In the food industry, in the process of creating new agricultural plant products, and in the testing of anti-cancer drugs there is often a need to assay multiple samples of low molecular weight antioxidants, plant samples and foods rich in antioxidants, with minimal additional costs and low degrees of uncertainty. With these demands in mind, we decided to study the fully automated assay of antioxidants using not only automated sample measurements but also automated processing of samples and application of reagents. The automated pipetting system epMotion 5075 and the automated spectrophotometer BS 400 were chosen for the assay purposes. Five methods were introduced for the automation: 2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) test, ferric reducing antioxidant power (FRAP) method, 2,2’-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid (ABTS) based test, N,N-dimethyl-1,4-diaminobenzene (DMPD) based test and the free radicals method. Samples containing one of the four antioxidants (standard rutin, quercitrin, ferulic and gallic acid) in a range 1–1000 μg/ml were used throughout. All of the tested methods were found suitable for implementation in an automated assay. However, some of them, such as the ABTS test failed to assay all tested antioxidants. The coefficients of determination were also unequal. From the analytical point of view, FRAP methods provided the most reliable results in the automated assay; because of the capacity of the method, approximately 240 samples per hour (one sample per 15 seconds) can be assayed using the automated protocol. We were encouraged by the data received and we expect further interest in the practical performance of such automation. As a mean of testing the robustness of our method, in the next step of our study, oxidative status was assessed in model cell lines derived from prostate cancer (PC-3, PNT1A and 22RV1) that were cultured on ellipticine (0, 0.5, 1, 1.5, 2, 2.5, 5, 7.5, 10, 15 μmol/l) supplemented agar. Antioxidant activity was assessed (DPPH, ABTS, FRAP, DMPD, FR) and calculated on the phenolic antioxidant level (rutin, quercitrin, ferulic and gallic acid), and thus an estimation was formulated of the oxidative stress as a result of the impact of anti-cancer drugs. It can be demonstrated that the new method has wide applicability.

• MeSH
• antioxidancia analýza   MeSH
• antitumorózní látky chemie   metabolismus   toxicita   MeSH
• chemické techniky analytické metody   přístrojové vybavení   statistika a číselné údaje   MeSH
• elipticiny analýza   chemie   metabolismus   MeSH
• financování organizované MeSH
• FRAP MeSH
• kalibrace MeSH
• kyselina gallová analýza   chemie   MeSH
• kyseliny kumarové analýza   chemie   MeSH
• laboratorní automatizace metody   přístrojové vybavení   MeSH
• léky antitumorózní - screeningové testy metody   statistika a číselné údaje   MeSH
• luminiscenční měření MeSH
• nádorové buněčné linie MeSH
• oxidační stres účinky léků   MeSH
• quercetin analogy a deriváty   analýza   chemie   MeSH
• reprodukovatelnost výsledků MeSH
• rutin analýza   chemie   MeSH
• spektrofotometrie metody   přístrojové vybavení   statistika a číselné údaje   MeSH
• viabilita buněk účinky léků   MeSH
• volné radikály analýza   MeSH
• vztahy mezi strukturou a aktivitou MeSH
• Publikační typ
• hodnotící studie MeSH
• statistiky MeSH
• tabulky MeSH

Východiska: Cílem této práce je stanovení proteinů rezistence LRP (Lung Resistance Protein), Pgp (P-glykoprotein), MRP (Multidrug Resistance-Associated Protein), MRP3 a MRP5 a zjištění jejich závislosti na stadiu, stupni diferenciace a histologickém typu ovariálního karcinomu a zhodnocení vztahu proteinů rezistence s chemorezistencí/chemosenzitivitou in vitro stanovenou MTT testem. Soubor pacientek a metodika: Stanovení proteinů rezistence (LRP, Pgp, MRP, MRP3, MRP5) jsme provedli u 64 vzorků ovariálních karcinomů u pacientek operovaných na Porodnické a gynekologické klinice FN HK v letech 2006–2010. Proteiny rezistence jsme stanovili metodou dvoustupňové imunohistochemie. Chemorezistenci/chemosenzitivitu in vitro jsme zhodnotili MTT testem. Výsledky: Prokázali jsme vyšší hodnoty Pgp, MRP, MRP3 a MRP5 u pacientek s pokročilým karcinomem ovaria (st. III + IV) v porovnání s pacientkami s časným stadiem onemocnění (st. I + II). Nejnižší hodnoty LRP, Pgp, MRP jsme zjistili u endometroidního ovariálního karcinomu. Vztah proteinů rezistence se stupněm diferenciace jsme neprokázali. Zaznamenali jsme vyšší hodnoty Pgp, MRP, MRP3 a MRP5 u pacientek s recidivou onemocnění. Prokázali jsme vyšší hodnoty Pgp a MRP u pacientek chemorezistentních in vitro dle MTT testu. Závěr: Ze stanovených proteinů rezistence se nejperspektivněji u karcinomu ovaria jeví Pgp a MRP. Stanovení Pgp a MRP by mohlo přispět k predikci léčebné odpovědi na primární chemoterapii u pacientek s karcinomem ovaria.

Background: To evaluate the correlation of resistance proteins LRP (Lung Resistance Protein), Pgp (P-glycoprotein), MRP (Multidrug Resistance-Associated Protein), MRP3 a MRP5 with stage, grade and histological type. To asses correlation of these resistance proteins with drug resistance/drug sensitivity in vitro by means of the MTT assay in ovarian cancer patients. To find the clinical outcome of these data. Patients and Methods: 64 women with epithelial ovarian cancer who underwent primary surgery in 2006–2010 had specimens stained with imunohistochemistry for LRP, MRP, MRP3, MRP5 and Pgp and MTT assay (MTT-(3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide). Results: Patients with late ovarian cancer had a higher Pgp, MRP, MRP3 and MRP5 level compared to ovarian cancer patients with early stage ovarian cancer. No correlation of resistance proteins with grading was found. Patients with high Pgp and MRP expression had significantly shorter progression-free survival. Patients with drug resistance in vitro by means of the MTT assay had higher Pgp and MRP expression. Conclusion: P-glycoprotein and MRP may be useful predictor for outcome of primary chemotherapy in patients with ovarian cancer.

• Klíčová slova
• p170, MTT test, MRP, LRP,
• MeSH
• adjuvantní chemoterapie MeSH
• chemorezistence * účinky léků   MeSH
• cytostatické látky aplikace a dávkování   farmakologie   MeSH
• geny MDR MeSH
• histologické techniky MeSH
• imunohistochemie MeSH
• léky antitumorózní - screeningové testy metody   statistika a číselné údaje   MeSH
• lidé MeSH
• mnohočetná léková rezistence účinky léků   MeSH
• nádorové biomarkery analýza   MeSH
• nádorové buňky kultivované účinky léků   MeSH
• nádory vaječníků * farmakoterapie   chirurgie   patologie   MeSH
• P-glykoprotein analýza   MeSH
• přežití po terapii bez příznaků nemoci MeSH
• proteiny spojené s mnohočetnou rezistencí k lékům * analýza   MeSH
• protokoly antitumorózní kombinované chemoterapie terapeutické užití   MeSH
• reprodukovatelnost výsledků MeSH
• staging nádorů MeSH
• statistika jako téma MeSH
• stupeň nádoru MeSH
• terapie neúspěšná MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• ženské pohlaví MeSH
• Publikační typ
• práce podpořená grantem MeSH
• techniky in vitro MeSH

Východiská: Translačná medicína predstavuje medicínsky odbor, ktorý zahŕňa základný výskum a vývoj nových diagnostických a terapeutických stratégií pre klinickú prax. Tento vedecký príspevok je zameraný na naše doterajšie skúsenosti v oblasti testovania chemorezistencie onkologických pacientov. Materiál a metódy: Od roku 2005 sme odobrali vzorky 71 pacientov s leukemickým ochorením (AML, ALL a CML) a 92 pacientov so solídnymi tumormi (bronchogénne karcinómy a karcinómy GITu). Testovanie in vitro rezistencie malígnych buniek na liečivá sme vykonávali pomocou cytotoxického metyl-tiazol tetrazoliového (MTT) testu. Výsledky: Na základe stanovenia LC50 (letálna koncentrácia liečiva, ktorá usmrcuje 50 % bunkovej populácie) sme zistili, že pacienti s akútnou myeloblastickou leukémiou vykazujú väčší stupeň rezistencie oproti pacientom s akútnou lymfoblastickou leukémiou. U pacientov s bronchogénnymi karcinómami sa primárna rezistencia prejavila pri cisplatine v 28 percentách, paklitaxelu (36 %), vinkristíne (50 %), etopozide (56 %), vinorelbíne (57 %), topotekane (62 %), gemcitabíne (77 %) a dakarabazíne v 86 % prípadov testovaných vzoriek. Záver: Z výsledkov MTT testu karcinómov GITu (karcinóm hrubého čreva, rektosigmoidálneho spojenia a konečníka) vyplýva predovšetkým relatívna úspešnosť cisplatiny (okrem karcinómu žalúdka), ktorá je porovnateľná so základným cytostatikom 5-fluorouracilom. Samotný MTT test sa aj napriek niektorým limitujúcim faktorom (nedostatočný počet vitálnych buniek, možná kontaminácia nenádorovými bunkami a pod.) ukazuje za spoľahlivú in vitro metódu stanovenia rezistencie nádorových buniek na klinicky používané liečiva.

Backgrounds: Translational medicine is a medical field encompassing basic research and development of new diagnostic and therapeutic strategies for clinical practice. The present scientific paper focuses on our previous experience in the field of chemoresistance testing in patients with oncological diseases. Material and Methods: Since 2005, we sampled 71 patients with a leukaemia (AML, ALL and CML) and 92 patients with a solid tumour (lung and gastrointestinal tract cancer). Malignant cell in vitro drug resistance testing was carried out using cytotoxic methyl-thiazol tetrazolium (MTT) assay. Results: Based on the LC50 (lethal concentration of a drug killing 50% of cell population), we found that patients with acute myeloblastic leukaemia exhibit a greater degree of resistance than patients with acute lymphoblastic leukaemia. In patients with bronchogenic carcinomas, primary resistance to cisplatin was identified in 28 % of tested samples, paclitaxel 36%, vincristine 50%, etoposide 56%, vinorelbine 57%, topotecan 62%, gemcitabine 77% and dacarbazine 86%. Conclusion: In vitro tests with gastrointestinal tract cancers also suggested high effectiveness of cisplatin (with the exception of gastric carcinoma) that was comparable with 5-fluorouracil. Even though the MTT assay has some limitations (insufficient number of vital cells, possible contamination by non-malignant cells, etc.), this in vitro method proved very effective in testing malignant cell resistance to clinically used cytostatics.

• MeSH
• aktivace lymfocytů MeSH
• antitumorózní látky farmakokinetika   terapeutické užití   MeSH
• bronchogenní karcinom farmakoterapie   chemie   MeSH
• chemorezistence MeSH
• cytotoxické testy imunologické metody   MeSH
• dospělí MeSH
• financování organizované MeSH
• gastrointestinální nádory farmakoterapie   chemie   MeSH
• hematologické nádory farmakoterapie   krev   MeSH
• inhibiční koncentrace 50 MeSH
• kohortové studie MeSH
• kultivované buňky MeSH
• léky antitumorózní - screeningové testy metody   statistika a číselné údaje   MeSH
• lidé středního věku MeSH
• lidé MeSH
• lymfocyty cytologie   imunologie   účinky léků   MeSH
• prediktivní hodnota testů MeSH
• senioři nad 80 let MeSH
• senioři MeSH
• tetrazoliové soli diagnostické užití   MeSH
• thiazoly diagnostické užití   MeSH
• viabilita buněk účinky léků   MeSH
• Check Tag
• dospělí MeSH
• lidé středního věku MeSH
• lidé MeSH
• mužské pohlaví MeSH
• senioři nad 80 let MeSH
• senioři MeSH
• ženské pohlaví MeSH
• Publikační typ
• techniky in vitro MeSH

• MeSH
• finanční podpora výzkumu jako téma MeSH
• hodnocení léčiv MeSH
• léková rezistence MeSH
• léky antitumorózní - screeningové testy metody   statistika a číselné údaje   využití   MeSH
• lidé MeSH
• lokální recidiva nádoru mortalita   terapie   MeSH
• nádory farmakoterapie   MeSH
• ovarium účinky záření   MeSH
• progrese nemoci MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• ženské pohlaví MeSH
• Publikační typ
• techniky in vitro MeSH

• MeSH
• antitumorózní látky farmakologie   metabolismus   MeSH
• chemorezistence fyziologie   MeSH
• lékařská onkologie metody   MeSH
• léky antitumorózní - screeningové testy metody   normy   statistika a číselné údaje   MeSH
• lidé MeSH
• nádorové buňky kultivované účinky léků   MeSH
• nežádoucí účinky léčiv metabolismus   MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• Publikační typ
• přehledy MeSH