OBJECTIVE: Peptidylarginine deiminase 2 (PAD2) and PAD4 are expressed in the synovium of rheumatoid arthritis (RA) patients and catalyze citrullination of arginine residues in proteins targeted by anti-citrullinated protein antibodies (ACPAs). Little is known about the relative importance of PAD2 and PAD4 in generating citrullinated self-antigens. Here we investigate the ability of PAD2 and PAD4 to generate citrullinated targets for ACPAs in four human proteins. METHODS: Synovial fluid (SF) and plasma were collected from 42 RA patients. Human fibrinogen, human alpha-enolase (ENO1), human histone H3, and human serum albumin (HSA) were citrullinated in vitro by PAD2 or PAD4. The total degree of citrullination was determined using the anti-modified citrulline approach. Antibody binding to native and citrullinated proteins was measured by ELISA. RESULTS: ACPAs within pooled SF from multiple RA patients reacted equally well with, and cross-reacted with, PAD2- and PAD4-citrullinated fibrinogen. ACPAs from most individual patient SF and plasma samples bound equally well to PAD2- and PAD4-citrullinated fibrinogen or ENO1. When histone H3 was used as target, PAD4 was generally superior in generating epitopes recognized by ACPAs. No binding to citrullinated HSA was observed. CONCLUSION: In most patients, PAD2 and PAD4 are equally efficient in generating citrullinated target sites for ACPAs in fibrinogen and ENO1. The binding of autoantibodies to histone H3 was generally higher after citrullination with PAD4 than with PAD2. Citrullinated HSA is not a target for ACPAs.

• MeSH
• citrulinace MeSH
• fibrinogen imunologie   MeSH
• fosfopyruváthydratasa imunologie   MeSH
• histony imunologie   MeSH
• koncentrace vodíkových iontů MeSH
• lidé MeSH
• peptidylarginindeiminasy metabolismus   MeSH
• protilátky proti citrulinovaným peptidům metabolismus   MeSH
• rekombinantní proteiny metabolismus   MeSH
• revmatoidní artritida enzymologie   imunologie   MeSH
• sérový albumin imunologie   MeSH
• synoviální tekutina MeSH
• techniky in vitro MeSH
• vápník metabolismus   MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• Publikační typ
• časopisecké články MeSH
• práce podpořená grantem MeSH
• Research Support, N.I.H., Extramural MeSH

Pseudomonas aeruginosa is one of the pathogenic bacteria which utilize binding of the host plasminogen (Plg) to promote their invasion throughout the host tissues. In the present study, we confirmed that P. aeruginosa exhibits binding affinity for human plasminogen. Furthermore, we showed that the protein detected on the cell wall of P. aeruginosa and binding human plasminogen is an enolase-like protein. The hypothesis that alpha-enolase, a cytoplasmatic glycolytic enzyme, resides also on the cell surface of the bacterium was supported by electron microscopy analysis. The plasminogen-binding activity of bacterial cell wall outer membrane enolase-like protein was examined by immunoblotting assay.

• MeSH
• fosfopyruváthydratasa metabolismus   MeSH
• imunoblotting MeSH
• imunoelektronová mikroskopie MeSH
• lidé MeSH
• plazminogen metabolismus   MeSH
• proteiny vnější bakteriální membrány metabolismus   MeSH
• Pseudomonas aeruginosa enzymologie   metabolismus   MeSH
• vazba proteinů MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• Publikační typ
• časopisecké články MeSH

Eggs of sterlet are discharged outside into ambient aquatic environment where egg activation and fertilization occur. Effects of different activation media including freshwater and clay suspension on protein abundances of egg were quantified in sterlet Acipenser ruthenus. In-gel digestion and high resolution mass spectrometry were used for label-free protein quantification in the eggs of five females. No significant (p > 0.05) difference was found between protein abundances in eggs activated with different media. However, results showed significant (p < 0.05, fold change ≥2) reduction in the abundances of nine proteins including six glycoproteins, enolase and heat shock protein in activated groups compared to freshly ovulated eggs as control. The fact that abundance of proteasome subunit alpha significantly reduced only in eggs which were activated by clay suspension suggests that activation medium can somehow intervene with protein regulation during fertilization. In conclusion, external fertilization in sturgeon egg is accompanied by huge release of proteins into the external environment that may participate in the construction of a transient microenvironment around egg for attraction and protection of spermatozoa to ensure ensuing fertilization. Data are available via ProteomeXchange with identifier PXD006232.

• MeSH
• fertilizace * MeSH
• fosfopyruváthydratasa metabolismus   MeSH
• glykoproteiny metabolismus   MeSH
• ovum metabolismus   MeSH
• proteiny teplotního šoku metabolismus   MeSH
• proteom metabolismus   MeSH
• ryby metabolismus   MeSH
• zvířata MeSH
• Check Tag
• ženské pohlaví MeSH
• zvířata MeSH
• Publikační typ
• časopisecké články MeSH

Prevalence potravinové alergie na ryby a mořské plody v Evropě narůstá. Tyto potraviny obsahují vysoce stabilní alergeny, které mohou způ-sobovat závažné IgE mediované alergické reakce. Je tedy třeba dbát na správnou diagnostiku, která vzhledem ke zkřížené reaktivitě vyžaduje komplexní přístup. K přesnější diagnostice senzibilizace může výrazně přispět vyšetření hladin specifických IgE protilátek (sIgE). Nabídka extraktů a molekulárních komponent na stanovení sIgE se v posledních letech značně rozšířila.

The prevalence of food allergy to fish and seafood has been increasing in Europe. These kinds of foods contain highly stable allergens that can cause severe IgE-mediated allergic reactions. It is therefore necessary to pay attention to the precise diagnosis, which requires a comprehensive approach due to cross-reactivity. Testing of specific IgE antibodies (sIgE) levels may significantly contribute to the accurate diagnosis of sen-sitization. The range of extracts and molecular components for the determination of sIgE has expanded considerably in recent years.

• MeSH
• alergeny MeSH
• alergie na korýše * diagnóza   imunologie   krev   MeSH
• Anisakis imunologie   MeSH
• argininkinasa imunologie   MeSH
• fosfopyruváthydratasa imunologie   MeSH
• hmyzí proteiny imunologie   škodlivé účinky   MeSH
• imunoglobulin E krev   MeSH
• kolagen imunologie   MeSH
• lidé MeSH
• parvalbuminy imunologie   krev   MeSH
• potravinová alergie diagnóza   imunologie   krev   MeSH
• rybí proteiny * imunologie   škodlivé účinky   MeSH
• tropomyosin imunologie   MeSH
• vitelogeniny imunologie   krev   MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH

• MeSH
• fosfopyruváthydratasa chemie   MeSH
• imunohistochemie MeSH
• monoklonální protilátky MeSH
• osteoblasty chemie   metabolismus   MeSH

Optimalizace terapie cerebrovaskulárních poruch (CVD) je jedním z nejvýznamnějších zdravotních problémů. Současný léčebný režim CVD se často ukazuje jako nedostatečný. Hledání nových léků s cerebroprotektivními a antihypoxickými vlastnostmi je základním úkolem moderní medicíny a farmacie. Cytokinovým mechanismům ischemického poškození mozku se v poslední věnována zvyšující se pozornost v rámci klinické praxe i experimentálního výzkumu. Blokáda receptoru interleukin- 1 (IL-1) je perspektivní způsob cerebroprotekce, který vyžaduje hlubší studium jejích mechanismů. Článek přináší výsledky studie cerebroprotektivních a antihypoxických vlastností rekombinantního antagonisty IL-1 raleukinu na modelu bilaterální karotické okluze u potkanů. Antagonista rekombinantního receptoru IL-1 raleukin (15 mg/kg) neovlivnil bazální průtok krve v arteria carotis interna intaktních skupin zvířat. Zabránil však jeho poklesu přibližně trojnásobně v případě uzávěru obou společných karotid s následnou reperfuzí. Indikátory cerebroprotektivního účinku studovaného léku byly snížení acidotického posunu krve proudící z mozku u zvířat s ireverzibilní bilaterální karotidovou okluzí, neuronální degradací a oslabením.

Optimization of therapy of cerebrovascular disorders (CVD) is one of the most critical health problems. The current treatment regimen of CVD turns out to be often insufficient. Search for new drugs with cerebroprotective and antihypoxic properties is an essential task of modern medicine and pharmacy. Attention to cytokine mechanisms of ischemic brain damage in clinics and experimental research has been increased recently. Interleukin-1 (IL-1) receptor blockade is a perspective way of cerebroprotection that requires a more profound study of its mechanisms. The article contains the results of a study of cerebroprotective and antihypoxic properties of the recombinant IL-1 antagonist raleukin on a model of bilateral carotid occlusion in rats. Recombinant receptor antagonist IL-1 raleukin (15 mg/kg) did not affect basal blood flow in the internal carotid artery of intact group animals. Still, it prevented its decrease approximately three times in case of occlusion of both common carotid arteries followed by reperfusion. Indicators of the cerebroprotective effect of studied medication were reducing the acidotic blood shift flowing from the brain of animals with irreversible bilateral carotid occlusion, neuronal degradation, and weakening.

• MeSH
• antagonista receptoru pro interleukin 1 * aplikace a dávkování   terapeutické užití   MeSH
• fosfopyruváthydratasa účinky léků   MeSH
• ischemie mozku * krev   prevence a kontrola   MeSH
• modely u zvířat MeSH
• potkani Wistar MeSH
• zvířata MeSH
• Check Tag
• zvířata MeSH

Cíl práce: Externí hodnocení kvality z dlouhodobého pohledu ukazují, že výsledky analýz stejného vzorku různými imunoanalytickými metodami často nejsou porovnatelné. Našim cílem bylo hledat příčiny těchto diferencí. Materiál a metody: Práce vychází z výsledků získaných sedmi rozdílnými imunoanalytickými metodami: DELFIA (PerkinElmer), Elecsys 2010 (Roche), Kryptor (B.R.A.H.M.S.), enzymové imunoanalýzy na imunosorbentu DRG a tří imunoradiometrických metod (DiaSorin, Immunotech and Schering-CIS). Výsledky: Hodnotili jsme následující parametry: profil přesnosti jednotlivých metod, linearitu po ředění, výtěžnost (modifikovanou) a porovnatelnost imunoanalytických metod. Výsledky analýz u některých vzorků s nízkými koncentracemi NSE korelovaly dobře, zatímco jiné nesouhlasily (diference byla až pětinásobná), zvláště v případě uměle připravovaných kontrolních materiálů. Proto se jeví současná příprava kontrolních materiálů, prováděná bez standardizace, jako sporná. V oblasti hraničních hodnot nepřesahují rozdíly v analytických výsledcích biologických vzorků dvojnásobek. Kolísání hodnot výsledků vyšších než 100 μg/l bylo mezi rozdílnými metodami do 40 %. Všechny hodnocené imunoanalytické metody jsou vhodné a velmi dobře porovnatelné (Korelační koeficienty do 0,994). Závěr: Naše výsledky potvrzují očekávané interference matric, které se projevují zvláště v oblasti normálních a hraničních koncentrací NSE. Dalším zdrojem diskrepancí může být rozdílná afinita protilátek vůči izoenzymům αγ- a γγ-enolázy.

Objective: Long-term external quality assessments suggest that the individual results of different immunoassays are often not comparable. Our goal was to assess the possible sources of these differences. Methods: The paper is based on the results of analyses using seven different immunoassays: DELFIA (PerkinElmer), Elecsys 2010 (Roche), Kryptor (B.R.A.H.M.S.), the enzyme-linked immunosorbent assay DRG and three methods based on immunoradiometric assays (DiaSorin, Immunotech and Schering-CIS). Results: The following parameters were evaluated: precision profile of individual methods, linearity on dilution, modified recovery and comparability of immunoassays. The analytical results for certain low concentration specimens correlate well while others do not (up to five – fold difference), especially in the case of controls prepared synthetically. Therefore, the current non-standardized preparation of controls seems to be questionable. In the cut-off range, the difference in the results of native samples does not exceed its double value. The variation in values higher than 100 μg/l obtained with different assays is under 40 %. All the evaluated immunoassays are efficient and highly comparable (The correlation coefficients are up to 0.994). Conclusion: Our results confirm the expected matrix interference occurring especially in the range of normal and cut-off NSE concentrations. Another source of discrepancies can be put down to different antibody affinity to αγ- and γγ-enolase isoenzymes.

• MeSH
• fosfopyruváthydratasa imunologie   MeSH
• imunoanalýza metody   využití   MeSH
• imunologické testy klasifikace   využití   MeSH
• klinické laboratorní techniky klasifikace   využití   MeSH
• lidé MeSH
• řízení kvality MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH

Úvod a cíl: S100B protein a neuron specifická enoláza (NSE) jsou intenzivně zkoumané markery poškození CNS. Ověření referenční hodnot v séru a variability výsledků na čase odběru, pohlaví a věku jsou základní podmínky interpretace měřených hodnot. Matriál a metoda: Referenční interval jsme ověřili na 50 dobrovolnících, z nichž 10 mělo opakované odběry po 6 a 24 hodinách. Následně jsme analyzovali vliv věku, pohlaví, doby odběru na referenční meze, která byly stanoveny jako 95% percentil referenční skupiny. Výsledky a závěr: Zjistili jsem, že hodnoty NSE a S100B nevykazují klinicky významnou závislost na době odběru, pohlaví a věku. Hodnoty NSE mají vyšší variabilitu výsledků a cca 8 % vzorků muselo být vyloučeno z analýzy pro viditelnou hemolýzu. U S100B proteinu jsme zjistili vyšší horní referenční limit 0,2 μg/l, než je udávaný výrobcem; to však nemá zásadní klinický dopad na hodnocení výsledků.

Objective: S100B protein and neuron specific enolase (NSE) are nowadays intensively investigated as markers of central nervous system damage. Verification of reference values and result variability (biological) are basic conditions of results interpretation. Material and Methods: Reference intervals were verified on 50 volunteers, from them 10 had done repeatedly blood sampling after 6 and 24 hours from baseline. The influence of age, sex and time of sampling on reference cut offs were than analysed. Cut-offs were established as 95% percentile of marker level in analysed group. Results and conclusion: We found that, NSE and S100B levels do not show any clinically important dependence on the time of sampling, age and sex. NSE levels appear to have higher result variability and approximately 8% of samples had to be excluded from analysis due to visible haemolysis. We established a higher reference cut off for S100B – 0.2 μg/l, than manufacturer had set up, but it did not have any crucial effect on clinical evaluation of results.

• MeSH
• časové faktory MeSH
• finanční podpora výzkumu jako téma MeSH
• financování organizované MeSH
• fosfopyruváthydratasa krev   MeSH
• odběr biologického vzorku MeSH
• prediktivní hodnota testů MeSH
• proteiny S100 krev   MeSH
• referenční hodnoty MeSH
• sexuální faktory MeSH
• věkové faktory MeSH

• MeSH
• alfa-fetoproteiny imunologie   krev   MeSH
• choriogonadotropin imunologie   krev   MeSH
• dospělí MeSH
• fosfopyruváthydratasa imunologie   krev   MeSH
• karcinoembryonální antigen imunologie   krev   MeSH
• lidé MeSH
• nádorové biomarkery diagnostické užití   MeSH
• nádory plic diagnóza   MeSH
• Check Tag
• dospělí MeSH
• lidé MeSH
• mužské pohlaví MeSH
• ženské pohlaví MeSH

Cílem je zlepšení včasné diagnostiky poškození centrálního nervového systému a zlepšení hodnocení aktuálního stavu u nemocných, jejichž celkový stav neumožňuje klinické vyšetření. Bude vyhodnocována dynamika změn hladin sérových markerů S100B a NSE dle přesně definovaných časových intervalů a klinický stav pacientů bude hodnocen dle jednotného protokolu; The basis of the research is the monitoring of the dynamics in S100B protein and NSE levels at an early stage of CNS damage. The aim is to evaluate possibilities of the assessment of the current condition in patients whose general condition does not permit clinical examination. The dynamism of the changes in the levels of S100B protein and NSE will be assessed at the accurately define time periods and the clinical condition will be assessed by the uniform protocols.

• MeSH
• fosfopyruváthydratasa MeSH
• intrakraniální krvácení MeSH
• poranění mozku diagnóza   MeSH
• proteiny S100 analýza   MeSH
• subarachnoidální krvácení MeSH

• Konspekt
• Patologie. Klinická medicína
• NLK Obory
• neurologie
• traumatologie
• biochemie
• NLK Publikační typ
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR