Smíšená lymfocytární reakce (MLC) T-lymfocytů s dendritickými buňkami je jedním ze základních nástrojů studia imunologických mechanismů. Tato práce přináší popis nové metodiky hodnocení alogenní a autologní MLC pomocí průtokové cytometrie a diferenciálního gatingu. Metoda je založena na časově omezené akvizici událostí a na jejich rozdělení podle hodnot forward a side scatteru. Gatována je jednak populace všech živých buněk (R1), dále populace živých neproliferujících buněk (R2) a populace mrtvých/apoptotických buněk (R4). Pomocí fluorescenčních mikrosfér (R3) je navíc možno vypočítat absolutní množství buněk ve stanoveném gatu. Pomocí 7-AAD exkluze bylo ověřeno, že zhruba 90 % 7-AAD pozitivních buněk se promítá do gatu R4, navíc poměr R1: R2 výtečně koreluje s procentem buněk pozitivních na aktivační/proliferační marker CD71. Příklady dalších výsledků dosažených touto metodikou jsou uvedeny v textu. Vzhledem k tomu, že metoda diferenciálního gatingu ve své základní podobě nevyžaduje užití žádné fluorescenční protilátky, umožňuje rychlý a levný skríning velkého množství vzorků bez použití radioaktivně značených nukleotidů.
Mixed lymphocyte reaction (MLC) of T-lymphocytes with dendritic cells is one of the basic tools for studying of immune reaction mechanisms. This work describes a new method of evaluation of allogeneic and autologous MLC by flow cytometry and differential gating. This method is based on fixed time acquisition of events and their sorting according to their forward and side scatter properties. Differential gating distinguishes populations of all living cells (R1), living nonproliferating cells (R2) and dead/apoptotic cells (R4). Addition of fluorescence microspheres (R3) enables the calculation of absolute number of cells in a given sample volume. Using the method of 7-AAD exclusion, we have shown that approximately 90% of 7-AAD positive cells project into the R4 gate. Moreover, there was an excellent correlation between the R1: R2 ratio and the percentage of cells positive for activation/proliferation marker CD71. The method of differential gating in its basic version does not require use of any fluorescent antibody and therefore is suitable for rapid screening of large number of samples at reasonable cost and without the use of radiolabeled nucleotides.
- MeSH
- annexin A5 diagnostické užití MeSH
- apoptóza účinky léků MeSH
- buněčné dělení imunologie MeSH
- lidé MeSH
- mnohočetný myelom krev terapie MeSH
- propidium diagnostické užití MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- Publikační typ
- kongresy MeSH
- MeSH
- aktivace lymfocytů účinky záření MeSH
- bromodeoxyuridin diagnostické užití MeSH
- buněčné dělení imunologie účinky léků MeSH
- DNA analýza MeSH
- lidé MeSH
- průtoková cytometrie metody statistika a číselné údaje MeSH
- syndromy imunologické nedostatečnosti diagnóza MeSH
- thymidin diagnostické užití MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- Publikační typ
- srovnávací studie MeSH
The human colorectal carcinoma (CRC)-associated Ag CO17-1A/GA733, originally defined by mAbs CO17-1A and GA733, has been a useful target in passive immunotherapy of CRC patients with mAb and in active immunotherapy with anti-idiotypic Abs mimicking the CO17-1A or GA733 epitope. Both approaches have targeted single epitopes. We investigated the capacity of full-length CO17-1A/GA733 Ag expressing multiple potentially immunogenic epitopes and encoded by recombinant adenovirus 5 (Ad5 GA733-2) to induce humoral, cellular, and/or protective immunity in mice. Ad5 GA733-2 induced Ag-specific Abs that reacted predominantly to CO17-1A- and GA733-unrelated epitopes on the Ag and lysed Ag-positive CRC targets in conjunction with effector cells. Ad5 GA733-2-immune mice developed Ag-specific, proliferative lymphocytes of Th1 type and cytolytic lymphocytes. The use of Ad5 GA733-2 to immunize mice bearing established syngeneic CRC cells transfected with the human Ag induced significant and specific tumor regression. Cured mice resisted rechallenge with human CO17-1A/GA733 Ag-negative parental CRC cells, suggesting that targeting the human Ag on the murine transfectants induced protective immunity to other Ag expressed by the parental tumor. These results may explain the high potency of the recombinant vaccine. Thus, rAd5 GA733-2 may have potential as a vaccine for CRC patients.
- MeSH
- Adenoviridae * imunologie MeSH
- antigeny nádorové * genetika imunologie MeSH
- antigeny virové genetika imunologie MeSH
- buněčné dělení genetika imunologie MeSH
- experimentální nádory genetika MeSH
- karcinom genetika imunologie patologie MeSH
- kolorektální nádory genetika imunologie patologie MeSH
- lidé MeSH
- myši inbrední BALB C MeSH
- myši MeSH
- regulace genové exprese u nádorů * imunologie MeSH
- zvířata MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- myši MeSH
- zvířata MeSH
- Publikační typ
- práce podpořená grantem MeSH
- Research Support, U.S. Gov't, P.H.S. MeSH
- MeSH
- buněčné dělení imunologie MeSH
- cytotoxicita imunologická MeSH
- cytotoxické T-lymfocyty MeSH
- myši MeSH
- námelové alkaloidy imunologie MeSH
- zvířata MeSH
- Check Tag
- myši MeSH
- zvířata MeSH
- Publikační typ
- techniky in vitro MeSH
- MeSH
- adjuvancia imunologická MeSH
- buněčné dělení imunologie účinky léků MeSH
- myši MeSH
- námelové alkaloidy aplikace a dávkování imunologie MeSH
- tvorba protilátek MeSH
- zvířata MeSH
- Check Tag
- myši MeSH
- zvířata MeSH
- Publikační typ
- techniky in vitro MeSH
