Dendritic poly(L-lysines) (DGL) constitute promising nanomaterials applicable as a nonviral gene-delivery vector. In this study, we evaluate the transfection abilities of four DGL generations with special emphasis on the systematic description of the relationship of how generation (i.e., molecule size) affects the transfection efficacy. Using Hep2 cells, we demonstrated that the capability of unmodified DGL to deliver plasmid is of a magnitude lower than that of jetPEI. On the other hand, employing the Hep2 cell line stably transduced with eGFP, we observed that DGL G5 delivers the siRNA oligonucleotide with the same efficiency as Lipofectamine 2000. In further experiments, it was shown that DGL affords excellent ability to bind DNA, protect it against DNase I attack, and internalize it into cells.
- MeSH
- buněčné linie MeSH
- deoxyribonukleasa I metabolismus MeSH
- lidé MeSH
- lipidy MeSH
- malá interferující RNA MeSH
- molekulární sekvence - údaje MeSH
- oligonukleotidy metabolismus farmakokinetika MeSH
- plazmidy farmakokinetika MeSH
- polylysin chemie farmakokinetika MeSH
- sekvence nukleotidů MeSH
- transfekce metody MeSH
- viabilita buněk účinky léků MeSH
- vztahy mezi strukturou a aktivitou MeSH
- zelené fluorescenční proteiny genetika MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- Publikační typ
- časopisecké články MeSH
- práce podpořená grantem MeSH
Závěrečná zpráva o řešení grantu Interní grantové agentury MZ ČR
Přeruš. str. : il., tab. ; 31 cm
Úkolem této studie je porozumění změn v genové expresi na buněčné úrovni v souvislosti se zablokováním exprese COX1 resp. COX2 pomocí RNA interference (RNAi). Pomocí RNAi, syntetických siRNA nebo shRNA exprimujících plasmidů či retrovirů, budou vytvořenybuněčné linie se zablokovanou expresí COX1 resp. COX2. Profil genové exprese bude určen pomocí DNA mikročipů srovnáním s mateřskou linií a ověřením pomocí real-time PCR. Na základě prvních výsledků bude sestaven experimentální jednoúčelový DNA mikročipobsahující vybrané geny. Na základě výsledků bude posouzena fyziologická funkce COX1 a COX2 v souvislosti s absencí jedné z izoforem.; The aim of this study is to better understand the cellular gene expression changes upon the RNA interference (RNAi) mediated down-regulation of COX1 resp. COX2 gene expression. The corresponding cell-lines with COX1 resp. COX2 gene expression down regulated will be constructed via RNAi, the synthetic siRNA or plasmid or retrovirus mediated shRNA expression, respectively. The gene expression profile will be determined by DNA microarrays comparing the gene expression with parental cell-line. Based on theresults, experimental, single-purpose DNA microarray containing selected genes will be constructed. Altered physiological function of COX1 resp. COX2 in the absence of one of the isoforms will be discussed.
- MeSH
- cyklooxygenasa 1 fyziologie MeSH
- cyklooxygenasa 2 fyziologie MeSH
- exprese genu MeSH
- inhibitory cyklooxygenasy škodlivé účinky MeSH
- malá interferující RNA MeSH
- mikročipové analytické postupy MeSH
- polymerázová řetězová reakce MeSH
- RNA interference MeSH
- zánět MeSH
- Konspekt
- Biochemie. Molekulární biologie. Biofyzika
- NLK Obory
- biologie
- NLK Publikační typ
- závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR
Závěrečná zpráva o řešení grantu Interní grantové agentury MZ ČR
Přeruš. str. : il., tab. ; 30 cm
Úkolem této studie je vyhledání a ověření dalších markerů vzniku lékové rezistence (kromě již známých, jako MDR1 nebo BCRP) a vybraných případných genetických predisponujících faktorů. Získáním rezistentní buněčné linie a srovnáním exprese s mateřskou linií budou získána data, jejichž analýzou bude možné zjistit úlohu ABC transportérů při vzniku rezistence v souvislosti se změnou exprese dalších genů. Připravené nepříbuzné buněčné linie transfekované a zvýšeně exprimující daný ABC transportér budou použity při funkční studii a bude ověřena schopnost daného proteinu transportovat příslušné léčivo. Očekávaným výsledkem studie je vyhledání a funkční ověření genů podílejících se výraznou měrou na vzniku rezistence a použitelných dále jako markerů pro včasnou diagnostiku vznikající lékové rezistence.; The aim of this study is the search for and validation of more markers of drug resistance (among the known as MDR1, MRP1 or BCRP) and possible genetic predisposing factors. By comparing the gene expression profile of both the parental and resistant cell-line, the specific role of ABC transporters in emerging drug resistance in context of other genes expression will be determined. Cell-lines genetically modified to over-express selected ABC transporter will be used in functional study and the specific substrate transport will be determined. Expected result of this study is finding and verification of genes concerning multidrug resistance which should be used as a markers for drug resistance early diagnosis.
- MeSH
- ABC transportéry genetika MeSH
- biologické markery analýza MeSH
- hodnotící studie jako téma MeSH
- léková rezistence genetika MeSH
- P-glykoprotein analýza MeSH
- Konspekt
- Biochemie. Molekulární biologie. Biofyzika
- NLK Obory
- biologie
- farmacie a farmakologie
- farmacie a farmakologie
- NLK Publikační typ
- závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR
The retention behavior of the unmodified phosphodiester oligonucleotide sequence isomers was investigated on two different anion exchange columns: Biospher GMB 1000Q (based on DEAE-modified glycidyl methacrylate) and PolyWAX LP (based on silica with a crosslinked coating of linear polyethyleneimine). There was a notable difference in retention of oligonucleotides of the same composition but differing in the position of a single base. The most pronounced difference was observed between the oligonucleotides with the variable base in the end and in the center of the sequence. The use of either acetonitrile or 2-propanol as a mobile phase organic modifier did not markedly affect the retention time patterns. Prediction of the retention times of oligonucleotides must take into account the base position as well as identity. This is the first report of such a "same composition different sequence" effect, described for the short peptides, for synthetic oligonucleotides.
Antisense and antigene oligonucleotides (ONs) are attractive drugs for gene therapy, but major limiting factors for their routine use are inefficient cellular uptake and low accessibility to the target sites. Adding various lipophilic conjugates to the ON improves intracellular delivery as has been previously reported.We studied the cellular delivery of various ON modifications, as well as their cytosolic and nuclear distribution in mammalian Hep2-EGFP-NLS cell line. We compared uptake efficacy of ON and LNA, both conjugated with cholesterol at the 5' end. All ONs were 3' labeled with fluorescent Cy 5 dye. We made a comparison of the ONs uptake efficacy and the kinetics, both adding ONs to the culture medium, and using streptolysin-O (SL-O) permeabilization.The cellular uptake of each ON used in this study was visualized by fluorescent microscopy. We confirmed the results by FACS analysis. We determined the ratio between initial ON-chol concentration (0.4 microM) and the final amount in nucleus.SL-O can highly improve kinetics of ON delivery; not only into the cytoplasm but also to the nucleus, the presumed site of antigene ON action. The most effective nuclear uptake was observed when ON conjugated with cholesterol (ON-chol) and SL-O was used. Nuclear distribution of ON was reached within few minutes. In contrast, ON simply added to the medium reached cytoplasm only and the process of delivery took several hours. (Mol Cell Biochem 276: 61-69, 2005).
- MeSH
- antisense oligonukleotidy chemie metabolismus MeSH
- bakteriální proteiny farmakologie MeSH
- biologický transport účinky léků MeSH
- buněčné jádro metabolismus účinky léků MeSH
- buněčné linie MeSH
- cholesterol chemie metabolismus MeSH
- cytoplazma metabolismus účinky léků MeSH
- financování organizované MeSH
- fluorescenční mikroskopie MeSH
- kultivované buňky MeSH
- lidé MeSH
- oligonukleotidy chemie metabolismus MeSH
- průtoková cytometrie MeSH
- streptolysiny farmakologie MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
Závěrečná zpráva o řešení grantu Interní grantové agentury MZ ČR
Nestr. : tab., grafy ; 32 cm
Projekt je zaměřen na vývoj obecného systému pro multiplexní detekci bodových mutací v lidské proveditelnosti celé metody omezeným multiplexním způsobem; Project is focused on creating a system for multiplex detection of defined point mutations in human DNA,on feasibility study of every single step of the system and on feasibility study of the entire system as a whole.
- Konspekt
- Biochemie. Molekulární biologie. Biofyzika
- NLK Obory
- biologie
- NLK Publikační typ
- závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR
Závěrečná zpráva o řešení grantu Interní grantové agentury MZ ČR
Přeruš. str. : tab., grafy ; 32 cm
Detekce mutací v exonech 14,16,20,23 genu pro těžký řetězec beta-myosinu (MYH7) pomocí DGGE, SSCP na kapilární elektroforéze a přímé sekvenace. Mutace na DNA v genu MYH7 jsou častou příčinou familiárních hypertrofických kardiomyopatií.; Detetion of mutations in exons 14,16,20.23 of gene coding for heavy chain of B-myosin(MYH7)by means of DGGE,SSCP on capillary electrophoresis and direct sequencing. Mutations on DNA of MYH7 are frequent cause of familiar hypertrophic cardiomyopathies.
- MeSH
- familiární hypertrofická kardiomyopatie genetika MeSH
- genetické testování metody MeSH
- mutace MeSH
- polymerázová řetězová reakce MeSH
- polymorfismus konformace jednovláknové DNA MeSH
- těžké řetězce myosinu genetika MeSH
- Konspekt
- Patologie. Klinická medicína
- NLK Obory
- kardiologie
- biologie
- NLK Publikační typ
- závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR
- MeSH
- amplifikace genu MeSH
- dospělí MeSH
- exony MeSH
- hypertrofická kardiomyopatie genetika patologie MeSH
- lidé MeSH
- mutace MeSH
- srdeční myosiny genetika MeSH
- těžké řetězce myosinu genetika MeSH
- Check Tag
- dospělí MeSH
- lidé MeSH
- mužské pohlaví MeSH
- Publikační typ
- kazuistiky MeSH
