Smíšená lymfocytární reakce (MLC) T-lymfocytů s dendritickými buňkami je jedním ze základních nástrojů studia imunologických mechanismů. Tato práce přináší popis nové metodiky hodnocení alogenní a autologní MLC pomocí průtokové cytometrie a diferenciálního gatingu. Metoda je založena na časově omezené akvizici událostí a na jejich rozdělení podle hodnot forward a side scatteru. Gatována je jednak populace všech živých buněk (R1), dále populace živých neproliferujících buněk (R2) a populace mrtvých/apoptotických buněk (R4). Pomocí fluorescenčních mikrosfér (R3) je navíc možno vypočítat absolutní množství buněk ve stanoveném gatu. Pomocí 7-AAD exkluze bylo ověřeno, že zhruba 90 % 7-AAD pozitivních buněk se promítá do gatu R4, navíc poměr R1: R2 výtečně koreluje s procentem buněk pozitivních na aktivační/proliferační marker CD71. Příklady dalších výsledků dosažených touto metodikou jsou uvedeny v textu. Vzhledem k tomu, že metoda diferenciálního gatingu ve své základní podobě nevyžaduje užití žádné fluorescenční protilátky, umožňuje rychlý a levný skríning velkého množství vzorků bez použití radioaktivně značených nukleotidů.
Mixed lymphocyte reaction (MLC) of T-lymphocytes with dendritic cells is one of the basic tools for studying of immune reaction mechanisms. This work describes a new method of evaluation of allogeneic and autologous MLC by flow cytometry and differential gating. This method is based on fixed time acquisition of events and their sorting according to their forward and side scatter properties. Differential gating distinguishes populations of all living cells (R1), living nonproliferating cells (R2) and dead/apoptotic cells (R4). Addition of fluorescence microspheres (R3) enables the calculation of absolute number of cells in a given sample volume. Using the method of 7-AAD exclusion, we have shown that approximately 90% of 7-AAD positive cells project into the R4 gate. Moreover, there was an excellent correlation between the R1: R2 ratio and the percentage of cells positive for activation/proliferation marker CD71. The method of differential gating in its basic version does not require use of any fluorescent antibody and therefore is suitable for rapid screening of large number of samples at reasonable cost and without the use of radiolabeled nucleotides.
Practical approach series
3rd ed. xx., 276 s. : il.
OBJECTIVES: Risk-based stratification approaches using measurable residual disease (MRD) successfully help to identify T-acute lymphoblastic leukemia (T-ALL) patients at risk of relapse, whose treatment outcomes are very poor. Because of T-ALL heterogeneity and rarity, a reliable and standardized approach for flow cytometry (FC)-based MRD measurement and analysis is often missing. METHODS: Within the international AIEOP-BFM-ALL-FLOW study group we made a consensus on markers and a standard operating procedure for common 8- and 12-color T-ALL MRD panels. Custom manufactured tubes with dried backbone antibodies were tested in parallel to local FC standards. RESULTS: Altogether, 66 diagnostic and 67 day 15 samples were analyzed. We designed two guided MRD gating strategies to identify blast cells in parallel to expert-based evaluation. We proved that the optimized tubes allowed the correct identification of blast cells in all diagnostic samples. Both, expert and guided analysis of day 15 samples correlated to local standard (Spearman R=0.98 and R=0.94, respectively). Only in 2 (3 %) and 4 (6 %) patients expert gating and guided analysis results were substantially discordant from local standard, respectively. The cases that require an individualized approach may be partially identified at diagnosis through a rare immunophenotype or mixed phenotype acute leukemia status. CONCLUSIONS: Our work shows that standardized operating procedures together with guided analysis are applicable in a great majority of T-ALL cases. Further improvement of MRD detection is needed, as in some cases an individualized analytical approach is still required due to the challenging nature of the T-ALL phenotype.
- MeSH
- Child MeSH
- Infant MeSH
- Consensus MeSH
- Humans MeSH
- Precursor T-Cell Lymphoblastic Leukemia-Lymphoma * diagnosis pathology MeSH
- Adolescent MeSH
- Child, Preschool MeSH
- Flow Cytometry * standards methods MeSH
- Neoplasm, Residual * diagnosis MeSH
- Check Tag
- Child MeSH
- Infant MeSH
- Humans MeSH
- Adolescent MeSH
- Male MeSH
- Child, Preschool MeSH
- Female MeSH
- Publication type
- Journal Article MeSH
- Multicenter Study MeSH
Imunofenotypizace myelomových buněk přináší dostatek informací k charakterizaci a odlišení těchto heterogenních neoplastických plazmocytů od jejich normálních protějšků a své uplatnění tedy nalézá v diferenciální diagnostice. Stanovení antigenního profilu PC může též napomoci identifikaci prognostických markerů, které by vedly jednak k jednoznačnému stanovení diagnózy a určení pravděpodobnosti progrese u asymptomatických monoklonálních gamapatií, ale také k případnému hodnocení minimální reziduální choroby či účinnosti léčby u mnohočetného myelomu. Je snahou Evropské myelomové sítě (European Myeloma Network), EMN, sjednotit a standardizovat fl owcytometrické vyšetření plazmocytů v rámci monoklonálních gamapatií.
Immunophenotyping of myeloma cells is used to characterize the malignant plasma cells and to distinguish them from their normal counterparts. Flow cytometry is mostly used for the diagnosis of plasma cell proliferations but a detailed analysis of plasma cell immunophenotype can identify disease markers that are associated with the progression of monoclonal gammopathy of unknown signifi cance to multiple myeloma (MM), the prognosis of MM, the response to treatment, and the presence of minimal residual disease. The aim of the European Myeloma Network (EMN) is to unify and standardize immunophenotyping methods for the analysis of plasma cells in monoclonal gammopathies.
- MeSH
- Immunophenotyping MeSH
- Bone Marrow MeSH
- Humans MeSH
- Multiple Myeloma * genetics physiopathology MeSH
- Plasma Cells * cytology MeSH
- Flow Cytometry * methods MeSH
- Check Tag
- Humans MeSH
- Publication type
- Research Support, Non-U.S. Gov't MeSH
Practical approach series ; 142
3rd ed. [265] s. : il.
- MeSH
- Flow Cytometry MeSH
- Conspectus
- Buněčná biologie. Cytologie
- NML Fields
- cytologie, klinická cytologie
279 s.
- Keywords
- Cytometrie průtoková,
- MeSH
- Flow Cytometry MeSH
- Publication type
- Handbook MeSH
- Conspectus
- Patologie. Klinická medicína
- NML Fields
- chemie, klinická chemie
- cytologie, klinická cytologie
1st ed. 308 s. : il.
- Keywords
- Cytometrie průtoková,
- MeSH
- Cytodiagnosis MeSH
- Flow Cytometry MeSH
- Publication type
- Monograph MeSH
- Conspectus
- Buněčná biologie. Cytologie
- NML Fields
- cytologie, klinická cytologie
2nd ed. xix, 344 s.., 18 s. příl. : il., tab. ; 29 cm + 1 CD-ROM
- MeSH
- Diagnosis, Differential MeSH
- Hematopoietic Stem Cells pathology MeSH
- Immunophenotyping MeSH
- Flow Cytometry methods MeSH
- Publication type
- Monograph MeSH
- Conspectus
- Buněčná biologie. Cytologie
- NML Fields
- hematologie a transfuzní lékařství
- biologie
