The transcription factor p73 is homologous to the well-known tumor-suppressor p53. The p73-regulated networks are of significant clinical interest, because they may substitute for impaired p53-regulated networks which are commonly perturbed in cancer. Herein, we aimed to characterize a p73-regulated network that mediates cell migration and restores anti-oncogenic responses in p53-mutant cancer cells. In this study, we demonstrate that p73 regulates a network underlying cell migration, which consists of MIR34A/MIR3158/vimentin/β-catenin/lef1. The p73 isoforms transactivate the miRNA components (MIR34A/MIR3158) of this network, which in turn, downregulate their EMT-related mRNA co-targets (vimentin/β-catenin/lef1) to decrease cell-migration. Modulation of this network, by increasing the level of the novel p73-dependent target MIR3158, was found to induce anti-oncogenic/anti-invasive responses in p53-mutant cancer cells. Taken together, a p73-regulated, MIR3158-containing, network restores anti-invasive phenotypes in p53-mutant cancer cells; this property could be exploited towards the development of anticancer therapeutics.

• MeSH
• epitelo-mezenchymální tranzice genetika   MeSH
• invazivní růst nádoru MeSH
• lidé MeSH
• mikro RNA genetika   MeSH
• osteosarkom genetika   MeSH
• pohyb buněk MeSH
• protein p73 genetika   MeSH
• transfekce MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• Publikační typ
• časopisecké články MeSH

p73 is a member of the p53 protein family and has essential functions in several signaling pathways involved in development, differentiation, DNA damage responses and cancer. As a transcription factor, p73 achieves these functions by binding to consensus DNA sequences and p73 shares at least partial target DNA binding sequence specificity with p53. Transcriptional activation by p73 has been demonstrated for more than fifty p53 targets in yeast and/or human cancer cell lines. It has also been shown previously that p53 binding to DNA is strongly dependent on DNA topology and the presence of inverted repeats that can form DNA cruciforms, but whether p73 transcriptional activity has similar dependence has not been investigated. Therefore, we evaluated p73 binding to a set of p53-response elements with identical theoretical binding affinity in their linear state, but different probabilities to form extra helical structures. We show by a yeast-based assay that transactivation in vivo correlated more with the relative propensity of a response element to form cruciforms than to its expected in vitro DNA binding affinity. Structural features of p73 target sites are therefore likely to be an important determinant of its transactivation function.

• MeSH
• aktivace transkripce MeSH
• konformace nukleové kyseliny MeSH
• kvasinky genetika   metabolismus   MeSH
• lidé MeSH
• nádorový supresorový protein p53 metabolismus   MeSH
• obrácené repetice * MeSH
• protein p73 chemie   genetika   metabolismus   MeSH
• sekvence nukleotidů MeSH
• vazba proteinů MeSH
• vazebná místa * MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• Publikační typ
• časopisecké články MeSH
• práce podpořená grantem MeSH

• MeSH
• finanční podpora výzkumu jako téma MeSH
• imunohistochemie MeSH
• lidé MeSH
• meduloblastom genetika   MeSH
• nádorový supresorový protein p53 MeSH
• neuroektodermové nádory genetika   MeSH
• pilotní projekty MeSH
• polymerázová řetězová reakce MeSH
• prognóza MeSH
• regulace genové exprese u nádorů genetika   imunologie   MeSH
• sekvence nukleotidů MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH

Základní část projektu bude provedena na upravené buněčné linii MDA-MB-468 odvozené od „triple negativního“ karcinomu mléčné žlázy. Tato buněčná linie inducibilně exprimuje protein p63 a umožní nám pomocí genomických a proteomických přístupů charakterizovat úlohu p63 a jeho izoforem v nádorové buňce a v její odpovědi na genotoxický stres. V bioptickém nádorovém materiálu bude exprese p63 a p73 analyzována na úrovni mRNA pomocí PCR v reálném čase (qRT-PCR) a na úrovni proteinů pomocí imunohistochemického barvení (IHC) a imunochemických metod. Intenzita exprese bude statisticky hodnocena ve vztahu k rutinně stanoveným klinicko-patologickým znakům nádorů, bezpříznakovému i celkovému přežití pacientek. Současně bude analyzována i exprese proteinů, předem vytipovaných na základě studie na buněčných liniích, jako potenciálních markerů citlivosti k cisplatině, případně dalším látkám. Cílem projektu je identifikace nových prediktivních a prognostických ukazatelů využitelných ke zefektivnění samotné terapie.; Primary experiments will be performed using MDA-MB-468 cell line derived from triple-negative breast carcinoma. Inducible expression of p63 protein in this cell line allows characterizing the role of p63 and its isoforms in cancer cell and in the cellular response to genotoxic stress using genomic and proteomic approaches. In the tumor biopsies, we will analyze the expression of p63 and p73 on the mRNA level by qRT-PCR and on the protein level by immunohistochemical staining (IHC) and immunochemical methods. The expression levels will be evaluated in correlation to clinico-patohological characteristics of tumors, to disease-free survival and to total survival of patients. Simultaneously, we will determine the expression levels of proteins selected on the basis of in vitro experiments with cell lines, which could play role of potential markers of sensitivity to cisplatin or to other antitumor drugs. The main objective of the project is to identify new predictive and prognostic markers in order to impro

• MeSH
• analýza přežití MeSH
• chemorezistence MeSH
• cisplatina MeSH
• exprese genu MeSH
• imunohistochemie metody   MeSH
• kvantitativní polymerázová řetězová reakce MeSH
• mikro RNA analýza   MeSH
• nádorové buněčné linie MeSH
• nádorové supresorové proteiny MeSH
• nádory prsu MeSH
• polymerázová řetězová reakce MeSH
• prediktivní hodnota testů MeSH
• prognóza MeSH
• protein p73 MeSH
• triple-negativní karcinom prsu MeSH

• Konspekt
• Biochemie. Molekulární biologie. Biofyzika
• NLK Obory
• molekulární biologie, molekulární medicína
• gynekologie a porodnictví
• onkologie
• NLK Publikační typ
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR

Projekt je zaměřen na získání informací, které povedou k bližšímu objasnění role p73 v molekulární patogenezi meduloblastomu, nejčastějšího maligního nádoru centrální nervové soustavy u dětí. Na modelu buněčných linií meduloblastomu bude imunodetekčnímimetodami analyzována konstituční a indukovaná exprese izoforem proteinu p73 a detailně popsána jejich subcelulární lokalizace. Stanovením expresních profilů metodou microarrays budou odhaleny rozdíly v genové expresi mezi jednotlivými buněčnými liniemi,a to především ve vztahu k bazální úrovni exprese TAp73 a DeltaNp73 izoforem a k funkčnímu statutu TP53. Microarrays umožní rovněž detekovat signální dráhy zapojené v řízení indukované diferenciace buněk meduloblastomu. Výsledky projektu povedou k hlubšímu pochopení procesu nádorové transformace u meduloblastomu na molekulárně genetické úrovni, z klinického pohledu pak přispějí k vývoji nových diagnostických a léčebných postupů tohoto medicínsky i společensky vysoce závažného onemocnění u dětí.; The aim of the proposed project is to gain a better understanding of the significance of p73 expression in tumorigenesis of medulloblastoma, the most common malignant brain tumor in children. Constitutive and retinoic acid-induced expression of p73 isoforms and its subcellular distribution will be described in detail by the use of immunodetection techniques. Expression profiling enables (i) to find out the differences in gene expression among the medulloblastoma cell lines, with respect to the TAp73 andDeltaNp73 constitutive expression and p53 functional status (ii) to detect the genes involved in the induced differentiation of medulloblastoma cells. Expected results are important for a better understanding of the pathophysiology of the disease and for the development of new diagnostic and therapeutic strategies.

• MeSH
• buněčná diferenciace MeSH
• cílená molekulární terapie MeSH
• dítě MeSH
• imunohistochemie metody   využití   MeSH
• meduloblastom terapie   MeSH
• mikročipová analýza MeSH
• nádorová transformace buněk MeSH
• nádorový supresorový protein p53 MeSH
• prediktivní hodnota testů MeSH
• receptory kyseliny retinové MeSH
• Check Tag
• dítě MeSH

• Konspekt
• Biochemie. Molekulární biologie. Biofyzika
• NLK Obory
• pediatrie
• onkologie
• neurologie
• biologie
• NLK Publikační typ
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR

• Klíčová slova
• proximity ligation assay,
• MeSH
• fluorescenční protilátková technika MeSH
• geny p53 * MeSH
• mapování interakce mezi proteiny * MeSH
• nádorové supresorové proteiny * MeSH
• nádorový supresorový protein p53 MeSH
• nádory patologie   MeSH
• oligonukleotidové sondy MeSH
• oligonukleotidy MeSH
• protein - isoformy MeSH
• protilátky MeSH
• Publikační typ
• práce podpořená grantem MeSH

The protein homologous to the tumor suppressor p53, p73, has essential roles in development and tumorigenesis. This protein exists in a wide range of isoforms with different, even antagonistic, functions. However, there are virtually no detailed morphological studies analyzing the endogenous expression of p73 isoforms at the cellular level in cancer cells. In this study, we investigated the expression and subcellular distribution of two N-terminal isoforms, TAp73 and ΔNp73, in medulloblastoma cells using immunofluorescence microscopy. Both proteins were observed in all cell lines examined, but differences were noted in their intracellular localization between the reference Daoy cell line and four newly established medulloblastoma cell lines (MBL-03, MBL-06, MBL-07 and MBL-10). In the new cell lines, TAp73 and ΔNp73 were located predominantly in cell nuclei. However, there was heterogeneity in TAp73 distribution in the cells of all MBL cell lines, with the protein located in the nucleus and also in a limited non-random area in the cytoplasm. In a small percentage of cells, we detected cytoplasmic localization of TAp73 only, i.e., nuclear exclusion was observed. Our results provide a basis for future studies on the causes and function of distinct intracellular localization of p73 protein isoforms with respect to different protein-protein interactions in medulloblastoma cells.

• MeSH
• buněčné jádro metabolismus   MeSH
• dítě MeSH
• DNA vazebné proteiny chemie   metabolismus   MeSH
• intracelulární prostor metabolismus   MeSH
• jaderné proteiny chemie   metabolismus   MeSH
• lidé MeSH
• meduloblastom metabolismus   patologie   MeSH
• nádorové buněčné linie MeSH
• nádorové supresorové proteiny chemie   metabolismus   MeSH
• předškolní dítě MeSH
• protein - isoformy metabolismus   MeSH
• transport proteinů MeSH
• Check Tag
• dítě MeSH
• lidé MeSH
• mužské pohlaví MeSH
• předškolní dítě MeSH
• ženské pohlaví MeSH
• Publikační typ
• časopisecké články MeSH
• práce podpořená grantem MeSH

TP73 is a member of the TP53 gene family and produces N- and C-terminal protein isoforms through alternative promoters, alternative translation initiation and alternative splicing. Most notably, p73 protein isoforms may either contain a p53-like transactivation domain (TAp73 isoforms) or lack this domain (ΔTAp73 isoforms) and these variants have opposing or independent functions. To date, there is a lack of well-characterised isoform-specific p73 antibodies. Here, we produced polyclonal and monoclonal antibodies to N-terminal p73 variants and the C-terminal p73α isoform, the most common variant in human tissues. These reagents show that TAp73 is a marker of multiciliated epithelial cells, while ΔTAp73 is a marker of non-proliferative basal/reserve cells in squamous epithelium. We were unable to detect ΔNp73 variant proteins, in keeping with recent data that this is a minor form in human tissues. Most cervical squamous cell carcinomas (79%) express p73α, and the distribution of staining in basal cells correlated with lower tumour grade. TAp73 was found in 17% of these tumours, with a random distribution and no association with clinicopathological features. These data indicate roles for ΔTAp73 in maintaining a non-proliferative state of undifferentiated squamous epithelial cells and for TAp73 in the production of differentiated multiciliated cells.

• MeSH
• epitelové buňky metabolismus   MeSH
• lidé MeSH
• monoklonální protilátky MeSH
• nádorové buněčné linie MeSH
• nádory děložního čípku metabolismus   patologie   genetika   MeSH
• nádory metabolismus   patologie   genetika   MeSH
• protein - isoformy * metabolismus   genetika   MeSH
• protein p73 * metabolismus   genetika   MeSH
• spinocelulární karcinom metabolismus   patologie   genetika   MeSH
• zvířata MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• ženské pohlaví MeSH
• zvířata MeSH
• Publikační typ
• časopisecké články MeSH

Východiska: Buněčná transformace způsobená virovou infekcí je komplexní proces, kterého se účastní virové molekuly, hostitelská buňka a faktory okolního prostředí. Viry nejsou schopné samostatné reprodukce, a proto využívají signální, proteosyntetické a metabolické dráhy hostitelské buňky. Jedním z cílů virových molekul je nádorový supresor p53. Proteiny onkogenních virů jsou schopné funkčně inaktivovat p53, a tím deregulovat expresi mnoha genů zúčastněných při apoptóze, proliferaci a buněčné odpovědi na poškození DNA. Proteiny HbX viru hepatitidy B a NS2 a NS5A viru hepatitidy C interagují s p53, znemožňují jeho lokalizaci do jádra, a tím snižují jeho transkripční aktivitu. Dalším způsobem inaktivace p53 je zvýšení jeho degradace, čehož využívá virus Epstein-Barrové prostřednictvím proteinu BZLF1, virus Kaposiho sarkomu skrze protein LANA a lidské papilomaviry za účasti proteinu E6. Velký T antigen lidského polyomaviru Merkelových buněk přímo neinteraguje s p53, ale snižuje úroveň transkripce zprostředkované p53. Tax protein lidského T buněčného lymfotropního viru 1 posttranslačně modifikuje p53 a brání jeho interakci s transkripčními kofaktory. Protein p53 je jedním z nejprostudovanějších proteinů kvůli své nádorové supresorové funkci a úloze při udržování integrity genomu buňky. Díky tomu jsou také intenzivně studovány jeho evolučně příbuzné homology p63 a p73, které hrají roli při vývoji organizmu. Jejich úloha v onkogenezi ještě nebyla úplně objasněna. Cíl: Tento přehledový článek popisuje dosud známé interakce proteinů p53, p63 a p73 s proteiny onkogenních virů.

Background: Cellular transformation induced by oncogenic viruses is a complex process including viral molecules, host cells and environmental factors. Viruses alone are unable to reproduce and thus they need a host to use their signalling, proteosynthetic and metabolic pathways. One target host molecule is the p53 tumour suppressor. Viral proteins functionally inactivate p53 and deregulate the expression of proteins active during apoptosis, cell proliferation and DNA damage response. Hepatitis virus B HbX protein and hepatitis virus C proteins NS2 and NS5A interact with p53 and prevent its localisation to the nucleus and thus reduce its transcriptional activity. Another mechanism lies in elevated p53 degradation caused by the BZLF1 protein of the Epstein-Barr virus, the LANA protein of the Kaposi sarcoma virus and human papilloma virus E6. The Merkel cell polyomavirus large T antigen does not interact directly with p53, however it acts through downregulation of p53 mediated transcription. The tax protein of human T cell lymphotropic virus type 1 modifies p53 posttranslationally and thus blocks its interaction with other factors of transcription machinery. Due to its tumour suppressor function and role in the maintenance of the genome integrity, the p53 protein is one of the best studied proteins. Following this, evolutionary homologues with important developmental functions p63 and p73 are intensively studied as well. Their roles in oncogenesis have not been clarified yet. Purpose: This review describes some of their known interactions with oncogenic viral proteins.

• Klíčová slova
• p63, p73,
• MeSH
• karcinogeneze * MeSH
• lidé MeSH
• nádorový supresorový protein p53 MeSH
• onkogenní proteiny virové * MeSH
• onkogenní viry MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• Publikační typ
• práce podpořená grantem MeSH
• přehledy MeSH

P53, P63, and P73 proteins belong to the P53 family of transcription factors, sharing a common gene organization that, from the P1 and P2 promoters, produces two groups of mRNAs encoding proteins with different N-terminal regions; moreover, alternative splicing events at C-terminus further contribute to the generation of multiple isoforms. P53 family proteins can influence a plethora of cellular pathways mainly through the direct binding to specific DNA sequences known as response elements (REs), and the transactivation of the corresponding target genes. However, the transcriptional activation by P53 family members can be regulated at multiple levels, including the DNA topology at responsive promoters. Here, by using a yeast-based functional assay, we evaluated the influence that a G-quadruplex (G4) prone sequence adjacent to the p53 RE derived from the apoptotic PUMA target gene can exert on the transactivation potential of full-length and N-terminal truncated P53 family α isoforms (wild-type and mutant). Our results show that the presence of a G4 prone sequence upstream or downstream of the P53 RE leads to significant changes in the relative activity of P53 family proteins, emphasizing the potential role of structural DNA features as modifiers of P53 family functions at target promoter sites.

• MeSH
• apoptóza genetika   MeSH
• DNA genetika   ultrastruktura   MeSH
• G-kvadruplexy * MeSH
• konformace nukleové kyseliny MeSH
• lidé MeSH
• membránové proteiny genetika   ultrastruktura   MeSH
• nádorový supresorový protein p53 genetika   ultrastruktura   MeSH
• promotorové oblasti (genetika) genetika   MeSH
• protein p73 genetika   ultrastruktura   MeSH
• proteiny regulující apoptózu genetika   MeSH
• protoonkogenní proteiny genetika   MeSH
• responzivní elementy genetika   MeSH
• Saccharomyces cerevisiae genetika   MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• Publikační typ
• časopisecké články MeSH
• práce podpořená grantem MeSH