Although methotrexate (MTX) is the most well-known antifolate included in many standard therapeutic regimens, substantial toxicity limits its wider use, particularly in pediatric oncology. Our study focused on a detailed analysis of MTX effects in cell lines derived from two types of pediatric solid tumors: medulloblastoma and osteosarcoma. The main aim of this study was to analyze the effects of treatment with MTX at concentrations comparable to MTX plasma levels in patients treated with high-dose or low-dose MTX. The results showed that treatment with MTX significantly decreased proliferation activity, inhibited the cell cycle at S-phase and induced apoptosis in Daoy and Saos-2 reference cell lines, which were found to be MTX-sensitive. Furthermore, no difference in these effects was observed following treatment with various doses of MTX ranging from 1 to 40 µM. These findings suggest the possibility of achieving the same outcome with the application of low-dose MTX, an extremely important result, particularly for clinical practice. Another important aspect of treatment with high-dose MTX in clinical practice is the administration of leucovorin (LV) as an antidote to reduce MTX toxicity in normal cells. For this reason, the combined application of MTX and LV was also included in our experiments; however, this application of MTX together with LV did not elicit any detectable effect. The expression analysis of genes involved in the mechanisms of resistance to MTX was a final component of our study, and the results helped us to elucidate the mechanisms of the various responses to MTX among the cell lines included in our study.

• MeSH
• antagonisté kyseliny listové aplikace a dávkování   MeSH
• chemorezistence genetika   MeSH
• dihydrofolátreduktasa metabolismus   MeSH
• lidé MeSH
• meduloblastom * enzymologie   genetika   MeSH
• methotrexát aplikace a dávkování   MeSH
• nádorové buněčné linie MeSH
• nádory kostí * enzymologie   genetika   MeSH
• nádory mozečku * enzymologie   genetika   MeSH
• osteosarkom * enzymologie   genetika   MeSH
• polymerázová řetězová reakce s reverzní transkripcí MeSH
• proliferace buněk účinky léků   MeSH
• průtoková cytometrie MeSH
• vztah mezi dávkou a účinkem léčiva MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• Publikační typ
• časopisecké články MeSH
• práce podpořená grantem MeSH

• MeSH
• biologické markery krev   metabolismus   MeSH
• diagnostické techniky a postupy statistika a číselné údaje   trendy   využití   MeSH
• lidé MeSH
• nádory kostí diagnóza   enzymologie   sekundární   MeSH
• prostatický specifický antigen diagnostické užití   metabolismus   MeSH
• urologické nádory diagnóza   komplikace   metabolismus   MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• Publikační typ
• srovnávací studie MeSH

The human checkpoint kinase Chk1 has been suggested as a target for cancer treatment. Here, we show that a new inhibitor of Chk1 kinase, CEP-3891, efficiently abrogates both the ionizing radiation (IR)-induced S and G(2) checkpoints. When the checkpoints were abrogated by CEP-3891, the majority (64%) of cells showed fragmented nuclei at 24 hours after IR (6 Gy). The formation of nuclear fragmentation in IR-treated human cancer cells was directly visualized by time-lapse video microscopy of U2-OS cells expressing a green fluorescent protein-tagged histone H2B protein. Nuclear fragmentation occurred as a result of defective chromosome segregation when irradiated cells entered their first mitosis, either prematurely without S and G(2) checkpoint arrest in the presence of CEP-3891 or after a prolonged S and G(2) checkpoint arrest in the absence of CEP-3891. The nuclear fragmentation was clearly distinguishable from apoptosis because caspase activity and nuclear condensation were not induced. Finally, CEP-3891 not only accelerated IR-induced nuclear fragmentation, it also increased the overall cell killing after IR as measured in clonogenic survival assays. These results demonstrate that transient Chk1 inhibition by CEP-3891 allows premature mitotic entry of irradiated cells, thereby leading to accelerated onset of mitotic nuclear fragmentation and increased cell death.

• MeSH
• apoptóza účinky léků   fyziologie   účinky záření   MeSH
• buněčné jádro * účinky léků   účinky záření   MeSH
• G2 fáze * účinky léků   účinky záření   MeSH
• inhibitory proteinkinas * farmakologie   MeSH
• lidé MeSH
• mitóza fyziologie   účinky léků   účinky záření   MeSH
• nádorové buněčné linie MeSH
• nádory kostí enzymologie   farmakoterapie   patologie   radioterapie   MeSH
• osteosarkom enzymologie   farmakoterapie   patologie   radioterapie   MeSH
• proteinkinasy * metabolismus   MeSH
• radiosenzibilizující látky farmakologie   MeSH
• S fáze * účinky léků   účinky záření   MeSH
• viabilita buněk účinky záření   MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH

• MeSH
• akromegalie MeSH
• Albers-Schönbergova nemoc MeSH
• biologické markery * analýza   chemie   MeSH
• hyperfosfatemie MeSH
• hypofosfatázie MeSH
• klinické enzymatické testy MeSH
• kyselá fosfatasa diagnostické užití   MeSH
• lidé MeSH
• minerálová a kostní nemoc při chronickém onemocnění ledvin enzymologie   krev   MeSH
• nádory kostí enzymologie   chemie   krev   sekundární   MeSH
• nemoci kostí * diagnóza   enzymologie   krev   MeSH
• osteomalacie enzymologie   krev   MeSH
• osteoporóza enzymologie   klasifikace   komplikace   MeSH
• Pagetova kostní nemoc MeSH
• postmenopauzální osteoporóza enzymologie   krev   metabolismus   moč   MeSH
• primární hyperparatyreóza enzymologie   MeSH
• rachitida enzymologie   krev   MeSH
• remodelace kosti MeSH
• věkové faktory MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH

• MeSH
• amylasy krev   MeSH
• biomedicínský výzkum MeSH
• nádory kostí diagnóza   enzymologie   MeSH

• MeSH
• alkalická fosfatasa krev   MeSH
• králíci MeSH
• lidé MeSH
• nádory kostí enzymologie   MeSH
• periodicita MeSH
• Check Tag
• králíci MeSH
• lidé MeSH

• MeSH
• genetický kód MeSH
• nádory kostí enzymologie   metabolismus   MeSH

• MeSH
• alanintransaminasa krev   MeSH
• aldolasa krev   MeSH
• alkalická fosfatasa krev   MeSH
• aspartátaminotransferasy krev   MeSH
• cholinesterasy krev   MeSH
• fosfatasy krev   MeSH
• kreatinkinasa krev   MeSH
• kyselá fosfatasa krev   MeSH
• L-laktátdehydrogenasa krev   MeSH
• lidé MeSH
• nádory kostí enzymologie   MeSH
• osteomyelitida enzymologie   MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH

• MeSH
• alkalická fosfatasa analýza   krev   MeSH
• izoenzymy analýza   MeSH
• metastázy nádorů diagnóza   MeSH
• nádory jater enzymologie   MeSH
• nádory kostí enzymologie   MeSH

• MeSH
• alkalická fosfatasa * krev   MeSH
• ankylózující spondylitida diagnóza   enzymologie   MeSH
• izoenzymy * krev   MeSH
• játra enzymologie   chemie   MeSH
• kosti a kostní tkáň * enzymologie   chemie   MeSH
• lidé MeSH
• metabolické nemoci kostí diagnóza   enzymologie   MeSH
• nádory kostí diagnóza   enzymologie   MeSH
• nemoci kostí diagnóza   enzymologie   etiologie   MeSH
• osteoartróza diagnóza   enzymologie   MeSH
• Pagetova kostní nemoc diagnóza   enzymologie   MeSH
• revmatoidní artritida diagnóza   enzymologie   MeSH
• statistika jako téma MeSH
• střevní sliznice enzymologie   chemie   MeSH
• studie případů a kontrol MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH