT1 pathogenic variants had variable DNA-binding affinity, and no clear correlation with the clinical symptoms of the patients. Further research is needed to clarify the mechanisms of action of the distinct WT1 mutants; this could potentially lead to individualized treatment of a so far unfavourable disease.

• MeSH
• dítě MeSH
• DNA terapeutické užití   MeSH
• léková rezistence MeSH
• lidé MeSH
• mutace MeSH
• nefrotický syndrom * farmakoterapie   genetika   metabolismus   MeSH
• proteiny WT1 * genetika   metabolismus   MeSH
• steroidy farmakologie   MeSH
• Check Tag
• dítě MeSH
• lidé MeSH
• Publikační typ
• časopisecké články MeSH

Východisko. U většiny pacientů s akutní myeloidní leukémií nebyl dosud nalezen vhodný specifický marker pro monitorovaní minimální reziduální nemoci (MRN). Výsledky publikované v některých pracích navrhují gen Wilmsova tumoru 1 (WT1) jako potencionální marker MRN. V naší studii jsme sledovali expresi genu WT1 při diagnóze a v průběhu léčby u pacientů s akutní myeloidní leukémií. Metody a výsledky. Exprese genu WT1 byla měřena metodou kvantitativní RT-PCR v reálném čase v leukocytech periferní krve 56 pacientů s AML při diagnóze a 7 pacientů s AML transformovanou z myelodysplastických syndromů (MDS). Exprese genu WT1 byla u pacientů signifikantně zvýšena ve srovnání s hladinou jeho exprese v leukocytech periferní krve zdravých dárců (P<0,0001). Nejvyšší expresi genu WT1 jsme nalezli u pacientů s AML se subtypem M4, M1, M3 a u AML transformované z MDS. Naopak pacienti se subtypem M2 a s přítomností fúzního genu AML1/ETO při diagnóze vykazovali signifikantně nižší expresi genu WT1 než ostatní pacienti s AML. Dále jsme sledovali expresi genu WT1 v průběhu léčby u 12 pacientů AML souběžně s expresí specifických markerů minimální reziduální nemoci fúzních genů: AML1/ETO, PML/RAR a CBFB/MYH11. Exprese genu WT1 a výše zmíněných specifických markerů MRN korelovala na vysoké hladině signifikance. Rovněž jsme sledovali expresi genu WT1 v průběhu onemocnění u 14 pacientů bez přítomnosti specifického markeru MRN. Hematologické relapsy u těchto pacientů byly spojeny s paralelním nárůstem exprese genu WT1 a příslušných specifických markerů MRN. U čtyřech dlouhodobě sledovaných pacientů jsme pozorovali nárůst exprese genu WT1 nad hladinu u zdravých dárců (molekulární relaps) s výrazným předstihem před hematologickým relapsem. Závěry. Naše výsledky ve shodě s některými již publikovanými pracemi ukazují na možnost sledování exprese genu WT1 u AML jakožto vhodného markeru MRN.

Background. Despite a considerable effort, the majority of acute myeloid leukaemia (AML) patients do not have a suitable specific molecular marker for monitoring minimal residual disease (MRD). The results of some studies suggest the Wilms tumour gene (WT1) as a possible molecular marker of MRD. Methods and Results. We measured the expression of WT1 at diagnosis and during treatment of the acute myeloid leukaemia (AML) patients. The expression of WT1 was measured by the quantitative real-time RT-PCR in peripheral leukocytes from 56 AML at diagnosis and 7 patients with AML transformed from myelodysplastic syndromes (MDS). The WT1 expression was significantly elevated (up to 3 orders of magnitude) in peripheral blood samples (PB) of AML patients at diagnosis compared to PB samples of healthy donors (P<0.0001). The level of WT1 expression depends particularly on FAB AML subtype, with the highest being found in AML patients with subtypes M4, M1, M3 and AML transformed from MDS. Conversely, AML patients with M2 and with the presence of AML1/ET0 at presentation showed a significantly lower expression of the WT1 gene compared to the remaining AML patients at presentation (P = 0,005). Further, sequence samples of 12 AML patients under long-term surveillance were tested for the WT1 expression in parallel with the expression of specific MRD markers - fusion genes: AML1/ETO, PML/RARα and CBFB/MYH11. The levels of WT1 gene expression and the above specific fusion genes significantly correlated. Moreover, 14 patients without the specific MRD marker were tested for the WT1 expression. The results show that haematological relapses were associated with the rise of expression of the specific fusion genes and with the WT1 gene expression. The rise of WT1 expression above the level seen in leucocytes from peripheral blood and/or bone marrow of healthy donors – in four patients under long-term surveillance the „molecular relapse” predicted ongoing haematological relapses as early as 2 months in advance. Conclusions. Our results, in accordance with some of the previously published ones, show that WT1 expression seems to be a suitable marker of minimal residual disease in AML patients.

• MeSH
• akutní myeloidní leukemie diagnóza   terapie   MeSH
• finanční podpora výzkumu jako téma MeSH
• leukemie diagnóza   terapie   MeSH
• lidé MeSH
• nádorové biomarkery krev   MeSH
• polymerázová řetězová reakce s reverzní transkripcí metody   MeSH
• regulace genové exprese u nádorů MeSH
• retrospektivní studie MeSH
• reziduální nádor diagnóza   terapie   MeSH
• Wilmsův nádor diagnóza   terapie   MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• mužské pohlaví MeSH
• ženské pohlaví MeSH

Wilms' tumor gene 1 (WT1) functions including some contradictory effects may be explained by the presence and interactions of its isoforms, however, their evaluation has been so far complicated by several technical problems. We designed unique quantitative PCR systems for direct quantification of the major WT1 isoforms A[EX5-/KTS-], B[+/-], C[-/+] and D[+/+] and verified their sensitivity, specificity and reproducibility in extensive testing. With this method we evaluated WT1 total and isoform expression in 23 normal bone marrow (BM) samples, 73 childhood acute myeloid leukemia (AML), 20 childhood myelodysplastic syndrome (MDS), 9 childhood severe aplastic anemia (SAA), 30 adult AML and 29 adult MDS patients. WT1 isoform patterns showed differences among these samples and clustered them into groups representing the specific diagnoses (P<0.0001). Isoform profiles were independent of total WT1 expression and possess certain common features-overexpression of isoform D and EX5[+] variants. The KTS[+]/KTS[-] ratio was less variable than the EX5[+]/EX5[-] ratio and differed between children and adults (P<0.001); the EX5[+]/EX5[-] ratio varied between diagnoses (AML vs MDS, P<0.001). These findings bring new insights into WT1 isoform function and suggest that the ratio of WT1 isoforms, particularly EX5 variants, is probably crucial for the process of malignant transformation.

• MeSH
• akutní myeloidní leukemie genetika   MeSH
• dítě MeSH
• dospělí MeSH
• kojenec MeSH
• kvantitativní polymerázová řetězová reakce MeSH
• lidé středního věku MeSH
• lidé MeSH
• messenger RNA genetika   MeSH
• mladiství MeSH
• mladý dospělý MeSH
• nádorové buňky kultivované MeSH
• novorozenec MeSH
• předškolní dítě MeSH
• protein - isoformy MeSH
• proteiny WT1 genetika   MeSH
• senioři MeSH
• Check Tag
• dítě MeSH
• dospělí MeSH
• kojenec MeSH
• lidé středního věku MeSH
• lidé MeSH
• mladiství MeSH
• mladý dospělý MeSH
• mužské pohlaví MeSH
• novorozenec MeSH
• předškolní dítě MeSH
• senioři MeSH
• Publikační typ
• časopisecké články MeSH
• práce podpořená grantem MeSH